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鼠伤寒沙门菌rpoN基因缺失株构建及生物学特性研究 被引量:5
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作者 苏洋洋 黄骏 +5 位作者 吴白 印云聪 刘珍 陈素娟 彭大新 刘秀梵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期771-778,共8页
为了探索σ因子RpoN在鼠伤寒沙门菌生物被膜形成过程中的作用,对两株生物被膜形成能力较强的鼠伤寒沙门菌利用Red同源重组系统构建rpoN基因缺失株,利用原核表达载体构建回复株;比较野生株、缺失株和回复株的生物被膜形成能力和对环境应... 为了探索σ因子RpoN在鼠伤寒沙门菌生物被膜形成过程中的作用,对两株生物被膜形成能力较强的鼠伤寒沙门菌利用Red同源重组系统构建rpoN基因缺失株,利用原核表达载体构建回复株;比较野生株、缺失株和回复株的生物被膜形成能力和对环境应激抵抗力的差异,并通过建立的csgA和bcsA基因实时定量PCR方法检测编码生物被膜成分基因的表达差异。结果显示,与野生株相比,△rpoN缺失株生物被膜形成能力增强,主要由卷曲菌毛表达量显著增加引起。回复株生物被膜形成能力与野生株相似。△rpoN缺失株在酸性应激和碱性应激条件下对外界环境应激的抵抗力均显著增强。RpoN为鼠伤寒沙门菌中生物被膜形成相关σ因子之一,为进一步研究沙门菌生物被膜形成的调控机制提供理论基础。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 生物被膜 rpon基因 突变株 环境应激
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野油菜黄单胞菌两个rpoN基因的突变和功能分析 被引量:2
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作者 李恒聪 蒋瑞萍 +2 位作者 姜伯乐 唐东阶 唐纪良 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2006年第1期30-37,共8页
细菌的σ54(R poN)是一类可选择性识别启动子序列的σ因子,主要参与环境适应、细胞生理过程等,如氮代谢、鞭毛和菌毛的生物合成。在一些病原菌中,σ54也与致病性密切有关。为了明确σ54在野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(X cc)中是否参与... 细菌的σ54(R poN)是一类可选择性识别启动子序列的σ因子,主要参与环境适应、细胞生理过程等,如氮代谢、鞭毛和菌毛的生物合成。在一些病原菌中,σ54也与致病性密切有关。为了明确σ54在野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(X cc)中是否参与致病过程,用同源单交换定点突变方法,将X cc 8004中的两个σ54编码基因rp oN 1(XC 1256)和rp oN 2(XC 2168)做单突变及双突变。突变体表型分析结果表明,单个和同时突变rp oN 1和rp oN 2基因均不影响野油菜黄单胞菌的正常生长,对胞外多糖(EPS)产生、胞外酶的合成也无明显影响。植株致病性检测结果表明,rp oN 1和rp oN 2基因的单突变或双突变体的致病力与野生型菌株没有显著差异,表明野油菜黄单胞菌野油菜致病变种的致病过程不需要σ54因子参与。 展开更多
关键词 Xcc rpon 双突变 致病性
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RpoN和RpoS参与细菌鞭毛合成与趋化调控的研究进展 被引量:3
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作者 刘晓东 吴港 +3 位作者 杨智敏 燕永亮 林敏 张云华 《江苏农业科学》 北大核心 2013年第12期11-16,共6页
在自然界中,细菌需要靠趋化运动来趋利避害以获得有利的生存环境。鞭毛作为细菌的运动器官,是趋化的前提与基础,鞭毛的合成组装是一个高度有序、耗能的等级调控过程,每一等级的基因表达都需要多个调控因子参与。RpoN对鞭毛合成基因的表... 在自然界中,细菌需要靠趋化运动来趋利避害以获得有利的生存环境。鞭毛作为细菌的运动器官,是趋化的前提与基础,鞭毛的合成组装是一个高度有序、耗能的等级调控过程,每一等级的基因表达都需要多个调控因子参与。RpoN对鞭毛合成基因的表达为正调控,鞭毛调节子FleQ作为RpoN的激活增强子,与RpoN协同调控了鞭毛基因的转录与表达,相反,RpoS负调控包括鞭毛调控σ因子FliA在内的鞭毛合成基因的转录与表达,且rpoS基因的缺失导致鞭毛合成相关基因的转录水平显著上调。RpoS能够负调控诸多鞭毛基因的表达可能是通过调控鞭毛主调节子FleQ或鞭毛调控σ因子FliA来实现的;亦可能是由于RpoS和其他的σ因子竞争有限的核心聚合酶造成的。本文综述了细菌的鞭毛合成与趋化中不同σ因子之间存在复杂的交叉调控。 展开更多
关键词 rpon RPOS 鞭毛 趋化 调控
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细菌RpoN蛋白的研究进展
