肠炎沙门氏菌rpoH基因缺陷株的构建及其热激响应特性

构建肠炎沙门氏菌Salmonella enteritidis IFO3313株的rpoH基因缺陷株IFO3313-ΔrpoH,比较不同温度下缺陷株与野生株的热激响应特性。利用λ-Red重组系统对Salmonella enteritidisIFO3313的rpoH基因进行缺失突变,并使用PCR方法对其进行验证,在此基础上使用不同培养基对缺陷株与野生株进行不同温度下的热激应答结果和亚致死热损伤修复能力的考察:野生株比缺陷株有更强的热激耐受能力,在DHL平板上对亚致死热损伤的肠炎沙门氏菌的分离检测可能具有假阴性,野生株比缺陷株在TSYA平板上有更强的修复能力。利用λ-Red重组系统敲除了肠炎沙门氏菌rpoH基因,有助于了解肠炎沙门氏菌的热激亚致死及其修复机制,对亚致死状态食源性病原微生物的检测做出初步研究。

热休克转录因子（σ^（32））基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

用ＰＣＲ方法获得大肠杆菌热休克蛋白转录因子σ３２的编码基因ｒｐｏＨ，并将其克隆至含有Ｐｔａｃ启动子的表达载体ｐＵＨＥ中。经ＩＰＴＧ诱导，在ｒｐｏＨ缺陷菌株ＳＧ１３００９中高效表达Ｃ－端融合有６个组氨酸的σ３２，表达量为菌体总蛋白的７．６％。３５Ｓ细胞内掺入实验表明：即使在较低的温度下，表达产物σ３２－（Ｈｉｓ）６也能导致热休克蛋白如ＧｒｏＥＬ、ＤｎａＫ。