Study on Optimization of Ethanol Reflux Extraction of Phenolic Acids from Salvia miltiorrhiza

The extraction technology of phenolic acid compounds from Salvia miltiorrhiza by ethanol reflux was studied. In this experiment, salvianolic acid B standard was used to make the standard curve. Single factor experiment and orthogonal experiment were used to study the extraction of different ethanol concentrations, reflux times and material-to-liquid ratios. The OD value of salvianolic acid compounds was measured with a spectrophotometer. The extraction rate of phenolic acid compounds under different extraction conditions was calculated through a regression equation, so as to obtain the optimal conditions for the ethanol reflux extraction process of Salvia miltiorrhiza. The experimental data can provide a reference for the ethanol reflux extraction process of salvianolic acids in the industry. According to the experiment, the extraction rate of phenolic acids in Salvia miltiorrhiza was the highest when the ethanol concentration was 60%, the reflux time was 1.5 hours, and the ratio of material-to-liquid was 1:10.

HPLC法同时测定乙肝扶正胶囊中丹酚酸B、隐丹参酮和丹参酮Ⅱ_(A)的含量

目的:建立同时测定乙肝扶正胶囊中丹酚酸B、隐丹参酮和丹参酮Ⅱ_(A)含量的高效液相色谱法。方法:采用Agilent ZORBAX-SB C 18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱,检测波长为270 nm。结果:丹酚酸B、隐丹参酮和丹参酮Ⅱ_(A)分别在7.82~313.01μg·mL^(-1)(r 2=0.9998)、0.087~17.324μg·mL^(-1)(r^(2)=1.0000)、0.067~13.468μg·mL^(-1)(r^(2)=1.0000)范围内线性关系良好,平均回收率分别为103.99%、97.76%、100.88%,RSD均≤1.00%。测定样品83批次,丹酚酸B、隐丹参酮和丹参酮IIA的含量分别为0.16~4.06、0.00~103.53、0.00~126.49μg·粒^(-1)。结论:本方法为提升乙肝扶正胶囊的质量控制手段提供了理论依据和有效的技术支撑。

高效液相色谱法测定丹参中丹酚酸B

目的 :建立丹参中丹酚酸B高效液相色谱测定方法。方法 :75 %甲醇回流提取 ,色谱柱YWGC18,流动相甲醇 5 %乙酸 (35∶6 5 ) ,检测波长 2 81nm。结果 :丹酚酸B 0 .17～ 1.70 μg线性关系良好 (r =0 .9997) ,回收率98.9% ,RSD1.82 %。结论

高速逆流色谱法分离制备丹酚酸B

采用高速逆流色谱法分离纯化丹参水溶性成分丹酚酸类物质,制备丹酚酸B化学对照品。分离采用的溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-水-甲醇(1.5:5:5:1.5),上相做固定相,下相做流动相,流速为1.7 mL/min,仪器转速850 rpm,进样量80 mg,纯度用HPLC方法测定。结果表明:一次分离可制备63.4 mg丹酚酸B,其纯度为98.6%。该方法操作简单,可作为高纯度丹酚酸B化学对照品的制备分离方法。

丹酚酸B对缺氧损伤心脏微血管内皮细胞细胞间粘附分子表达的影响

目的 :探讨丹参有效成分丹酚酸B在心脏微血管内皮细胞 (CMEC)缺氧 /复氧损伤中的保护作用。方法 :通过心脏微血管内皮细胞体外培养技术 ,建立缺氧预适应 (HPC)模型并给予丹酚酸B ,应用酶联免疫方法检测细胞间粘附分子 1(ICAM 1)表达。结果 :在CMEC缺氧 3h ,复氧 6h后ICAM 1表达升高 ;缺氧预适应和应用丹酚酸B对CMEC进行预处理则能有效降低CMECICAM 1的表达。结论 :丹酚酸B在CMEC缺氧 /复氧损伤中可产生与缺氧预适应类似的保护效果。