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作者 王冬雪 夏明 +1 位作者 孟庆峰 单晓枫 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第2期114-118,共5页
RpoN蛋白是RNA聚合酶的一种σ因子,随着近年来对于RpoN蛋白基因功能的探索,其多种功能被发现,如胁迫应答、调控氮源及碳源的利用、调控细菌运动性及毒力等。本文对不同种属细菌中RpoN蛋白基因的功能进行整理,旨在为深入研究不同细菌Rpo... RpoN蛋白是RNA聚合酶的一种σ因子,随着近年来对于RpoN蛋白基因功能的探索,其多种功能被发现,如胁迫应答、调控氮源及碳源的利用、调控细菌运动性及毒力等。本文对不同种属细菌中RpoN蛋白基因的功能进行整理,旨在为深入研究不同细菌RpoN蛋白功能奠定基础。 展开更多
关键词 rpon蛋白 转录 表达调控
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The sigma 54 genes rpoN1 and rpoN2 of Xanthomonas citri subsp. citri play different roles in virulence, nutrient utilization and cell motility
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作者 Gibson Kamau Gicharu SUN Dong-ling +4 位作者 HU Xun FAN Xiao-jing ZHUO Tao WU Chuan-wan ZOU Hua-song 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2016年第9期2032-2039,共8页
The sigma factor 54(σ^(54)) controls the expression of many genes in response to nutritional and environmental conditions. There are two σ^(54) genes, rpo N1(XAC1969) and rpo N2(XAC2972), in Xanthomonas citri subsp.... The sigma factor 54(σ^(54)) controls the expression of many genes in response to nutritional and environmental conditions. There are two σ^(54) genes, rpo N1(XAC1969) and rpo N2(XAC2972), in Xanthomonas citri subsp. citri. To investigate their functions, the deletion mutants ΔrpoN1, ΔrpoN2 and ΔrpoN1N2 were constructed in this study. All the mutants delayed canker development in low concentration inoculation in citrus plants. The bacterial growth of mutants was retarded in the medium supplemented with nitrogen and carbon resources. Under either condition, the influence degree caused by deletion of rpoN 2 was larger than the deletion of rpoN 1. Remarkably, the mutant ΔrpoN 1 showed a reduction in cell motility, while the mutant Δrpo N2 increased cell motility. Our data suggested that the rpoN 1 and rpoN 2 play diverse roles in X. citri subsp. citri. 展开更多
关键词 柑桔溃疡病菌 细胞活力 多基因 养分利用率 亚种 缺失突变体 毒力
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固氮施氏假单胞菌RpoN蛋白对鞭毛合成的影响 被引量:1
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作者 李耘 刘晓东 +3 位作者 李琴 战嵛华 燕永亮 陆伟 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期33-41,共9页
