植物病毒载体介导的sMMO-C在蚕豆植物中的表达

构建了可溶性甲烷单加氧酶C亚单位(soluble methane monoxygenase-C component,sMMO-C)基因和绿色荧光蛋白-S65T(green fluorescence protein,GFP-S65T)基因的融合基因sMMO-C/GFP-S65T。将融合基因sMMO-C/GFP-S65T克隆到三叶草黄脉病毒(glover yellow vein virus,ClYVV)侵染性植物表达载体pClYVV/CP/W的NIb/CP基因之间,构建了侵染性重组病毒克隆pCV-mmoC/GFP-S65T。RT-PCR检测结果表明,sMMO-C/GFP-S65T在子代病毒基因组中获得了转录。用GFP抗体进行蛋白质杂交(western blotting,WB),检测到25kDa左右的GFP蛋白,这一结果表明GFP蛋白在被pCV-mmoC/GFP-S65T侵染的寄主植物中获得了表达,并被病毒自身编码的NIa蛋白酶从病毒聚合蛋白及sMMO-C/GFP-S65T融合蛋白中自动切断。可见,sMMO-C亚单位蛋白在植物中获得了表达,因在sMMO-C/GFP-S65T中sMMO-C位于GFP上游。