垂盆草(Sedum sarmentosum)水提物对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)脂肪性肝损伤治疗效果研究

为了研究景天科中药植物垂盆草(Sedum sarmentosum)水提物对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)脂肪性肝损伤治疗作用及机理,本试验通过对连续投喂6周8.1%(鱼油5%+大豆油3.1%)高脂饲料建立的草鱼脂肪性肝损伤模型,投喂添加1200mg/kg、300mg/kg浓度的垂盆草饲料进行6周治疗,测定血清主要脂肪代谢相关生化指标、制作肝脏病理切片及应用半定量RT-PCR技术检测肝细胞脂肪代谢相关酶肉碱棕榈酰转移酶I(CPT-1)、过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)m RNA相对表达量变化。结果表明:连续投喂6周的高脂饲料草鱼血清生化指标发生显著变化,组织病理学观察肝细胞发生严重的脂肪变性,故已成功建立了草鱼脂肪性肝损伤模型。通过6周治疗,1200mg/kg剂量组、300mg/kg剂量组均可显著降低模型动物的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(CHO)(P<0.01);组织病理学观察显示,1200mg/kg、300mg/kg剂量组的肝细胞脂肪变性程度与高脂组相比有一定程度的改善;同时半定量RT-PCR检测结果表明:用药1200mg/kg、300mg/kg剂量组草鱼肝脏CPT-1 m RNA、PPAR-αm RNA相对表达量均显著高于高脂组(P<0.01),且1200mg/kg剂量组TNF-αm RNA表达量显著低于高脂组(P<0.01)。本研究结果表明肝脏是草鱼脂肪沉淀的主要场所,饲料中添加垂盆草水提物可对8.1%高脂饲料引起的草鱼肝脂肪性组织损伤具有治疗作用,该治疗作用与促进肝细胞脂质代谢途径有关。

中药鼠牙半支提取物的体外抗氧化活性研究

目的探讨鼠牙半支粗提物的体外抗氧化活性。方法通过NADH-PMS-NBT法、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)法等,对中药材鼠牙半支乙醇粗提物的体外抗氧化活性进行评估,同时测定其粗提物中总多糖、总多酚含量。结果鼠牙半支经75%乙醇提取后所得到的粗提物中,总多糖含量为15.33%,总多酚含量为0.81%;在对超氧根自由基(IC_(50)=1.21mg/mL)、ABTS自由基及羟基自由基的研究中表现出很好的清除能力,同时,在总抗氧化能力方面也表现出较好的活性。结论中药鼠牙半支粗提物在自由基清除方面均表现出良好的清除能力,体现出较好的体外抗氧化活性,这可能对今后鼠牙半支作为抗氧化剂的研究有一定指导意义。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技术的垂盆草化学成分表征与鉴定

建立超高效液相-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS),表征与鉴定垂盆草中的化学成分。采用Phenomenex Kinetex C 18(2.1 mm×100 mm,2.6μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,进样量为3.0μL;选择电喷雾离子源,正、负离子模式扫描。根据化合物的保留时间、精确分子量、二级碎片离子、裂解规律及对照品比对进行化合物分析鉴定。结果显示,从垂盆草中共鉴定或初步推导出了53个化学成分,主要包括25种黄酮、12种Megastigmanes类化合物、11种有机酸、3种生物碱及2种其他化合物。其中有5种化合物与对照品比对获得鉴定,3种化合物目前未见报道。该研究建立的UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS方法可快速且全面表征垂盆草的化学成分,为其质量控制及药效物质基础研究提供参考数据。

安顺花江石漠化综合治理区裸岩生态修复技术探讨

裸岩是石漠化环境的标志,裸岩的加热效应阻碍石漠化环境的生态系统正向演替,石漠化治理必须重视裸岩的生态修复,增加裸岩植被覆盖率。花江石漠化综合治理区面临困难,需要探索裸岩生态修复技术。研究表明,可以在裸岩上进行苔藓结皮培育,在培育的苔藓结皮里种植药用植物垂盆草和有柄石韦,该方法可以实现生态和经济同步,可以为石漠化治理提供新的治理手段。

垂盆草抗逆性研究现状与展望

垂盆草是中国南方喀斯特地区典型的石生耐旱药食植物,具有药用价值、经济价值和生态价值。为了掌握垂盆草的抗逆性,挖掘垂盆草的潜在价值。从耐旱、耐寒、耐高温、光照适应性和重金属与盐碱化适应性五个方面综述了垂盆草抗逆性。经分析,垂盆草抗逆性机制研究较少,今后要进一步深入研究垂盆草抗逆性的机制。垂盆草在耐旱、耐高温、耐低温上的综合表现明显,考虑石漠化缺水易干旱的环境,建议将垂盆草与苔藓结皮组合用于石漠化环境的裸岩植被生态修复,可以减轻裸岩加热效应,改善石漠化生态系统,开创新的土地资源。