选择性σ因子σ^(54)(又称为RpoN)参与到许多细菌特定基因的转录起始过程,如氮同化基因、四碳二羧酸转运基因以及鞭毛基因。为了研究施氏假单胞菌A1501(Pseudomonas stutzeri,A1501)中σ因子RpoN对鞭毛合成的影响,构建了A1501的rpoN缺... 选择性σ因子σ^(54)(又称为RpoN)参与到许多细菌特定基因的转录起始过程,如氮同化基因、四碳二羧酸转运基因以及鞭毛基因。为了研究施氏假单胞菌A1501(Pseudomonas stutzeri,A1501)中σ因子RpoN对鞭毛合成的影响,构建了A1501的rpoN缺失突变株与功能回补株,并对野生型、突变株与回补株的鞭毛结构、swimming运动、生物膜形成、根际定殖能力以及鞭毛基因的表达水平进行了比较分析。结果表明:rpo N突变株丧失了鞭毛结构与swimming运动能力,根际定殖与生物膜形成能力相对野生型分别下降了25倍与10倍;此外,rpoN缺失后A1501中大量鞭毛基因发生显著下调;启动子分析发现RpoN除了可能参与调控Ⅱ级、Ⅲ级鞭毛基因外,还可能调控一级基因fli A以及四级基因fliC。以上结果说明RpoN在不同调控等级影响A1501鞭毛的合成,进而影响该菌运动、生物膜形成、根际定殖这些与水稻建立起联合固氮体系息息相关的过程。 展开更多
关键词 施氏假单胞菌A1501 rpon 鞭毛合成 根际定殖 生物膜
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维氏气单胞菌rpoN基因缺失株的构建及部分生物学特性分析 被引量:1
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作者 蔡金双 王冬雪 +3 位作者 单晓枫 康元环 张冬星 田佳鑫 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期753-762,共10页
为了研究rpoN基因对维氏气单胞菌致病性的影响,采用同源重组的方法构建该基因缺失株。以该菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增rpoN基因的上、下游同源臂;以上、下游同源臂胶回收产物为模板,P1-1/P2-2为引物进行重叠PCR扩增相应目的片段,从... 为了研究rpoN基因对维氏气单胞菌致病性的影响,采用同源重组的方法构建该基因缺失株。以该菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增rpoN基因的上、下游同源臂;以上、下游同源臂胶回收产物为模板,P1-1/P2-2为引物进行重叠PCR扩增相应目的片段,从而获得rpoN上下游同源臂连接片段;将获取的连接片段连接pRE112,将连接产物转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取重组质粒pRE112-rpoN,经同源重组和抗生素筛选获得维氏气单胞菌rpoN基因缺失株ΔrpoN。同时,依然利用重叠PCR将目的基因片段与启动子相连接,而后与质粒p BBR-MCS相连接,最后将重组质粒pBBR-MCS-rpoN转化至缺失株ΔrpoN中,构建互补株C-rpoN。PCR鉴定和测序结果显示,成功构建出维氏气单胞菌rpoN基因缺失株ΔrpoN和互补株C-rpoN。生物学特性分析试验结果表明rpoN的缺失导致维氏气单胞菌TH0426菌落形态改变、生物被膜形成能力下降、动物致病性减弱,鞭毛断裂,运动性丧失。本研究中成功构建了维氏气单胞菌TH0426株rpoN基因的缺失株ΔrpoN,为进一步研究维氏气单胞菌减毒疫苗和rpoN基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 维氏气单胞菌 rpon基因 基因敲除 生物学特性
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维氏气单胞菌TH0426株rpoN蛋白的生物学特性分析及原核表达 被引量:1
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作者 王冬雪 夏明 +2 位作者 姚贵哲 孟庆峰 单晓枫 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第1期17-21,26,154,共7页
为了深入研究维氏气单胞菌毒力蛋白rpoN的功能,试验采用邻近法构建rpoN基因的系统进化树,对rpoN蛋白进行生物学特性分析,PCR法扩增rpoN基因,将其与表达载体pET-32a(+)连接,再将连接产物转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表... 为了深入研究维氏气单胞菌毒力蛋白rpoN的功能,试验采用邻近法构建rpoN基因的系统进化树,对rpoN蛋白进行生物学特性分析,PCR法扩增rpoN基因,将其与表达载体pET-32a(+)连接,再将连接产物转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达和制备抗体,测定抗体效价并进行Western-blot检测。结果表明:rpoN蛋白稳定,属于胞内蛋白,是全α型蛋白。重组表达质粒pET-32a-rpoN在大肠杆菌中成功表达,在约58 ku处可见明亮条带,rpoN多克隆抗体效价为1∶279 000,具有特异性。说明表达的rpoN蛋白具有一定的免疫原性。 展开更多
关键词 维氏气单胞菌 rpon基因 生物信息学分析 Western-blot检测 原核表达 免疫反应
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