SERPINE1影响结肠癌细胞RKO和LoVo的增殖与凋亡

目的探究丝氨酸蛋白酶抑制剂1(serine proteinase inhibitor family E member 1,SERPINE1)在结肠癌(colon adenocarcinoma,COAD)中的表达、意义及对COAD细胞增殖与凋亡的影响,了解其在COAD进展中发挥的生物学功能。方法通过Gene Expression Profilling Interactive Analysis2.0(GEPIA2.0)数据库分析SERPINE1在COAD中的表达与分期及预后关系。收集作者医院5例COAD患者癌组织与对应的正常结肠组织标本,应用Western blot实验验证SERPINE1在COAD中的表达;接着构建SERPINE1过表达与干扰表达的慢病毒载体,进行细胞转染,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和Western blot对实验细胞筛选并验证过表达和干扰表达的效率;进而通过细胞计数试剂盒(cell counting kit 8,CCK-8)和Hoechst细胞核染色检测细胞增殖与凋亡;最后通过Western blot实验了解其对增殖标志物Ki-67(marker of proliferation Ki-67,MKI67)、Bcl-2关联X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)与B细胞淋巴瘤2基因(B cell lymphoma 2,Bcl-2)比值的影响。结果通过GEPIA2.0数据库查找并分析COAD中SERPINE1表达与临床分期和预后关系发现,SERPINE1在COAD中表达水平高于正常结肠组织,SERPINE1的表达水平与临床分期正相关,而与预后生存总生存期负相关(P均<0.05)。CCK-8实验结果表明,oe-RKO组和oe-LoVo组COAD细胞在48h时间点吸光度(optical density,OD)值大于oe-RKO-NC组和oe-LoVo-NC组,sh-RKO-822组和sh-LoVo-822组COAD细胞在48 h时间点OD值小于sh-RKO-NC和sh-LoVo-NC组(P均<0.05)。Hoechst凋亡细胞核染色结果表明,oe-RKO组和oe-LoVo组COAD细胞凋亡数量低于oe-RKO-NC组和oe-LoVo-NC组,sh-RKO-822组和sh-LoVo-822组COAD细胞凋亡数量明显高于sh-RKO-NC组和sh-LoVo-NC组(P均<0.05)。Western blot结果显示,oe-RKO组和oe-LoVo组COAD细胞MKI67蛋白表达明显高于oe-RKO-NC组和oe-LoVo-NC组,Bax/Bcl-2明显低于oe-RKO-NC组和oe-LoVo-NC组;sh-RKO-822组和sh-LoVo-822组COAD细胞MKI67蛋白表达明显低于sh-RKO-NC组和sh-LoVo-NC组,Bax/Bcl-2明显高于sh-RKO-NC组和sh-LoVo-NC组(P均<0.05)。结论SERPINE1在COAD中高表达、与临床分期正相关,而与患者预后负相关;SERPINE1可能通过影响COAD细胞MKI67表达和Bax/Bcl-2促进COAD RKO和LoVo细胞的增殖,抑制其凋亡。

