Sephadex G-50纯化生姜蛋白酶的研究

采用Sephadex G-50为填料对粗提生姜蛋白酶进行了纯化,充分利用了尺寸排阻层析简便、高效、重复性好的特点,以酶得率、纯化倍数、柱效分析等参数为指标,研究了凝胶柱床高度、洗脱速度、上样量等条件对纯化效果的影响。确定了最佳纯化方案为:柱床高度50cm,上样量3mL粗酶,流速45cm/h,洗脱液总用量150mL。纯化后的生姜蛋白酶比活性是姜汁的4.192倍,粗酶的2.113倍,而且还去除了色素、不溶物等杂质,纯化效果极佳。

Sephadex G-10凝胶色谱系统测定头孢美唑钠的聚合物

目的 建立凝胶色谱法测定头孢美唑钠的聚合物的方法。方法 色谱柱为葡聚糖凝胶Sephadex G-10（16mm×35cm），流动相A：0.02mg·mL^-1磷酸盐缓冲液（pH7．O）；流动相B：水。流速为1．0mL·min^-1。检测波长为254nm，进样量为200μl。结果 头孢美唑钠在5、O～60.0mg·mL^-1范围内，浓度与聚合物的峰面积呈良好的线性关系（r=0.9996）。结论 该方法简便，准确，灵敏度高，重现性好。

Sephadex G-10凝胶色谱法测定注射用哌拉西林钠中高分子聚合物

目的:建立注射用哌拉西林钠中哌拉西林聚合物的测定方法。方法:采用凝胶色谱法。色谱柱:葡聚糖凝胶G-10为填充剂RASIS柱(SephadexTM,G-10,40～120μm,13mm×400mm);流动相A:pH7.0的0.01mol·L-1磷酸盐缓冲液[0.01mol·L-1磷酸氢二钠溶液-0.01mol.L-1磷酸二氢钠溶液(61∶39)],流动相B:超纯水;流速为1.0mL·min-1,检测波长254nm。结果:哌拉西林聚合物线性范围为40.10～180.45mg·L-1(r=0.9996)。结论:方法简便易行,可基本保证所有高分子杂质被排阻,满足药品质量控制的需要。

Ficoll分离液在Sephadex G-100微柱凝胶血型卡中的应用

目的 探讨Sephadex G-100微柱凝胶血型卡加入Ficoll分离液后的性能和应用.方法 在Sephadex G-100微柱凝胶血型卡中加入Ficoll分离液,制作成Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡,对200例标本进行ABO和Rh（D）血型测定,并与进口的强生血型卡和Sephadex G-100血型卡法进行比对.分别用37℃孵育强生血型卡、45℃孵育强生血型卡和45℃孵育Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡三种方法对6例低、中、高不同效价的冷凝集素标本进行ABO和Rh （D）血型测定,同时进行反定型血型检测.分别用强生血型卡、Sephadex G-100血型卡和Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡对26例溶血标本进行ABO和Rh （D）血型测定.结果 自制Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡检测200例标本的血型结果,A型55例,B型46例,O型92例,AB型7例,Rh （D）均为阳性,与强生血型卡和Sephadex G-100微柱凝胶血型卡结果相同.自制血型卡检测抗D抗体平均滴度为1：256,与Diana凝胶卡灵敏度相同,明显优于传统试管法（P＜0.05）.45℃孵育Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡检测6例冷凝集素标本血型结果正确,正反定型一致,37℃和45℃孵育强生血型卡检测冷凝集素标本血型分别有3例和2例结果不正确,造成假阳性.Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡检测26例溶血标本血型结果正确,强生血型卡和Sephadex G-100血型卡检测溶血标本血型分别有6例和10例结果不正确.结论 研制Ficoll分离液-Sephadex G-100微柱凝胶血型卡适用于血型鉴定.对于冷凝集和溶血标本血型鉴定有明显优势.该卡具有准确、灵敏、特异、试剂制备工艺简单、成本低等优点,具有较好的推广应用和开发价值.