丹参和丹酚酸B对抗泼尼松致大鼠皮肤衰老作用的观察

目的:探讨丹参(Salvia Miltiorrhiza)和丹酚酸B(Salvianolic acid B,Sal B)对用泼尼松引起的大鼠皮肤衰老作用的影响。方法:32只SD雄性大鼠随机分为4组(n=8):正常对照组,激素模型组(GC)、激素加用丹参组(GC+DS),激素加用丹酚酸B组(GC+Sal B)。正常对照组每天灌胃生理盐水,后3组每天分别灌胃泼尼松3.5mg.kg-1.d-1造模,GC+DS组再给予丹参水提液5g.kg-1.d-1;GC+Sal B组再给予丹酚酸B原料药125mg.kg-1.d-1。喂养90d后处死大鼠取皮肤进行组织病理学检查,并用计算机图像分析系统定量分析表皮厚度、弹力纤维的面积;另外以高效液相色谱法对药品进行丹酚酸B含量测定。结果:GC组可见大鼠皮肤表皮显著变薄,弹力纤维减少(P<0.01),胶原纤维减少,断裂等皮肤衰老样的表现,GC+DS、SalB组可使大鼠表皮增厚、弹力纤维总面积增大(P<0.01),皮肤衰老样改变明显减轻;丹参水提液、丹酚酸B原料药分别检测出相当含量的丹参水溶性成份丹酚酸B。结论:长期灌胃给药泼尼松可使大鼠出现皮肤衰老样改变,丹参和丹酚酸B对其有较好的对抗作用,丹酚酸B可能是丹参对皮肤作用的重要有效成分。

丹酚酸B的体外抗氧化活性

为考察丹酚酸B的体外抗氧化活性,应用比色法测定丹酚酸B对Fenton体系产生的.OH、邻苯三酚自氧化体系产生的O2-.、DPPH.的清除能力及其还原能力、抗脂质过氧化能力,并考查丹酚酸B与抗氧化活性之间的量效关系。结果表明,丹酚酸B有很强的.OH、O2-.、DPPH.清除能力、还原能力和抗脂质过氧化能力,且其抗氧化活性随丹酚酸B浓度的增大而增强,呈明显的量效关系。

丹酚酸B、丹参酮ⅡA对家兔动脉粥样硬化模型内皮细胞功能的影响

[目的]探讨丹参水溶性成分丹酚酸B和脂溶性成分丹参酮ⅡA对家兔动脉粥样硬化模型内皮细胞功能的影响,以寻找其作用靶点。[方法]复制家兔动脉粥样硬化模型,放射性免疫方法检测血浆血栓素(TXB2)、6酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)、内皮素(ET)浓度,观察丹酚酸B和丹参酮ⅡA对内皮细胞功能的影响。[结果]丹酚酸B能够减少动脉粥样硬化家兔血浆TXB2、ET浓度,增加6-keto-PGF1α浓度,丹参酮ⅡA对动脉粥样硬化家兔血浆TXB2、6-ke-to-PGF1α、ET没有明显影响。[结论]丹参水溶性成分与脂溶性成分在治疗动脉粥样硬化过程中作用靶点及机制不同。

丹参水提液中丹酚酸B湿热降解动力学研究

目的:研究丹参水提液中丹酚酸B的湿热降解动力学。方法:以HPLC测定不同温度不同加热时间丹参水提液中丹酚酸B湿热降解动力学相关参数。结果:丹参水提液中丹酚酸B湿热降解符合一级动力学。结论:缩短丹参水提、浓缩、干燥时间,尽快使丹参水提液固体化可减少丹酚酸B损失。

不同产地丹参药材中丹参酮ⅡA和丹酚酸B含量比较

目的:测定和比较不同大规模栽培产地丹参药材中丹参酮ⅡA和丹酚酸B含量。方法:采用高效液相色谱法,选用Synchropak PR100-5色谱柱,检测波长分别为270nm和286nm。结果:丹参酮ⅡA和丹酚酸B含量均较高的是四川中江栽培品。山西芮城栽培品丹参酮ⅡA含量尽管最低,但丹酚酸B含量却最高。结论:丹参中丹参酮ⅡA和丹酚酸B的含量与产地关系较大,此研究结果可作为丹参药材采购及临床选用的参考依据。