褐飞虱丝氨酸蛋白酶抑制剂基因Nlserpin2的克隆及其功能分析

【目的】克隆鉴定褐飞虱(Nilaparvata lugens)丝氨酸蛋白酶抑制剂基因Nlserpin2,探明其表达模式和生物学功能。【方法】基于褐飞虱转录组数据,利用PCR技术克隆Nlserpin2全长cDNA序列;利用生物信息学手段分析其核酸和蛋白序列特征;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测其在褐飞虱不同发育时期(卵、1—5龄若虫和雌雄成虫)和初羽化雌成虫不同组织(脂肪体、肠道和卵巢)中的表达,以及病原真菌金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)侵染褐飞虱5龄若虫不同时间后的诱导表达模式;利用RNAi技术探明Nlserpin2基因沉默对褐飞虱5龄若虫存活率及抵御金龟子绿僵菌侵染能力的影响。【结果】Nlserpin2 cDNA序列(GenBank登录号:KC355239)全长1209 bp,编码402个氨基酸,含有serpin蛋白超家族所具有的典型serpin结构域和RCL区,且N端包含一段由27个氨基酸残基组成的信号肽。系统进化树分析表明,Nlserpin2与半翅目其他昆虫的serpin聚为一支,其中与白背飞虱(Sogatella furcifera)serpin亲缘关系最近。qRT-PCR分析表明,Nlserpin2表达具有明显的时空特异性,其在褐飞虱成虫中的表达量显著高于其他龄期,且在雄成虫中表达量最高;卵和低龄若虫(1—3龄)中Nlserpin2的表达量显著低于高龄若虫(4—5龄),其中3龄若虫期最低;Nlserpin2在褐飞虱雌成虫肠道、脂肪体和卵巢中均有表达,且肠道中表达量显著高于脂肪体和卵巢。金龟子绿僵菌诱导2 d和3 d后Nlserpin2的表达量显著上调,但随着诱导时间的增加,Nlserpin2表达量呈回稳趋势。RNAi分析结果显示,显微注射dsNlserpin2可显著抑制Nlserpin2的表达水平。干扰Nlserpin2后褐飞虱5龄若虫的存活率以及对金龟子绿僵菌侵染的抵御能力均显著降低。与对照组相比,Nlserpin2干扰的褐飞虱在金龟子绿僵菌侵染5 d和8 d后的校正存活率分别下降了28.4%和31.0%,且均达到显著水平。【结论】Nlserpin2在褐飞虱防御病原真菌侵染过程中发挥重要作用,可作为应用RNAi技术防控褐飞虱的潜在靶标和褐飞虱高毒力病原真菌遗传改良的资源基因。

SerpinB2过表达在评估乳腺癌患者预后方面的临床意义

目的:探讨SerpinB2过表达在评估乳腺癌患者预后方面的临床意义。方法:对150例乳腺癌患者的癌组织及30例乳腺癌患者的癌旁组织标本进行免疫组化两步法染色,然后采用双盲法判定其结果,若组织标本的染色结果为(++)^(+++)可判定其中SerpinB2的表达呈阳性。分析SerpinB2在本组乳腺癌患者的癌组织中表达的情况及SerpinB2过表达与本组乳腺癌患者的癌组织临床病理参数的关系。结果:与癌旁组织相比,SerpinB2在本组乳腺癌组织中表达的阳性率较高,差异有统计学意义(P<0.05)。SerpinB2的过表达与患者的年龄、其肿瘤的大小及TNM分级均无关(p>0.05)。与未发生淋巴转移的患者相比,本组中发生淋巴转移的患者其癌组织中SerpinB2表达的阳性率较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SerpinB2在乳腺癌组织中呈异常的高表达,SerpinB2的过表达可能成为预测乳腺癌患者是否发生癌细胞淋巴转移的重要指标。

妊娠早期血清SerpinB1、NRG4水平对妊娠期糖尿病的预测价值

目的探讨妊娠早期血清丝氨酸蛋白酶抑制剂B1(SerpinB1)、神经调节蛋白4(NRG4)水平对妊娠期糖尿病(GDM)的预测价值。方法选取2020年12月至2022年2月在本院产检并分娩的161例GDM产妇作为GDM组,选取同期产检并分娩的152例非GDM产妇作为对照组。比较两组妊娠早期的血清SerpinB1、NRG4水平,分析其与其他血清学指标的相关性及对GDM发生和不良妊娠结局的影响及预测价值。结果GDM组的0、60、120 min口服葡萄糖耐量试验(OGTT)血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三酯(TG)及SerpinB1水平高于对照组,NRG4水平低于对照组(P<0.05)。妊娠早期血清SerpinB1水平与0、60、120 min OGTT血糖、HbA1c、TG呈正相关,与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)呈负相关(P<0.05);妊娠早期血清NRG4水平与0、60、120 min OGTT血糖、HbA1c、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)呈负相关,与HDL-C呈正相关(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,妊娠早期SerpinB1水平升高是GDM发生的危险因素(OR>1,P<0.05),NRG4水平升高是GDM发生的保护因素(OR<1,P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线显示,血清SerpinB1、NRG4对GDM具有一定的预测价值。不良妊娠结局组的SerpinB1水平高于妊娠结局正常组,NRG4水平低于妊娠结局正常组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,妊娠早期血清SerpinB1水平升高是GDM不良妊娠结局的危险因素(OR>1,P<0.05),NRG4水平升高是GDM不良妊娠结局的保护因素(OR<1,P<0.05)。ROC曲线显示,血清SerpinB1、NRG4对GDM不良妊娠结局具有一定的预测价值。结论妊娠早期血清SerpinB1、NRG4水平与GDM的发生及不良妊娠结局相关,在GDM发生及不良妊娠结局的预测中均有一定的临床价值。