超声波辅助乙醇提取垂盆草中总黄酮及其抗氧化活性

用超声波辅助乙醇提取湘西垂盆草中的总黄酮。通过单因素和正交试验讨论料液比、乙醇体积分数、超声时间、温度等因素对提取效果的影响,考察黄酮提取物对油脂的抗氧化性能及对羟自由基的清除效果,并与一些天然抗氧化剂作比较。结果表明:在80℃条件下,选择40%乙醇为提取剂、料液比1:25(g/mL)、超声40min,提取率达到1.968%。提取物对羟自由基的清除作用明显,并能增加植物油和动物油的抗氧化能力,在相同条件下该提取物对油脂的抗氧化效果强于柠檬酸而弱于VC。

垂盆草中的甾醇化合物

从景天科药用植物垂盆草的新鲜全草中分离到４种甾醇类成分，经化学和光谱鉴定为：β－谷甾醇（β－ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌ），胡萝卜甙（ｄａｕｃｏｓｔｅｒｏｌ），３β，６β－豆甾－４－烯－３，６－二醇（３β，６β－ｓｔｉｇｍａｓｔ－４－ｅｎ－３，６－ｄｉｏｌ）和一新化合物３β，４α，１４α，２０Ｒ，２４Ｒ－４，１４－二甲基麦角甾－９（１１）－烯－３－醇（３β，４α，１４α，２０Ｒ，２４Ｒ－４，１４－ｄｉｍｅｔｈｙｌｅｒｇｏｓｔ－９（１１）－ｅｎ－３－ｏｌ）。

垂盆草提取物对马兜铃酸致大鼠肾小管上皮细胞损伤的改善作用

目的研究马兜铃酸(AA)致肾小管上皮细胞损伤的分子机制及垂盆草提取物(SSBE)对AA损伤的干预机制。方法将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E加入AA 1,5,10,50和100 mg·L-1;或AA 10 mg·L-1+SSBE 10,50,100,500和1000 mg·L-1,培养24 h后,采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;Hoechst 33258染色和流式细胞仪检测NRK-52E细胞凋亡;ELISA和免疫细胞荧光染色检测巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的表达;实时荧光定量RT-PCR和Western蛋白质印迹法检测凋亡相关基因c-Myc和p53 mRNA和蛋白的表达。结果随着AA浓度的增加,NRK-52E细胞损伤愈加明显。与正常对照组相比,AA 10和50 mg·kg-1诱导细胞凋亡,并促进了c-Myc和p53明显表达(P<0.05);AA 10和50 mg·kg-1损伤肾小管上皮细胞后,MIF的分泌和表达量明显增加(P<0.05)。与AA 10 mg·L-1组相比,SSBE 1000 mg·L-1不仅减轻了AA所致的损伤,而且明显下调了MIF的表达(P<0.05)。同时,SSBE1000 mg·L-1也明显抑制了c-Myc和p53的表达(P<0.05)。结论 AA损伤肾小管上皮细胞,诱导细胞凋亡,并促进MIF的表达,进而影响炎症应激反应过程中巨噬细胞的浸润和活化。SSBE的干预可明显降低AA所致的损伤,这可能与MIF的表达下调有关。

垂盆草总黄酮对APAP诱导小鼠肝损伤的保护作用

目的研究垂盆草总黄酮对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)所致小鼠肝损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法将48只ICR雄性小鼠随机分为6组(n=8),正常对照组,模型组,阳性药物组(联苯双酯,300 mg/kg),垂盆草总黄酮低(150 mg/kg)、中(300 mg/kg)、高剂量组(600 mg/kg)。各组小鼠均灌胃相应药物或生理盐水,连续灌胃7 d,于第7天灌胃后1 h,除正常组外(腹腔注射生理盐水),其余各组均腹腔注射APAP 300 mg/kg进行肝损伤造模。APAP造模24 h后,采用相应的试剂盒测定肝组织和血清的生化指标,HE染色观察小鼠肝脏损伤情况,实时荧光定量PCR法检测Nrf2、HO⁃1 mRNA变化;Western blot法检测小鼠肝脏Nrf2、HO⁃1蛋白表达。结果垂盆草总黄酮降低了APAP诱导的ALT、AST、ALP、TBIL、LDH水平,降低肝脏指数和MDA水平,增加肝组织CAT、GSH水平以及SOD、GSH⁃PX活性;降低TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6水平;明显改善肝脏组织病变;增加Nrf2、HO⁃1 mRNA和蛋白表达。结论垂盆草总黄酮对APAP诱导的肝损伤有一定的保护作用,其可能的作用机制是减少氧化应激和炎症反应。

