UPLC-PDA法同时测定柴胡中3种皂苷的含量

目的建立同时测定柴胡中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d的UPLC方法。方法采用ACQUITY UPLC BEH-C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱;以乙腈为流动相A,水为流动相B,梯度洗脱(0~18 min,25%~90%A;18~20 min,90%~90%A);柱温:30℃;流速:0.3 ml/min;检测波长:200 nm;进样量:5μl。结果柴胡中3种成分20 min内实现分离,柴胡皂苷a、柴胡皂苷c和柴胡皂苷d分别在0.65~8.45μg(r=0.9991),0.65~8.45μg(r=0.9995),0.73~9.49μg(r=0.9990)范围内与色谱峰峰面积线性关系良好,加样回收率的分别为99.41%(RSD=0.65%),97.59%(RSD=4.68%),95.55%(RSD=3.28%)。结论此法操作简单,结果准确,重复性好,可用于中药柴胡中3种皂苷类成分的含量测定。

Saikosaponin-b regulates the proliferation and apoptosis of HepG2 cells by targeting the MACC1/c-Met/Akt signaling pathway

OBJECTIVE Metastasis-associated in colon cancer-1(MACC1)is an oncogene that has been newly identified.It promotes tumor proliferation and invasion via the MET pathway.Our study investigated the effects of Saikosaponin-b(SS-b)on the proliferation and apoptosis of HepG2 cells and its regulation on MACC1/c-Met/Akt signaling pathway.METHODS HepG2 cells were treated with SS-b(10-800 g·L^(-1))for 48 h in vitro.The CCK-8 assay was used to assess cell proliferation,and cell apoptosis was determined by Hoechst33258 staining,AnnexinⅤ/PI staining and caspase 3 assay.RT-PCR was used to examine the expression of MACC1,c-MET and hepatocyte growth factor(HGF)mR NA.MACC1 protein was detected by Western blot and immunohistochemistry.The protein expressions of p-cMET,c-MET,p-AKT,AKT,p-BAD,BAD were measured by Western blot.RESULTS SS-b inhibited the growth of HepG2 cells in dose-dependent way and induced cell apoptosis significantly.HepG2 cells showed karyopyknosis,fragmentation and fluorescence highlight in SS-b treatment group.FCM results showed that apoptosis rate of HepG2 cells increased with SS-b concentration.The immunofluorescence results showed that the MACC1 expression decreased significantly in HepG2 cells treated with SS-b.The expression levels of MACC1,c-MET and HGF mR NA in HepG2 cells were significantly inhibited by SS-b.SS-b also significantly decreased the protein expressions of MACC1,p-c-MET and p-AKT while increased the expression of p-BAD and caspase 3 in HepG2 cells(P<0.05).CONCLUSION SS-b inhibited the proliferation and induced the apoptosis of HepG2 cells by targeting the MACC1/c-Met/Akt signaling pathway.

柴胡醋制前后柴胡皂苷a、b_2、c、d的LC-MS/MS法测定及比较

采用LC-MS/MS法对醋制前后柴胡中的Ⅰ型柴胡皂苷a、c、d与Ⅱ型柴胡皂苷b2进行含量测定,色谱柱为KinetexTMC18(50 mm×4.6 mm,2.6μm),流动相为水-乙腈-甲醇三元梯度洗脱;检测系统为电喷雾离子源(ESI)-三重四级杆质谱仪,ESI负离子模式检测,待测成分与内标均采用负离子加合物作为选择性反应监测(SRM)的前体离子,以[M+HCOO]-/[M-H]-作为SRM检测离子对。方法学验证结果显示,所建立的方法灵敏度高、专属性好,可作为柴胡生品及醋炙品的质量控制方法。含量测定结果表明,醋制过程引发了由Ⅰ型柴胡皂苷向Ⅱ型的转化,醋制后柴胡皂苷b2的含量明显增加,对柴胡醋炙品的质量控制应同时考虑对Ⅰ、Ⅱ型柴胡皂苷柴胡皂苷进行测定。