老年高危心血管病患者应用依洛尤单抗的有效性及安全性研究

目的探讨老年高危心血管病患者应用依洛尤单抗治疗的有效性和安全性。方法纳入2019年11月至2022年11月在解放军总医院第一、二、六、八医学中心心内科住院的经常规他汀类药物治疗后血脂控制不达标的心血管病高危患者153例,根据患者年龄分为非老年组(<60岁)46例,60~74岁老年组66例,≥75岁老年组41例,均按指南应用依洛尤单抗治疗;选取同期在解放军总医院第一、二、六、八医学中心心内科住院血脂控制不达标的年龄≥75岁心血管病高危未应用依洛尤单抗患者50例为常规治疗组,应用一种他汀类药物联合依折麦布治疗。比较各组患者临床基线资料及用药第4、12周的血液指标和12周内药物不良反应及主要不良心血管事件(MACE)发生情况。结果非老年组、60~74岁老年组和≥75岁老年组用药第4、12周低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和总胆固醇(TC)水平较基线降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);3组用药第12周LDL-C、TC水平比较无显著差异(P>0.05)。非老年组、60~74岁老年组、≥75岁老年组用药12周内不良事件发生率比较无显著差异(2.2%vs 3.0%vs 2.4%,P>0.05)。≥75岁老年组和常规治疗组用药第12周LDL-C、TC水平显著低于基线(P<0.05,P>0.01);≥75岁老年组用药第12周LDL-C水平显著低于常规治疗组[(1.36±0.44)mmol/L vs(1.87±0.56)mmol/L,P<0.01]。≥75岁老年组和常规治疗组用药12周内MACE发生率比较无显著差异(12.2%vs 16.0%,P>0.05),2组生存率比较无显著差异(P=0.576)。结论各年龄组患者应用依洛尤单抗治疗均可在短期内取得良好疗效,75岁以上老年患者应用依洛尤单抗治疗同样具有良好的有效性和安全性。

双肾血流阻力指数联合脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂预测2型糖尿病肾脏疾病患者肾功能的价值