水杨酸诱发的NO介导了丹参悬浮培养细胞中丹酚酸B的生物合成

水杨酸(SA)可诱导丹参悬浮培养细胞中一氧化氮(NO)产生、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活化及丹酚酸B(Sal B)的生物合成。为了阐明NO对丹参悬浮培养细胞中Sal B生物合成的影响及作用机理,本实验利用NO供体硝普钠(SNP)、NO合成酶抑制剂L-NNA(Nω-nitro-L-arginine)、NO淬灭剂c PITO(carboxy-2-phenyl-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl-3-oxide)以及PAL抑制剂L-AOPP(L-2-aminooxygen-3-phenyl acrylic acid)分别处理丹参悬浮培养细胞,并对其胞内NO水平、PAL活性和Sal B积累量进行了检测。结果表明,硝普钠(SNP)处理显著促进了NO产生、PAL活性和Sal B的积累,而L-NNA和c PITO抑制上述过程,说明NO诱发PAL活性提高并参与了SA诱导的Sal B生物合成;L-AOPP显著抑制了PAL活性及Sal B积累,却对NO产生没有显著影响,揭示NO位于PAL的上游。这说明SA诱发的NO产生、PAL活化及Sal B合成之间存在因果关系,即NO通过激活PAL触发Sal B生物合成。

UPLC和HPLC方法对丹参药材中丹酚酸B含量测定结果的比对

目的:比对超高效液相色谱与高效液相色谱方法测定丹参药材中丹酚酸 B 的含量结果。方法:采用中国药典2005年版(一部)丹参药材含量测定项下有关标准对原高效液相色谱方法进行转换并优化为超高效液相色谱方法。原高效液相色谱方法色潜柱为 Waters X-Bridge^(TM)BEH C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:乙腈-甲醇-水-甲酸(10:30:59:1),流速:1mL·min^(-1),检测波长:286 nm,柱温:30℃;超高效液相色谱方法色潜柱为 Waters ACQUITY UPLC^(TM)。BEH C_(18)柱(2.1 mm×50mm,1.7μm),流动相:乙腈-甲醇-水-甲酸(8:25:66:1),流速:0.4 mL·min^(-1),检测波长:286 nm,柱温:30℃。结果:2种方法所得含量测定结果一致。结论:超高效液相色谱方法能够替代高效液相色谱分析方法测定丹参药材中丹酚酸 B 含量,既加快了分析速度,达到了样品分析的高通量,减少有机溶剂的使用,又得到更高的分析灵敏度。

丹参水溶性有效部位群与丹酚酸B对去卵巢大鼠血脂的调节作用

目的:探讨两种丹参水溶性有效部位群与其主要成分丹酚酸B等对去卵巢大鼠血脂水平的调节作用。方法:40只SD雌性大鼠随机分为5组,每组8只,以去卵巢大鼠为血脂紊乱模型,预防用药90天,观察以上3种丹参制剂分别对大鼠血脂谱各值以及体重、肝脏、子宫重量等的影响。结果:与假手术组比,去卵巢组大鼠体重、总胆固醇(Total cholesterol;TC)明显升高(P<0.01、P<0.05),甘油三酯(Total triglycerides;TG)升高不明显,高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol;HDL-c)和子宫重量显著下降(P<0.01、P<0.05);与去卵巢组相比,3个丹参药物预防组可显著降低TC和TG水平、升高HDL-c水平(P<0.05或P<0.01),对体重、子宫重量没有显著影响。结论:两种丹参水溶性有效部位群与丹酚酸B能有效降低去卵巢大鼠血脂,其主要成分丹酚酸B在其中有确切的药理学作用。

超临界二氧化碳萃取丹酚酸B的提取工艺研究

目的研究超临界CO2中加入非离子表面活性剂的多元醇混合体系萃取丹酚酸B的新工艺。方法以丹酚酸B的提取率为指标,采用正交实验法进行丹参提取工艺的优选,采用HPLC法测定其含量。结果超临界CO2萃取中加入非离子表面活性剂的多元醇混合体系可大大提高丹酚酸B的提取率。在本实验条件下,丹参的超临界萃取最佳工艺为:夹带剂选择10%乙醇+5%吐温-80,用量与药材相等,萃取温度55℃,压力30MPa,萃取时间1.5h。结论加入非离子表面活性剂的多元醇混合体系比只用乙醇作夹带剂进行超临界CO2提取丹酚酸B的效率高约6倍。

