低温胁迫差异表达基因在佛手和枳中的半定量RT-PCR分析

以佛手(Citrus medica L.var.sarcodactylis Swingle)和枳(Poncirus trifoliata Raf.)为试材,-4℃低温处理24 h后,采用半定量RT-PCR技术,研究佛手34个低温胁迫差异表达基因在佛手和枳中的表达情况,通过比较获得佛手低温敏感相关基因,分析两者抗寒性差异原因。结果表明,佛手和枳中变化趋势不同的基因有17个,其中14个基因在佛手中表达量有变化,枳中表达量不变,3个基因在佛手与枳中表现出完全相反的变化趋势;8个基因变化趋势相同;9个基因在枳中未检测到。推测17个变化趋势不同的基因可能与佛手低温敏感相关,它们所介导的分子途径可为揭示佛手低温敏感提供有力证据;9个枳中未检测到的基因是佛手中特异表达基因,可能是引起佛手低温敏感,造成佛手和枳抗寒性差异的关键基因。

烟夜蛾感觉神经元膜蛋白基因的克隆、序列分析与组织特异性表达

利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术从烟夜蛾Helicoverpa assulta(Guenée)触角中扩增得到感觉神经元膜蛋白(sensory neuron membrane protein,SNMP)基因HassSNMP(GenBank登录号:EU580138)。序列分析结果显示,该片段长度为1658bp,其中ORF长1572bp,编码523个氨基酸残基,预测成熟蛋白分子量为59.2 kDa,等电点为6.54。序列比对结果表明,烟夜蛾与其它昆虫的SNMP基因推导表达的氨基酸序列具有较高的一致性。半定量RT-PCR研究结果显示,SNMP在烟夜蛾触角、头(去掉触角)、喙和足中表达,其中在触角中的表达量最高,且雌雄虫触角中的表达量差异不显著,在喙中的表达量次之,在翅、胸和腹中没有表达;此外,该基因在成虫、十日龄蛹以及卵中也有表达,其中在卵中的表达量相对较低;在幼虫、一日龄蛹、四日龄蛹和七日龄蛹中没有表达。该研究结果说明烟夜蛾SNMP是非触角特异性表达基因。

NaCl胁迫对水稻品种中花11幼苗根系生长发育的影响

以水稻中花11幼苗为材料,探讨高浓度NaCl处理对其根系生长发育的影响。结果表明,200 mmol/L NaCl胁迫下,幼苗胚根生长受到抑制,不定根数目减少,根毛数量减少长度变短;幼苗根系出现褐化,且根系木质素含量增加,根系过氧化物酶(POD)活力显著上升;半定量RT-PCR检测显示,盐胁迫应答基因OsCDPK7表达显著下降,P 5 CS 1表达上升,OsHKT 1;5、OsNHX 1在处理初期表达上升,其后随处理时间延长而下降。

强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞的组蛋白甲基化

目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者外周血单个核细胞(PBMC)组蛋白修饰情况。方法收集27例AS患者及22例健康对照者的静脉血;分离PBMC,采用H3K4、H3K9甲基化检测试剂盒提取组蛋白和检测H3K4、H3K9甲基化水平;半定量PCR法检测AS患者的PBMC组蛋白甲基转移酶基因(SET1、SUV39H1和SUV39H2)的mRNA表达水平;ELISA分析外周血白细胞介素(IL)-23、IL-17和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平。结果与健康对照者比较,AS患者PBMC组蛋白H3K4甲基化水平显著升高(P<0.05),而两者组蛋白H3K9甲基化水平比较差异无统计学意义(P>0.05);半定量PCR结果显示AS患者PBMC的SET1和SUV39H1基因表达水平分别是健康对照者的1.73和0.68倍(P<0.05),而两者PBMC的SUV39H2基因的表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);AS患者中IL-23、IL-17、TNF-α的蛋白表达水平显著高于健康对照者(P<0.05,P<0.01);AS患者PBMC组蛋白H3K4甲基化水平与血清中IL-23、IL-17和TNF-α蛋白表达水平均呈正相关(P<0.05)。结论 AS患者外周血PBMC组蛋白甲基化呈现异常,且与AS发生发展有一定的相关性。