目的探讨双肾血流阻力指数联合脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor,Vaspin)预测2型糖尿病肾脏疾病患者肾功能的价值。方法选取2021年8月至2022年8月秦皇岛市第一医院收治的108例2型糖尿病肾脏疾病患者,入院后进行彩色多普勒超声检查,测量患者双肾血流阻力指数,将患者分为肾血流阻力指数升高组40例和肾血流阻力指数正常组68例。采用酶联免疫吸附试验检测血清Vaspin水平,并搜集患者临床资料;采用单因素和多因素Logistic回归分析影响肾血流阻力指数升高的危险因素。采用Pearson分析肾血流阻力指数、Vaspin与临床资料的关系,根据肾血流阻力指数、Vaspin绘制受试者工作特征曲线,以曲线下面积评估其对2型糖尿病肾脏疾病患者肾功能的预测价值。结果两组患者性别、糖尿病肾脏疾病分期、尿蛋白定量、血白蛋白、糖化血红蛋白、血尿酸、尿白蛋白与肌酐比值、尿α1微球蛋白、尿β2微球蛋白等一般资料比较差异均无统计学意义(P>0.05);肾血流阻力指数升高组患者年龄[(56.33±5.19)岁比(50.78±5.24)岁]、糖尿病病程[(12.58±3.42)年比(10.13±3.25)年]、高血压(87.50%比61.76%)高于肾血流阻力指数正常组,而三酰甘油[(1.72±0.45)mmol/L比(2.11±0.58)mmol/L]、低密度脂蛋白[(2.33±0.57)mmol/L比(2.61±0.62)mmol/L]、血红蛋白[(102.39±21.64)g/L比(113.76±28.45)g/L]、左肾体积[(76.58±15.33)cm^(3)比(81.35±17.16)cm^(3)]、右肾体积[(71.62±12.39)cm^(3)比(80.47±16.51)cm^(3)]、估算肾小球滤过率[(40.37±12.58)mL·min^(-1)·(1.73 m^(2))-1比(52.14±13.26)mL·min^(-1)·(1.73 m^(2))^(-1)]、血清Vaspin水平[(1.52±0.38)μg/L比(1.74±0.43)μg/L]低于肾血流阻力指数正常组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,肾血流阻力指数与低密度脂蛋白、估算肾小球滤过率、血清Vaspin呈负相关关系(P<0.05),与血肌酐、尿白蛋白与肌酐比值呈正相关关系(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄≥55岁(OR=1.061,95%CI:1.036~1.086)、血肌酐升高(OR=1.012,95%CI:1.004~1.020)、估算肾小球滤过率升高(OR=1.037,95%CI:1.007~1.068)、血清Vaspin下降(OR=1.132,95%CI:1.053~1.217)是影响肾血流阻力指数升高的独立危险因素(P<0.05)。双肾血流阻力指数联合Vaspin预测2型糖尿病肾脏疾病患者肾功能进展的曲线下面积为0.79,敏感性和特异性分别为82.49%、68.73%。结论双肾血流阻力指数升高、血清Vaspin水平降低是影响2型糖尿病肾脏疾病患者肾功能的独立危险因素,二者联合检测对预测2型糖尿病肾脏疾病患者肾功能进展具有较好预测价值。

鲢鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶的研究

本文研究了白鲢鱼肌肉中肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofibril-boundserineproteinase,MBSP)的作用。SDS-PAGE结果显示肌原纤维在55～60℃下加热后肌球蛋白重链有明显的分解现象。长时间加热也导致α-辅肌动蛋白,肌动蛋白和原肌球蛋白的分解。此结果表明鲢鱼肌肉中存在肌原纤维结合型蛋白酶。丝氨酸蛋白酶抑制剂(PefablocSC和利马豆胰蛋白酶抑制剂)及金属蛋白酶抑制剂EDTA有效抑制了肌球蛋白重链的分解,而其它酶类的抑制剂不产生任何作用,提示该酶为需金属离子激活的肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶。

大豆胰蛋白酶抑制剂对鲢丝氨酸蛋白酶的作用

研究了大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)对鲢肌肉中肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)引起的肌原纤维蛋白降解作用的影响。大豆胰蛋白酶抑制剂经高度纯化后加入肌原纤维中以判断它对MBSP的抑制效果。在不添加STI的情况下,55℃加热30min即可观察到肌球蛋白重链的分解,延长加热时间则可检测到肌动蛋白及原肌球蛋白的降解。相反,在终浓度为0.75μg·mL-1的STI存在下,包括肌球蛋白重链在内的肌原纤维蛋白降解均能得到有效抑制,表明STI是MBSP的特异性抑制剂。由于肌球蛋白重链及肌动蛋白的完整性是构成鱼糜制品凝胶强度的主要因素,因此,STI的添加有可能提高鲢鱼糜制品的凝胶强度。