垂盆草不同提取部位保肝降酶试验

目的 :确定垂盆草的活性部位 ,为保肝降酶活性组分的筛选提供线索和依据。方法 :用 80 % Et OH对原药材进行回流提取 ,然后 ,依次用 Pet、Et OA c、n-Bu OH对垂盆草药材的醇浸膏进行萃取 ,分别制得 Pet部分、Et OAc部分、n-Bu OH部分和 H2 O部分 ,通过保肝降酶试验 ( D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤 ) ,考察其活性部位。结果 :实验表明 ,H2 O部分及 n-Bu OH部分高剂量组降酶作用有极显著意义 ( P<0 .0 1) ,Et OA c部分高剂量组对降 AL T有显著意义 ( P<0 .0 5 )。结论 :垂盆草中具有保肝降酶作用的活性成分主要存在于 H2 O部分和 n-Bu OH部分。

垂盆草对重症急性胰腺炎肺损伤大鼠的作用及其相关机制研究

目的研究垂盆草提取物对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)导致的急性肺损伤(ALI)的影响及相关作用机制。方法健康成年SD大鼠随机分成3组:假手术组(C)、胰腺炎组(SAP)、垂盆草提取物干预组(SSBE),每组14只。逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠(1 mL/kg)建立SAP模型,SSBE组在模型基础上给予SSBE(100 mg/kg)干预,C组和SAP组给予等量生理盐水。建模成功后分别于12 h、24 h取标本并处死大鼠,HE染色观察胰腺和肺脏病理损伤,测定各组各时间段大鼠血清淀粉酶(AMS)、炎性因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的含量。Western blotting法观察肺组织中磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、磷酸化的核转录因子-κB(NF-κB)、P65亚基(p-P65)蛋白表达的变化。结果肉眼及光镜下观察到SAP组与SSBE组均出现明显肺损伤,病理评分显示SSBE组肺损伤情况明显好于SAP组(P<0.05)。与C组比较,SAP组与SSBE组AMS、IL-1β、IL-6、TNF-a的含量明显升高(P<0.05),Western blotting法观察到SAP组肺组织中p-ERK、p-P65蛋白表达均高于C组。与SAP组比较,SSBE组AMS、IL-1β、IL-6、TNF-α的含量明显低于SAP组,且肺组织中p-ERK、p-P65蛋白表达均明显低于SAP组。结论垂盆草提取物对大鼠重症急性胰腺炎导致的急性肺损伤有改善作用,其作用机制可能是通过调控ERK-P65信号通路,减少炎症因子释放,从而减轻炎症反应。

景天属三种植物药不同提取部位及总黄酮抗肿瘤作用研究

利用MTT法检测景天属三种植物药垂盆草、佛甲草及凹叶景天的乙酸乙酯和正丁醇提取部位及总黄酮提取物对人肝癌细胞株HepG2、人食管癌细胞株EC109及人结肠癌细胞株SW480的体外增值抑制作用.结果表明,三种植物药的乙酸乙酯和正丁醇提取部位及总黄酮提取物都有显著的抗肿瘤作用,且各植物药总黄酮提取物的抗肿瘤活性最强.

垂盆草提取物经JAK2/STAT3信号通路途径改善大鼠重症急性胰腺炎肺损伤的研究

目的研究垂盆草提取物(sedum sarmentosum bunge extraction,SSBE)对大鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)相关的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的改善作用及其机制研究。方法健康成年SD大鼠随机分成3组:假手术组(C)、胰腺炎组(SAP)、垂盆草提取物治疗组(SSBE),每组14只。逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠(1 mL/kg)建立SAP模型,SSBE组在SAP模型基础上给予SSBE(100 mg/kg,q 12 h)治疗,C组和SAP组给予等量生理盐水。建模成功后分别于12 h、24 h取标本,检测肺组织IL-1β、IL-6、TNF-α的浓度,胰腺和肺组织标本送病理学检查,免疫组化法和Western blotting法观察肺组织磷酸化的Janus激酶2(phospho-janus kinase,p-JAK2),磷酸化的信号转导和转录活化因子3(phospho-signal transducer and activator transcription 3,p-STAT3)蛋白表达的变化。结果 SSBE组与SAP组比较,肺组织IL-1β、IL-6、TNF-α的浓度降低(P<0.05),胰腺和肺组织的病理学评分减少(P<0.05)。Western blot法观察到肺组织中p-JAK2,p-STAT3蛋白表达SSBE组低于SAP组(P<0.05),两组均高于C组(P<0.05)。免疫组化法结果同Western blotting法。结论垂盆草提取物对大鼠重症急性胰腺炎肺损伤有改善作用,其作用机制可能是通过调控JAK2/STAT3信号通路,抑制促炎细胞因子过度表达有关。