23种国产柴胡属植物中柴胡皂苷a、c、d含量的RP-HPLC测定

目的:建立RP-HPLC法,分离和测定中国23种61个产地的柴胡属植物样品中柴胡皂苷a、c、d的含量。方法:采用C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL·min～1,检测波长210 nm。结果:不同品种柴胡以及相同品种、不同产地柴胡中的柴胡皂苷a、c、d含量差异悬殊。结论:本研究所建立的HPLC方法适用于柴胡属植物中柴胡皂苷a、c、d定量分析,结果准确可靠。

柴胡总皂甙及柴胡皂甙a、c、d对MES惊厥小鼠的影响

目的:观察柴胡总皂甙(saikosaponins)及柴胡皂甙a(saikosaponina,SSa)、柴胡皂甙c(saikosaponinc,SSc)、柴胡皂甙d(saikosaponind,SSd)的抗惊厥作用。方法:采用最大电休克发作(MES)导致小鼠惊厥模型进行试验,记录小鼠惊厥数。结果:柴胡总皂甙100mg/kg、200mg/kg和300mg/kgig均可以显著降低小鼠MES惊厥发生率;SSa1.09mg/kg、2.18mg/kgip也均可显著降低小鼠MES惊厥发生率,而SSc、SSd作用不明显。结论:柴胡总皂甙和SSa具有抗小鼠MES惊厥作用,而SSc、SSd抗小鼠MES惊厥作用不明显。

HPLC法测定银州柴胡中五种皂苷的含量

首次建立HPLC法同时测定银州柴胡中柴胡皂苷a、c、d、e和f五种皂苷含量的方法。流动相为乙腈-水梯度洗脱,柱子为HibarRT RP-18(4.6 mm×250 mm,5μm),流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长210 nm。柴胡皂苷a、c、d、e和f的线性范围及相关系数分别为:21.78～43.56μg(r=0.9993),3.94～9.85μg(r=0.9994),20.68～51.70μg(r=0.9998),1.67～5.57μg(r=0.9997),1.91～6.70μg(r=0.9992);柴胡皂苷a、d的加样回收率分别为101.5%和98.5%。该方法操作简便,结果准确,重现性好,为柴胡药材多指标质量分析方法的建立和银州柴胡药用提供了参考依据。

HPLC法测定不同品种柴胡中的柴胡皂苷a、c、d的含量

目的 考察不同品种柴胡中柴胡皂苷 a、c、d的含量 ,以期扩大柴胡药用品种的范围。方法 采用 RP-HPL C法 ,使用 L U NA C1 8柱、乙腈 -水为流动相进行梯度洗脱 ,检测波长为 2 10 nm ,以柴胡皂苷 a、c、d含量为指标进行比较。结果 不同品种柴胡中的柴胡皂苷 a、c、d含量差异悬殊 ,其中云南会泽产多枝柴胡中的含量最高。结论研究所建立的方法适合不同品种柴胡中柴胡皂苷 a、c、d的定量分析 ,并且结果准确可靠。

HPLC测定不同产地北柴胡中的柴胡皂苷a、c、d

目的 :建立一个RP HPLC方法 ,对国内 2 0个不同产地北柴胡样品中的柴胡皂苷a、c、d进行含量测定。方法 :以ODSC1 8色谱柱、乙腈 水为流动相进行梯度洗脱 ,检测波长为 2 1 0nm。结果 :柴胡皂苷a、c、d的线性回归方程分别为Yssa=2 .0 377× 1 0 5+1 .1 555× 1 0 6 Xssa(r =0 .9999)、Yssc=4.7644× 1 0 5+9.4346× 1 0 5Xssc(r =0 .9992 )、Yssd=3 .40 31× 1 0 5+1 .352 2× 1 0 6 Xssd(r=0 .9992 ) ;加样回收率分别为 (93 .2± 3 .5) %、(95 .9± 1 .7) %、(95 .6± 3 .3) % (n =5)。结论 :本研究建立的柴胡皂苷a、c、d含量测定方法简便易行 ,结果准确。