Sephadex G-10凝胶色谱系统测定头孢西丁钠中高分子聚合物

目的：建立测定头孢西丁钠中高分子聚合物的含量。方法采用SephadexG-10凝胶色谱系统。色谱柱：葡聚糖凝胶G-10色谱柱；流动相A：pH7．0的0．1mol·L^-1磷酸盐缓冲液[0．1mol·L^-1磷酸氢二钠溶液-0．1mol·L^-1‘磷酸二氢钠溶液（61：39）]，流动相B：超纯水；流速：1．0mL·min^-1，检测波长：254nm。结果：头孢西丁钠高分子聚合物在5～70g·L。的范围内线性关系良好，r=0．9943。结论：本方法专属性强，准确度高、重现性好，可作为头孢西丁钠中高分子聚合物含量的测定方法。

磷钒钼蓝-Sephadex G-25凝胶相双波长分光光度法测定微量磷

应用葡聚凝胶 (Sephadex)G - 2 5从水溶液中吸附富集磷钒钼蓝杂多酸 ,在 80 0nm和 70 0nm处应用固相分光光度法直接测定磷钒钼蓝 -凝胶相吸光度差 ,磷量在 0 - 8μg/ 5 0mL范围内符合比尔定律 ,用于分析高纯硫酸钠中微量磷 。

Sephadex G-25对乳酸链球菌素溶液脱盐的研究

目的研究乳酸链球菌素的凝胶过滤脱盐法。方法比较在Sephadex G-25柱上加样量、加样体积、洗脱流速和高径比对脱盐效果的影响。结果确定了乳酸链球菌素的最佳脱盐工艺为:色谱柱高径比15:1,加样体积为每毫升凝胶0.1mL料液、加样量为每毫升凝胶7×104IU、用pH3.45的醋酸缓冲溶液在0.6mL/min流速下洗脱。在此条件下,乳酸链球菌素的脱盐收率和回收率都在90%以上。结论 Sephadex G-25能有效的将乳酸链球菌素和盐分离。

以Sephadex G-100制备微柱凝胶血型卡及其性能评估

目的本实验以Sephadex G-100制备血型卡并对其进行性能评估。方法用生理盐水浸泡等对Sephadex G-100凝胶进行预处理,通过控制浸泡时间、缓冲液、加入红细胞的量及其浊度等,制备血型卡。再对血型卡进行性能评估,包括符合率、灵敏度、批内重复率、批间重复性、有效期等。结果自制血型卡检测200例标本的血型结果和试管法、强生血型卡法全部符合。自制血型卡和强生凝胶卡检测抗B抗体平均滴度均为1:308,均明显优于传统试管法1:256(P<0.05)。自制血型卡检测抗B抗体滴度的批内重复性CV为8.1%,批间重复性CV为3.7%。自制血型卡稳定期约为8个月。结论以Sephadex G-100凝胶试剂制备血型卡具有重复性高、稳定性好、结果准确、试剂制备工艺简单、成本低等优点,具有较好的推广应用和开发价值。

SephadexG-10凝胶色谱系统分析头孢西丁钠的高分子聚合物

目的 建立 Sephadex G-10凝胶色谱系统分析头孢西丁钠高分子聚合物的方法。 方法 色谱柱为葡聚糖凝胶 G-10柱 ( 3 60 mm×16m m) ,流动相 A:0 .0 1mol· L- 1磷酸盐缓冲液 ( p H7.0 ) ,流动相 B:超纯水 ,流速 :1.0 ml· min- 1 ,检测波长 :2 5 4nm,进样量 :2 0 0μL。结果 头孢西丁钠进样浓度在 5～ 40 mg· m L- 1 的范围内与头孢西丁钠高分子聚合物的峰面积呈良好的线性关系 ( r=0 .9990 )。结论 该方法简便准确 ;灵敏度高 ;重现性好。

商品果胶酶中endo－PG的分离纯化及其部分性质研究

以Ａ．ｎｉｇｅｒ来源的果胶酶为材料，经过ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－５０及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００两步骤分离纯化得到电泳均一的ｅｎｄｏ－ＰＧ１及ｅｎｄｏ－ＰＧ２，其亚基分子量分别为３５ｋＤ及３７ｋＤ，含糖量为１１．２２％及８．３％，最大紫外吸收峰分别在２７４ｎｍ及２６９ｎｍ处，氨基酸组成分析结果表明Ｇｌｙ含量较高，Ｍｅｔ含量较低，不含Ｃｙｓ，并且酸性氨基酸含量高于碱性氨基酸，圆二色谱结果表明二级结构主要为α螺旋和β折叠，其中ｅｎｄｏ－ＰＧ１含α螺旋４５．１％，β折叠２４．９％；ｅｎｄｏ－ＰＧ２含α螺旋３９．６％，β折叠３６．５％。