豆类植物蛋白酶抑制剂研究进展

对国内外豆类丝氨酸蛋白酶抑制剂和半胱氨酸蛋白酶抑制剂的结构、理化性质和生理功能进行了阐述,探讨了在抗虫植物基因工程和临床上的应用。

Vaspin与2型糖尿病肾病的相关性研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清中脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂Vaspin与糖尿病肾病(DN)的关系。方法选取2013年11月—2014年2月秦皇岛市第三医院内分泌科住院的T2DM患者94例,根据24 h尿清蛋白排泄率(UAER)分为糖尿病(DM)组(UAER≤20μg/min)和DN组(UAER>20μg/min)。选取同期该院50例健康体检者为对照组。测定血清Vaspin及空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、血脂、糖化血红蛋白(Hb A1c)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平,采用稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),分析血清Vaspin与各指标之间的相关性,并对T2DM发生DN的影响因素进行Logistic回归分析。结果 DN组血清Vaspin水平低于DM组、高于对照组,DM组高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.001)。DM组Vaspin水平与三酰甘油(TG)、FBG、Hb A1c、ln FINS、ln HOMA-IR、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)相关(r=0.239、0.521、0.593、0.320、0.225、-0.357,P<0.05),DN组Vaspin水平与FBG、ln FINS、ln HOMA-IR相关(r=-0.532、-0.276、-0.239,P<0.05)。Logistic回归分析显示Vaspin〔OR=0.59,95%CI(0.48,0.92)〕、Hb A1c〔OR=1.75,95%CI(1.33,2.31)〕、BMI〔OR=4.83,95%CI(1.17,19.95)〕、ln HOMA-IR〔OR=1.36,95%CI(1.08,1.73)〕为DN的危险因素。结论胰岛素抵抗与低Vaspin水平是DN的危险因素,低Vaspin水平可作为DN的预测指标。

四项血清指标联合检测对冠心病危险分层的诊断价值

目的探讨D-二聚体、分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)、脂联素与内脏脂肪组织源性丝氨酸蛋白酶抑制剂(VASPIN)联合检测在冠心病临床诊断中的应用。方法选择老年冠心病患者240例,其中急性心肌梗死(AMI)组80例、不稳定性心绞痛(UAP)组80例、稳定性心绞痛(SAP)组80例。另选取健康体检者80例为对照组。分析4项指标的差异及其与Gensini积分的相关性。结果 4组D-二聚体、SFRP5、脂联素与VASPIN水平及Gensini积分比较,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,SAP组、UAP组和AMI组D-二聚体及Gensini积分明显升高,SFRP5、脂联素及VASPIN水平明显降低(P<0.05)。SAP组和UAP组D-二聚体及Gensini积分水平显著低于AMI组,SFRP5、脂联素及VASPIN水平明显高于AMI组(P<0.05);SAP组D-二聚体水平及Gensini积分明显低于UAP组,SFRP5、脂联素及VASPIN水平明显高于UAP组(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,SFRP5、脂联素及VASPIN水平与Gensini积分呈明显的负相关(r=-0.662,r=-0.532,r=-0.848,P<0.01),D-二聚体与Gensini积分呈正相关(r=0.526,P=0.003)。4项指标联合检测敏感性明显高于各项指标单独检测(P<0.05)。结论 4种指标联合检测可为老年冠心病类型鉴别诊断和疾病严重程度评估的重要依据。

水稻巯基蛋白酶抑制剂的分子修饰与其对稻瘟病菌的抑制作用

水稻巯基蛋白酶抑制剂（ＣＰＩ）经用二硫苏糖醇，对氯汞苯甲酸和碘乙酸修饰后，对木瓜蛋白酶的抑制活性并无改变；用Ｎ－乙基顺丁烯二酰亚胺与ＣＰＩ反应，可以测出ＣＰＩ分子内有１９个巯基被修饰，被修饰后，抑制活性仍无改变，表明水稻ＣＰＩ的抑制活性不需要巯基参与；应用Ｎ－溴代丁二酰亚胺与ＣＰＩ反应，可测出ＣＰＩ分子内有２个Ｔｒｐ被修饰，修饰后，抑制活性全部丧失，表明Ｔｒｐ是保持抑制活性所必需的基团。水稻巯基蛋白酶抑制剂和丝氨酸蛋白酶抑制剂对稻瘟病菌丝体的生长均有抑制作用，但后者的抑制作用比前者更强，若将两种抑制剂混合使用，则对稻瘟病菌丝体的抑制作用非常强烈；当抑制剂加入量达７２μｇ时，即可产生明显的抑制作用。