四逆散冻干粉中的柴胡皂苷C对小鼠睡眠影响的实验研究

目的研究四逆散冻干粉中主要成分柴胡皂苷C对小鼠睡眠的影响。方法将小鼠随机分成3组:空白对照组、模型组和给药组,四逆散冻干粉中有效成分柴胡皂苷C 12 g.kg-1经灌胃给予给药组;空白对照组、模型组均给予同体积的蒸馏水。于末次给药前8 h禁食,给药60 min后,腹腔注射50 mg.kg-1戊巴比妥钠,观察并记录翻正反射消失至恢复时间,即睡眠时间。结果柴胡皂苷C可明显延长戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间,与空白组比较具有极显著性差异(P<0.01)。结论四逆散冻干粉中有效成分柴胡皂苷C可延长阈剂量戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间,效果明显。

不同产地柴胡中柴胡皂苷a、c、d及柴胡总皂苷含量分析与比较

目的:建立UPLC法测定柴胡中柴胡皂苷a、c、d及紫外分光光度计法测定总皂苷含量的方法,并对不同产地柴胡进行柴胡皂苷成分比较与聚类分析,为柴胡国内外使用及质量评价提供科学依据。方法:采用超高效液相色谱法检测柴胡中柴胡皂苷a、c、d含量;采用紫外可见分光光度法测定柴胡总皂苷的含量;以柴胡皂苷a、c、d及柴胡总皂苷相对含量为特征变量,采用Matlab 13.0软件进行聚类分析。结果:南柴胡各皂苷平均水平均低于北柴胡;甘肃、内蒙北柴胡整体质量水平较为均匀一致,且皂苷含量较高,质量较好;聚类分析结果显示,南、北柴胡在皂苷成分上无显著性差异。在北柴胡的聚类中,东北柴胡分散性较大,组间差异明显;山西、甘肃产地有交叉聚类现象,成分含量在一定程度上有相似性;内蒙柴胡自己分为一类,与其他产地柴胡皂苷含量差异性明显。结论:所建立的超高效液相色谱法及紫外吸收测定法方法准确、简便、快速,重现性好,结合聚类分析,为柴胡的国内外资源利用和质量评价提供依据。

HPLC法测定华海乙肝泡腾颗粒剂中柴胡皂苷C的含量

目的：为控制华海乙肝泡腾颗粒剂的质量建立测定柴胡皂苷Ｃ的方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱条件为：ＯＤＳ柱，以甲醇－水（６１：３９）为流动相，流这 １．０ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长２０３ｎｍ。结果：平均回收率９９．３％，ＲＳＤ＝１．３４％。结论：此法可作为控制华海乙肝泡腾颗粒剂质量的方法之一。

柴胡配方颗粒的HPLC-DAD-ELSD指纹图谱研究

目的采用高效液相色谱-二极管阵列检测器-蒸发光检测器(HPLC-DAD-ELSD)联用技术,建立柴胡配方颗粒的指纹图谱。方法使用Venusil XBP-C18(L)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温35℃,进样量20μL,DAD检测器采集波长为210 nm和254 nm;ELSD检测器漂移管温度105℃,载气流量2.5 L·min^-1。结果通过19批柴胡配方颗粒样品建立了指纹图谱的共有模式,其中HPLC-DAD(210 nm)指纹图谱共有峰14个,HPLCDAD(254 nm)指纹图谱共有峰9个;HPLC-ELSD指纹图谱共有峰10个。确认了柴胡皂苷a、柴胡皂苷b1、柴胡皂苷b2及柴胡皂苷c。结论本研究所建立的方法简便准确,为该品种的质量评价与控制提供了有力的技术支持,同时对其他配方颗粒质量标准研究也具有一定的参考意义。