微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)的分离纯化

利用产谷氨酰胺转胺酶的H-197菌株发酵产生MTG,发酵液通过高速离心、冷冻浓缩、乙醇沉淀、冷冻干燥,制得粗酶粉,粗酶粉溶解后经过Sephadex G-75柱得到较纯酶样.结果表明:经冷冻浓缩、乙醇沉淀后其活力回收率为44.6%,酶的比活为0.83 U/mg,较浓缩前增加了2.43倍;粗酶经Sephadex G-75凝胶过滤层析后得到较纯的酶,酶的比活力为1.44 U/mg,最终纯化倍数达7.08.

cRGD肽偶联去氢骆驼蓬碱磁纳米脂质体的包封率测定方法研究

目的建立葡聚糖凝胶柱洗脱法测定c RGD偶联去氢骆驼蓬碱磁纳米脂质体的包封率方法。方法逆相蒸发法制备c RGD偶联的去氢骆驼蓬碱磁纳米脂质体,紫外分光光度法测定去氢骆驼蓬碱的含量,葡聚糖凝胶柱洗脱法测定c RGD偶联的去氢骆驼蓬碱磁纳米粒脂质体的包封率,并考察葡聚糖凝胶类型、径高比、洗脱液、上样量对游离药物去氢骆驼蓬碱洗脱的影响。结果选择葡聚糖凝胶柱洗脱法,以sephadex G-50（100~300μm）装柱、径高比为1∶10、上样量为0.5 m L及PBS缓冲液为洗脱溶剂,能有效分离去氢骆驼蓬碱磁纳米脂质体中游离药物和脂质体,测得洗脱回收率为（98.68±1.08）%,3批去氢骆驼蓬碱磁纳米脂质体的平均包封率为78.52%。结论葡聚糖凝胶柱洗脱法可以作为c RGD偶联的去氢骆驼蓬碱磁纳米脂质体的包封率测定方法,该法较简单可行。

葡聚糖凝胶微柱离心-HPLC法测定紫杉醇-PEG功能化多壁碳纳米管的包封率

目的建立紫杉醇(PTX)-PEG功能化多壁碳纳米管(DSPE-PEG-MWCNTs-PTX)包封率的测定方法。方法采用葡聚糖G-50凝胶微柱离心法分离DSPE-PEG-MWCNTs与游离药物,用HPLC法测定结合在DSPE-PEG-MWCNTs的PTX,计算包封率。结果在本法选择的色谱条件下,PTX得到良好的分离,在2~200μg/m L(r=0.999 7)线性关系良好。葡聚糖G-50凝胶微柱离心法能有效分离DSPE-PEGMWCNTs与游离药物,测得DSPE-PEG-MWCNTs-PTX平均包封率为88. 17%,RSD为2. 33%(n=3)。结论建立的葡聚糖凝胶微柱离心-HPLC法简便快捷,测定结果准确可靠,可用于测定DSPE-PEG-MWCNTs-PTX包封率。

红芪多糖HG-2含量及联合透明质酸水凝胶的参数测定

目的制备红芪多糖HG-2及建立红芪多糖HG-2的含量测定方法,并联合透明质酸水凝胶测定凝胶时间、释药量、降解及溶胀率等参数。方法采用SephadexG-25纯化制备红芪多糖HG-2,苯酚-硫酸法测定含量,并用化学改性法制备透明质酸(HA)水凝胶,将二者联合制备红芪多糖HG-2HA水凝胶。结果红芪多糖HG-2的含量为95.97%,HA水凝胶的凝胶时间为(180±20)s;溶胀率为42.33%;并在第5天基本降解。红芪多糖HG-2HA水凝胶释药在第120h已趋于平稳,释药量为86.15%。结论选用葡萄糖作为对照品测定红芪多糖HG-2含量的方法简便、准确。红芪多糖HG-2HA水凝胶能够起到缓释作用,二者联用具有可行性,可以为后续动物实验提供理论依据。

用葡聚糖凝胶G-75层析柱制备高纯度细胞色素C

选择２ｍｏｌ／Ｌ硫酸在ｐＨ为４．０、温度为２５℃的条件下进行抽提，提取液经人造沸石吸附，２５％硫酸铵洗脱，然后加入固体硫酸铵盐析除去杂蛋白，最后加入２０％三氯乙酸沉淀，获得粗品，再采用２２６型弱酸性阳离子树脂和葡聚糖凝胶Ｇ－７５层析柱组合的新方法，制得了Ａ５５０ｒｅｄ／Ａ２８０为１．２８的高纯度细胞色素Ｃ。

