MALDI-TOF MS磷脂质组学快速分析三文鱼肌肉组织

建立了基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速分析三文鱼肌肉组织磷脂质组学的方法。以非自然磷脂酰胆碱DMPC(14∶0/14∶0)和磷脂酰乙醇胺DPPE(15∶0/15∶0)为标准品,分析其在正离子模式下的主要分子峰与干扰峰,并进行方法学验证。实验结果表明,各化合物平均加标回收率在74%~83%之间,相对标准偏差小于7%,日内和日间精密度的相对标准偏差均低于8.5%。将三文鱼磷脂提取物进样分析,共鉴定出28种磷脂分子,其中m/z806.40([PC38:6+H]^+和[PE38:4+K]^+)信号最强。三文鱼中多不饱和磷脂种类丰富,如m/z 824.38([PC38:8+Na]^+和[PE42:5+H]^+),m/z832.41([PC40:7+H]^+,[PC38:4+Na]^+和[PE40:5+H]^+),部分磷脂分子的脂肪酸链达到了满不饱和,如[PC42:11+H]^+,其sn-1和sn-2上两条脂肪酸链分别为二十碳五烯酸链(EPA-)和二十二碳六烯酸链(DHA-)。该方法稳定可靠,可用于鉴定三文鱼肌肉组织中的磷脂分子结构,并从脂质组学角度为三文鱼营养评价提供理论依据。

三文鱼基质上单核细胞性李斯特菌毒力因子的表达

为了解单核细胞性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)污染食品基质后毒力因子表达的变化,本研究以Lm标准株ATCC 19115为研究对象,将其接种于三文鱼基质及胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(tryptic soy agar-yeast extract,TSA-YE)(对照组)上,于0、4、7℃贮藏条件下分别培养24 h和48 h后,收集菌体提取总RNA,采用反转录实时定量聚合酶链式反应(reverse transcript-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)对其4个毒力因子hlyA、inlB、prfA、sigB的表达进行分析。结果表明,在0、4℃和7℃分别培养24 h和48 h后,4个主要毒力因子在三文鱼基质上的表达量均高于平板对照,其中hlyA在贮藏4℃的三文鱼基质上表达上调的最为显著。此外,prfA和sigB在4℃贮藏条件下,表达量极显著高于7℃和0℃(P<0.01);在不同的温度贮藏24 h,inlB和hlyA的表达量均表现为7℃>4℃>0℃(P<0.01);且4个主要毒力因子在三文鱼基质上的相对表达量均表现为48 h>24 h(P<0.01)。综上所述,本研究为该菌在食品基质上的风险评估和有效防控提供一定的理论依据。