HPLC-UV法测定大鼠血清中柴胡皂苷C浓度

目的：建立大鼠血清中柴胡皂苷C的HPLC血药浓度测定方法,并用于柴胡皂苷C在大鼠体内药代动力学的研究。方法：大鼠血清样品采用甲醇沉淀蛋白,HPLC法测定血药浓度。色谱柱为Waters C18柱（4.6mm×250mm,5μm）,流动相为乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脱,流速为1.0ml/min,检测波长为210nm。测定大鼠单次腹腔注射528mg/kg后血药浓度,采用DAS2.0药动学分析软件拟合主要药动学参数。结果：大鼠血清中柴胡皂苷C在58.4~7300mg/L浓度范围内线性关系良好,该成分的最低检测浓度（S/N=3）为14.6mg/L,平均回收率在85%以上,日内、日间精密度及稳定性的RSD〈8%。大鼠单次腹腔注射528mg/kg后,主要药动学参数t1/2z、AUC0-t、MRT0-t分别为（1.25±0.84）h、（943.79±39.16）h/（mg·L）、（0.91±0.05）h。结论：该方法简便、准确,可作为柴胡皂苷C血药浓度定量分析方法,并能满足其在大鼠体内的药代动力学研究。

HPLC法测定不同产地北柴胡中柴胡皂苷a、c、d的含量

目的:不同产地北柴胡中柴胡皂苷a、c、d的含量测定方法。方法:采用HPLC法,LUNA C1(82)(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-水为流动相;检测波长为210 nm,流速为1.0 mL/min。结果:柴胡皂苷a线性回归方程Y=2.0266×105+1.1444×106X,r=0.9997,柴胡皂苷a含量在1.01-21.5μg之间为良好线性关系。柴胡皂苷c线性回归方程Y=2.0266×105+1.1444×106X,r=0.9994,柴胡皂苷c含量在1.04-21.7μg之间为良好线性关系。柴胡皂苷d线性回归方程Y=3.2025×105+1.2414×106X,r=0.9994,柴胡皂苷d含量在1.03-21.3μg之间为良好线性关系。结论:该法可以用于柴胡中柴胡皂苷a、c、d含量测定,可以为柴胡的质量控制提供参考。

HPLC-ELSD同时测定北柴胡中柴胡皂苷A、C、D、B1、B2及山奈苷含量

目的用HPLC-ELSD同时测定北柴胡中柴胡皂苷A、C、D、B1、B2及山奈苷6种苷类成分的含量。方法 Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,流动相:乙腈(A)-0.2%醋酸溶液(B),梯度洗脱(0~8 min, 8%A;8~15 min, 8%~20%A;15~30 min, 20%~35%A;30~40 min, 35%~45%A;40~60 min, 45%~75%A),柱温30℃,流速1.0 mL·min^(-1),载气为氮气,体积流量2.3 L·min^(-1),漂移管温度70℃,增益2。结果柴胡皂苷C、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷B1、山奈苷在5.48~109.6 mg·L^(-1)(r=0.999 4)、9.76~195.2 mg·L^(-1)(r=0.999 6)、11.98~239.6 mg·L^(-1)(r=0.999 9)、0.532~10.64 mg·L^(-1)(r=0.999 7)、0.35~7.0μg·mL^(-1)(r=0.999 5)、0.254~5.08μg·mL^(-1)(r=0.999 6)范围内的线性关系良好。平均回收率分别为99.1%、99.4%、97.2%、100.4%、100.7%、98.6%。21批北柴胡样品含量范围:柴胡皂苷C 0.093 2%~0.243%、柴胡皂苷A 0.103 8%~0.889 6%、柴胡皂苷D 0.288%~1.084 3%、柴胡皂苷B2 0~0.032 6%、柴胡皂苷B1 0~0.031 26%、山奈苷0~0.010 33%。结论该方法测定北柴胡中柴胡皂苷A、C、D、B1、B2及山奈苷6种苷类成分含量灵敏、准确,分离效果较好,无干扰,可作为完善北柴胡中苷类成分的质量标准评价提供依据。