异鼠李素-3,7-二-O-β-D-葡萄糖苷的保肝降酶试验

目的 :验证异鼠李素 - 3 ,7-二 - O-β- D-葡萄糖苷的保肝降酶作用 ,考察其作为垂盆草药材质控指标的可行性。方法 :用垂盆草药材 n- Bu OH部分经过溶剂分离和色谱分离制得的异鼠李素 - 3 ,7-二 - O-β- D-葡萄糖苷 ,配成一定浓度的溶液 ,通过保肝降酶试验 (D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤 ) ,考察其活性。结果 :和模型组比较 ,该成分具有一定的保肝降酶活性 ,高剂量组更加明显。结论 :异鼠李素 - 3 ,7-二 - O-β-

马兜铃酸诱导大鼠肾小管上皮细胞表型转化和胶原累积及垂盆草提取物的作用

目的:研究垂盆草(SSB)提取物对马兜铃酸(AA)诱导的肾小管上皮细胞表型转化和胶原累积的作用,并初步探讨可能的分子机制。方法:将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)分为:(1)溶剂对照组:未加入SSB和AA;(2)AA损伤组:只加AA,浓度为1~100 mg/L;(3)SSB提取物干预组:在加入10 mg/L AA基础上,同时加入SSB提取物(10~2 000 mg/L)。细胞培养24 h后,酶联免疫吸附试验检测转化生长因子β1(TGF-β1)含量;细胞免疫荧光染色检测肌成纤维细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮细胞标志物E-cadherin和基质成分III型胶原的表达;实时荧光定量PCR检测α-SMA、E-cadherin、骨形成蛋白7(BMP-7)和I型胶原mRNA的表达。结果:AA可诱导NRK-52E细胞呈现纤维化样改变;1 mg/L和10 mg/L AA不仅可增加基质成分I型和III型胶原的表达量,同时也可促进α-SMA表达,抑制E-cadherin的表达。用SSB提取物干预后,AA所致的纤维化改变明显减轻;SSB提取物下调了α-SMA、I型和III型胶原的表达,并且促进E-cadherin和BMP-7的表达。此外,SSB提取物也抑制TGF-β1的分泌,并呈浓度依赖性。结论:应用SSB提取物干预可明显降低AA所致的肾纤维化效应,可能的机制为SSB提取物降低TGF-β1的表达,抑制小管上皮细胞的表型转化,进而抑制胶原的累积。

不同温度和基质含水量对垂盆草建植初期生长的影响

在模拟的环境下,研究了不同昼夜温度(35/30,30/25和25/20℃)和基质含水量(基质最大持水量的90%,70%和50%)对垂盆草种植初期生长的影响。结果表明,在30/25和25/20℃下,垂盆草新生芽数、最大根长、最大芽长、干物重、叶绿素含量等指标的表现均优于35/30℃。在相同温度下,90%和70%的基质含水量比50%的更有利于垂盆草建植初期的生长,但在50%的含水量下叶绿素含量最高。适宜的温度可以降低水分需求,以温度为30/25℃,基质含水量为70%的组合综合表现最好。

HPLC法测定垂盆草配方颗粒中黄酮类成分的含量

目的:建立高效液相色谱法测定垂盆草配方颗粒中槲皮素、山奈素及异鼠李素含量的方法。方法:流动相为甲醇:0.4%磷酸溶液(45:55),色谱柱为Diamonsil C_(18)(200 mm×4.6 mm,5μm),检测波长为360 nm,柱温为30℃,流速为1.0 ml·min^(-1)。结果:三种黄酮类成分分离度好,不受杂质干扰,线性范围:槲皮素在2.982～29.820μg·ml^(-1),r=0.999 7,山奈素在0.966～9.660μg·ml^(-1),r=0.999 8,异鼠李素在0.982～9.820μg·ml^(-1),r=0.999 4;平均回收率:槲皮素99.26%,RSD=0.66%(n=6),山奈素99.21%,RSD=1.24%(n=6),异鼠李素99.44%,RSD=0.40%(n=6)。结论:该测定方法操作简便,快捷,可靠性高,重复性好,可作为垂盆草配方颗粒的质量控制方法之一。