HPLC测定丹七片中丹酚酸B的含量

目的建立HPLC法测定丹七片中丹酚酸B的含量。方法色谱柱为AgilentHypemil C18柱，（4．0mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-乙睛-1、5％甲酸溶液（30：10：60）；流速：1mL·min^-1；检测波长286nm；柱温：室温。结果线性范围为11．36～568μg·mL^-1（r=0、99997），平均回收率为101．0％，RSD=1．89％，重复性RSD=0.52％（n=6），精密度RSD=1．20％（n=6），稳定性RSD=1.96％。结论方法稳定、可靠，可作为该制剂的质量控制方法。

一种从丹参中提取丹酚酸B的新工艺

为开发从丹参中提取高纯度丹酚酸B的新工艺,采用水提-壳聚糖絮凝-过滤-浓缩-醇沉-萃取工艺制得丹酚酸B含量在80%左右的丹酚酸提取物EB80。用硅胶柱层析法精制EB80,得到丹酚酸B含量为96%的提取物EB96。EB96的IR、M S1、H-NMR测试结果表明:其分子结构特征、相对分子质量与丹酚酸B相同。本工艺便于工业化实施。

HPLC-DAD法同时测定丹参中丹酚酸B和隐丹参酮的含量

目的对不同种植地区,不同采摘批次丹参药材中的活性成分丹酚酸B及隐丹参酮的含量同时进行测定,研究新的丹参质控指标。方法本文采用高效液相色谱及紫外-可见光二极管阵列检测器联用技术（HPLC-DAD）,以乙腈-水（含0.026%磷酸）为流动相进行梯度洗脱,检测波长270 nm,柱温24℃。结果丹酚酸B浓度在65-390μg·mL^-1,隐丹参酮浓度在2.2-22μg·mL^-1范围内呈良好的线性关系。丹酚酸B的含量为0.363%-0.497%,隐丹参酮的含量为0.0095%-0.0284%。结论本法测定结果准确可靠,可同时将丹酚酸B和隐丹参酮二者作为丹参的质量控制指标。

微波辅助提取丹参中丹酚酸B

以丹参中水溶性成分丹酚酸B的收率为指标,采用微波提取的方法,考察浸泡时间、溶剂种类及浓度、提取时间、液固比、溶液pH和提取级数等因素对收率的影响;结合正交实验设计确定了丹酚酸B的最佳提取工艺条件为:去离子水为溶剂,液固比12,微波提取90 s,溶液的pH=5,提取2次,丹酚酸B的收率为3.40%.将优化后的微波提取结果与其他方法比较,结果表明微波提取分别比超声提取、索氏提取的收率高出54.0%和57.6%.

丹酚酸B对大鼠离体工作心脏血流动力学的影响

目的研究丹酚酸B对离体大鼠工作心脏血流动力学的影响。方法采用Langendorff离体心脏灌流的方法,以左室内压(LVSP)、左室舒末压(LVEDP)、室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、室内压最大下降速率(-dp/dtmax)、心率(HR)等血流动力学参数为指标,观察丹酚酸B对心肌收缩性能的影响。结果不同剂量(10、5、2.5 mg/L)的丹酚酸B可使LVSP、±dp/dtmax明显升高,同时使HR减慢,并呈剂量依赖性,但对LVEDP无明显作用。结论丹酚酸B对离体工作心脏有剂量依赖性正性肌力作用。

微波法提取丹参中丹酚酸B的研究

目的采用微波提取技术提取丹参。方法以丹酚酸B为指标,采用单因素方法考察了影响其收率的因素:提取溶剂体积分数、微波辐照时间、加热温度、微波输出功率、液固比、预浸泡时间及丹参粒径和提取次数。结果最佳工艺为30%乙醇为提取溶剂,按10∶1的液固比,微波输出功率650W,70℃,辐照7min,预浸泡90min,提取3次,丹酚酸B收率可达到7.92%。该微波法提取5min比热回流法提取5h的丹酚酸B收率还高。结论微波提取技术提取丹参不仅缩短了提取时间而且节省了生产成本。