鼠伤寒沙门菌rpoN基因缺失株构建及生物学特性研究

为了探索σ因子RpoN在鼠伤寒沙门菌生物被膜形成过程中的作用,对两株生物被膜形成能力较强的鼠伤寒沙门菌利用Red同源重组系统构建rpoN基因缺失株,利用原核表达载体构建回复株;比较野生株、缺失株和回复株的生物被膜形成能力和对环境应激抵抗力的差异,并通过建立的csgA和bcsA基因实时定量PCR方法检测编码生物被膜成分基因的表达差异。结果显示,与野生株相比,△rpoN缺失株生物被膜形成能力增强,主要由卷曲菌毛表达量显著增加引起。回复株生物被膜形成能力与野生株相似。△rpoN缺失株在酸性应激和碱性应激条件下对外界环境应激的抵抗力均显著增强。RpoN为鼠伤寒沙门菌中生物被膜形成相关σ因子之一,为进一步研究沙门菌生物被膜形成的调控机制提供理论基础。

维氏气单胞菌TH0426株rpoN蛋白的生物学特性分析及原核表达

为了深入研究维氏气单胞菌毒力蛋白rpoN的功能,试验采用邻近法构建rpoN基因的系统进化树,对rpoN蛋白进行生物学特性分析,PCR法扩增rpoN基因,将其与表达载体pET-32a(+)连接,再将连接产物转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达和制备抗体,测定抗体效价并进行Western-blot检测。结果表明:rpoN蛋白稳定,属于胞内蛋白,是全α型蛋白。重组表达质粒pET-32a-rpoN在大肠杆菌中成功表达,在约58 ku处可见明亮条带,rpoN多克隆抗体效价为1∶279 000,具有特异性。说明表达的rpoN蛋白具有一定的免疫原性。