基于药物体系质量评价模式的柴胡质量表征关联分析研究

目的:运用药物体系质量评价模式对柴胡饮片进行质量表征及关联分析,以有效地评价柴胡饮片的质量。方法:采用HPLC法同时测定柴胡饮片中药物体系关联成分芦丁、柴胡皂苷c、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量,同时表征主要黄酮类成分含量和及主要皂苷类成分含量和,并采用可见分光光度法测定柴胡饮片中总酚类成分含量。结果:基于药物体系质量评价模式,对柴胡饮片中有效指标性成分含量及其相对比值进行质量表征,同时将不同批次的饮片与经过药效验证的基准饮片进行关联度分析。结果表明,样品7、8、14中有效指标性成分含量总体高于基准批号5,批号6中有效指标性成分含量与基准批次饮片5相近,样品7、8、13、14与基准批次饮片5关联度较高。综合质量表征及关联分析结果,样品7、8、14、5、13的品质居优。结论:基于药物体系质量评价模式对柴胡饮片的质量进行评价,通过有效指标性成分含量及其相对比值的质量表征,以经过药效验证的饮片为基准,结合关联度分析,可综合全面地评价柴胡饮片的质量,为柴胡饮片的资源筛选、药物原料的质量控制和应用提供依据,同时为中药质量评价提供了方法学及其应用借鉴。

乙肝颗粒剂4种提取方法提取液的成分比较

目的 :选择乙肝颗粒剂方药的提取工艺。方法 :以黄芪甲苷、虎杖苷、柴胡皂苷C、五味子乙素及干浸膏为指标 ,采用半仿生提取法 (简称SBE法 )、半仿生提取醇沉法 (简称SBAE法 )、水提取法 (简称WE法 )和水提醇沉法 (简称WAE法 )进行比较研究。结果 :5个指标综合评价Y值为 :SBE法 >SBAE法 >WE法 >WAE法。结论 :乙肝颗粒剂以采用SBE法提取为佳。

紫胡皂甙的高效液相色谱分离与测定

建立了高效液相色谱法，应用反相柱，以甲醇－水（６６∶３４）为流动相，分离了柴胡中的主要有效成分柴胡皂甙ａ、ｃ、ｄ（Ｓａｉｋｏｓａｐｏｎｉｎａ，ｃ，ｄ）并用紫外法进行含量测定。

柴胡皂甙D诱导肝癌细胞同时发生凋亡及类凋亡性细胞死亡

目的探讨柴胡皂甙D(saikosaponin-d,SSD)诱导人肝癌Hep3B细胞死亡的作用及其可能机制。方法将肝癌Hep3B细胞分为空白对照组、DMSO(溶媒)对照组和3个SSD(5、10、15μmol/L)处理组,MTT法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双标记后采用流式细胞仪定量检测死亡细胞的比例;Hoechst 33258染色后在形态学方面检测细胞凋亡;分光光度法检测半胱天冬酶-3(caspase-3)凋亡蛋白酶活性;倒置显微镜观察细胞形态改变;Western blotting和Real-time PCR技术分别用于检测CHOP(C/EBP homology protein)蛋白和mRNA表达。结果MTT结果显示,SSD浓度和时间依赖性抑制Hep3B细胞生长;流式细胞术结果表明SSD诱导Hep3B细胞死亡;Hoechst 33258染色后在荧光显微镜下观察,发现SSD处理组的细胞核出现凋亡细胞特征性的核染色体凝集、核固缩和碎裂;SSD可明显激活关键的凋亡执行分子caspase-3;通过倒置显微镜观察到SSD处理的细胞内出现大量空泡样改变——类凋亡的发生;总caspase抑制剂Z-VAD-FMK预处理能够有效抑制caspase-3活性,但仅能部分抑制SSD诱导的细胞死亡,且不能减少SSD诱导的细胞内空泡形成;SSD诱导应激诱导性分子CHOP蛋白和mRNA表达上调,该作用不能被Z-VAD-FMK抑制。结论SSD可诱导人肝癌Hep3B细胞同时发生caspase依赖性凋亡和非caspase依赖性类凋亡,其中CHOP表达升高可能是参与SSD诱导类凋亡的分子机制之一。

狭叶柴胡中皂甙成分的研究(Ⅰ)

自狭叶柴胡(Bupleurum scorzonerifolium willd)的根中分得五个三萜皂甙,根据理化性质和波谱分析结果,鉴定为柴胡皂甙a(Saikosaponin a),柴胡皂甙C(Saikosaponin C),柴胡皂甙d(Saikosaponin d),6″-o-乙酰柴胡皂甙a(6″-o-acetyl-Saikosaponin a)和6″-O-乙酰柴胡皂甙d(6″-O-acetyl-saikosoponin d),均为首次从该植物中得到。