从草鱼血清中提取抗草鱼出血病的IgM

采用sephadex G—200凝胶过滤法,对感染草鱼出血病的草鱼血清进行凝胶过滤,可提取草鱼免疫球蛋白IgM。试验结果:得到Sephadex G-200凝胶过滤的草鱼特异性免疫球蛋白IgM的分离曲线,经分析,在此分离曲线下收集的样品是草鱼特异性免疫球蛋白IgM。

椰子球蛋白多肽-亚铁螯合物的制备工艺

为提高椰子加工副产物的利用,对椰子球蛋白进行限制性水解制备多肽,并采用Sephadex G-25凝胶柱层析对多肽进行纯化,然后以椰子球蛋白多肽为原料与亚铁离子反应制备肽-亚铁离子螯合物。重点分析水解度、温度等因素对椰子球蛋白多肽亚铁离子络合能力的影响,并优化制备工艺。结果表明,用碱性蛋白酶结合风味蛋白酶制备的多肽的水解度最高(14.71%),产物的亚铁离子螯合能力也最高(24.66%);Sephadex G-25凝胶柱层析中分离出3个多肽组分,其中组分C的络合能力最高(28.67%);椰子球蛋白多肽C螯合亚铁离子最佳条件是多肽浓度1 mg/mL、40℃、pH 7.0、亚铁离子浓度0.5 mg/mL、时间0.5 h,此时螯合率为30.67%。荧光光谱、红外光谱等分析表明,椰子球蛋白多肽通过氨基、羧基和亚甲基与亚铁离子配位而形成螯合物。研究结果表明,用椰子球蛋白多肽为原料制备肽-亚铁螯合物切实可行,该螯合物可以应用于功能食品中来改善铁营养缺乏。

酵母蛋白多糖的分离纯化及鉴定

以热带假丝酵母和八孢裂殖酵母为材料 ,通过化学抽提法得到多糖粗取物 ,经DEAE 纤维素阴离子交换柱分离纯化得到组分Ma和Mb ,经SephadexG 2 0 0柱层析鉴定 ,它们为均一成分 ,分子量分别为 4 38kD和 6 6 7kD ;蛋白分析表明Ma和Mb为蛋白多糖 ;经薄层层析和高压液相分析 ,Ma主要含甘露糖 ,Mb则由甘露糖和半乳糖组成 ,其摩尔比为 1 3∶1 ;氨基酸组成分析表明Ma和Mb含有 4种极性氨基酸和 1 2种非极性氨基酸 ;经邻苯三酚自氧化法检测Ma与Mb均能抑制邻苯三酚自氧化 ,具有体外抗氧化能力。动物实验表明Ma和Mb具有抑制小白鼠肝癌H2 2实体瘤的作用。

玉竹糖蛋白分离纯化及其体外抗氧化能力

采用磷酸缓冲液浸提法提取玉竹糖蛋白粗品(Polygonatum odoratum glycoprotein,PDG),经葡聚糖凝胶G-100和刀豆凝集素A分离纯化,得到糖蛋白组分PDG1和PDG3,经高效液相色谱测定其分子质量,并检测PDG、PDG1和PDG3的体外抗氧化活性。结果表明,PDG1和PDG3的分子质量分别为186 k D和28.3 k D;玉竹糖蛋白具有一定的还原能力,对羟自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基具有较强的清除作用,对脂质过氧化具有抑制作用,且在一定质量浓度范围内(1~10 mg/m L)存在剂量关系,其抗氧化能力随着玉竹糖蛋白质量浓度的增加而增强,PDG1和PDG3的抗氧化能力优于PDG。

红芪多糖的提取分离纯化及组成分析

目的获得红芪多糖纯品并且得到其单糖组成。方法通过分步醇沉法和凝胶柱色谱获得红芪多糖纯品,用气相色谱法测其组成。结果红芪多糖1和2经Sephadex G-200纯化后分别得到两个组分,红芪多糖3通过Sephadex G-25得到两个组分;红芪多糖1,2,3均由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖五种单糖组成。结论分步醇沉法获得的三种多糖1,2,3经Sephadex G-200和Sephadex G-25纯化可获得红芪多糖纯品,GC法测其组成方法简便可行。