垂盆草提取物对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化和基质累积的影响

目的:探讨垂盆草提取物(SSBE)对转化生长因子(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(EMT)和基质累积的影响。方法:将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞系(NRK-52E)细胞分为只加入溶剂的对照组,只加入TGF-β1(浓度为5μg/L)的诱导组,以及加入SSBE(浓度为10和100 mg/L)和TGF-β1(浓度为5μg/L)的干预组。细胞形态变化采用倒置相差显微镜观察;细胞免疫荧光染色检测III型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和钙黏蛋白(E-cadherin)的表达;反转录聚合酶链反应检测α-SMA、骨形成蛋白-7(BMP-7)、紧密连接蛋白(Tjp1)、I型胶原(Col1a1)、III型胶原(Col3a1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和抑制因子-2(TIMP-2)m RNA的表达。结果:TGF-β1作用后,NRK-52E细胞形态发生变化,形成了长梭状的肌成纤维细胞(MFs);其上皮标志物E-cadherin和Tjp1的表达水平显著下降,而MFs标志物α-SMA表达显著增加;基质成分Col1a1和Col3a1的表达也明显增高。应用10和100 mg/L的SSBE干预后,抑制了TGF-β1诱导的细胞形态改变和α-SMA、Col1a1和Col3a1的高表达,并促进E-cadherin和Tjp1的表达。另外,SSBE也提高了BMP-7表达水平和MMP-2/TIMP-2比值。结论:SSBE可抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化样改变,而这一作用与其能有效阻止EMT进程和基质累积有关。

垂盆草总黄酮对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β 1和Smad7表达的影响

目的:观察垂盆草总黄酮(SSTF)对CCL_4诱导肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1和Smad7蛋白及mRNA表达的影响。方法:60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组,SSTF低剂量组(100 mg·kg^(-1))、SSTF中剂量组(200 mg·kg^(-1)),SSTF高剂量组(400 mg·kg^(-1))和秋水仙碱阳性药对照组,共6组,每组10只。CCl_4皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型,同时SSTF灌胃干预,7周后处死大鼠。采用Masson染色法检测大鼠肝脏组织病理学改变,Western blotting法检测肝脏组织TGF-β1和Smad7蛋白表达实时定量RT-PCR检测肝脏组织TGF-β1和Smad7mRNA表达。结果:与模型组比较,SSTF各剂量均能显著降低CCL_4诱导的肝纤维化程度(P<0.05);中高剂量可以显著减少肝组织中TGF-β1蛋白和mRNA表达(P<0.05),并且明显增加Smad7蛋白和mRNA表达(P<0.05)。结论:SSTF可有效地逆转实验性大鼠肝纤维化,其机制可能与下调肝组织中TGF-β1蛋白和mRNA表达及增加Smad7蛋白和mRNA表达有关。

垂盆草鲜用救治蛇伤优效性评价研究

目的:比较垂盆草鲜用/干用救治蛇伤药效差异,评价垂盆草鲜用优效性及可能机制.方法:首先采用蛇毒PLA2酶体外抑制实验评价垂盆草鲜/干提取物活性差异;然后采用蛇毒腹腔注射后口服药物治疗法、蛇毒与药物预混合后腹腔注射法、蛇毒肌肉注射后药物浸泡法,评价垂盆草鲜汁浓缩物、干品水提物、干品醇提物对蛇伤治疗作用.结果:垂盆草鲜药体外抑制PLA2(磷脂酶A2)活性优于干用各组.小鼠腹腔注射蛇毒后口服高剂量垂盆草提取物能够降低小鼠死亡率,且作用强于干品水提组和醇提组;蛇毒与药物预混合后腹腔注射,垂盆草鲜汁浓缩物高、低剂量均能显著延长小鼠生存时间、降低小鼠死亡率(P<0.05),并显著优于水提组和醇提组;药物浸泡法救治蛇毒肌肉注射造成的蛇伤,鲜药汁浸泡组对动物生存状态、生存率、肌肉组织保护作用均有显著改善(P<0.05),并优于水提液浸泡组.结论:垂盆草鲜用具有显著的抗蛇毒作用,且鲜用优于干用,其机制可能与降低蛇毒PLA2酶活性、调节Ca2+浓度保护凝血系统功能有关,其鲜用优效性与垂盆草鲜汁中保留更多生物活性成分有关.本研究提示垂盆草鲜用在蛇伤救治中更具时效性和优效性,具有重要的临床意义,符合传统中药蛇伤治疗“鲜者尤良”理念,也为其他中药鲜用提供了参考.