血清Vaspin与2型糖尿病合并颈动脉粥样硬化病变的关系

目的探讨血清丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)与早期2型糖尿病(T2DM)合并颈动脉粥样硬化(AS)病变的关系。方法根据超声对颈动脉检查结果将西安市中心医院2015年3月至2016年3月住院及门诊共60例初诊T2DM患者分为AS组(32例)和无AS组(28例),选取30例无糖尿病的健康体检者作为对照组。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组受检者的空腹血清Vaspin水平,同时检测血脂、血糖、糖化血红蛋白等指标,采用Logistic回归性分析血清Vaspin与T2DM合并AS的关系。结果无AS组患者的空腹血清Vaspin平均水平为(0.66±0.21)ng/m L,明显高于健康对照组的(0.47±0.13)ng/m L,差异有统计学意义(P<0.05);但AS组血清Vaspin平均水平为(0.51±0.24)ng/m L,明显低于无AS组,差异有统计学意义(P<0.05);而AS组与健康对照组血清Vaspin水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析结果表明收缩压(SBP)、血清Vaspin浓度是颈动脉斑块形成的主要危险因素。结论 Vaspin浓度对于早期T2DM患者颈动脉斑块的形成起重要作用。

他莫昔芬对人胃癌细胞增殖和丝氨酸蛋白酶抑制剂9表达的影响

目的 研究他莫昔芬（TAM）对胃癌细胞雌激素受体α、β（ERα和ERβ）的表达情况及对胃癌细胞增殖和丝氨酸蛋白酶抑制剂9（PI9）表达的影响。方法 对前期筛选出的ERα表达阳性胃癌细胞株MNK45、SGC7901（PI9表达阳性）和ERβ表达阳性胃癌细胞株BGC823（PI9表达阴性）,采用免疫荧光化学法检测TAM对ERα和ERβ表达的影响,CCK8法检测TAM干预后胃癌细胞株的增殖情况,逆转录PCR观察TAM干预后PI9表达的变化。结果 ERα表达于MNK45和SGC7901细胞核上,ERβ表达于BGC823细胞核上,经TAM干预后ERα和ERβ表达均无明显改变;TAM在0.1~100.0μmol/L时可明显抑制SGC7901、MNK45的细胞增殖,与阴性对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,对BGC823和MNK28的细胞增殖无明显剂量依赖关系;TAM干预后SGC7901的PI9mRNA的相对灰度值为（0.402±0.020）,MNK45的PI9mRNA的相对灰度值为（0.359±0.048）,较阴性对照组灰度值均明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 TAM对ERα和PI9阳性表达细胞的增殖抑制作用强于PI9阴性表达细胞,并呈较好的剂量依赖性;TAM对胃癌的生长抑制作用可能与改善PI9介导的免疫耐受有关。

蛋白酶抑制剂对杨扇舟蛾的中肠蛋白酶作用的研究(英文)

研究了杨扇舟蛾幼虫的中肠几种主要蛋白酶活性．以14C-酪蛋白为底物测定的总消化酶活性在碱性缓冲液中最高；特异蛋白酶抑制剂研究表明：只有丝氨酸蛋白酶抑制剂对中肠蛋白酶活性有抑制作用，其它的特异蛋白酶抑制剂如半光氨酸蛋白酶抑制剂、天门冬氨酸蛋白酶抑制剂和金属蛋白酶抑制剂对中肠的酶活均无抑制作用，可以认为杨扇舟蛾的中肠蛋白酶以丝氨酸蛋白酶为主．以特异的p－nitroanilide为底物测定胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶和亮氨酸蛋白酶活性在碱性缓冲液中最高，且以弹性蛋白酶活性最高．在所研究的23个丝氨酸蛋白酶抑制剂中，抑制作用最强的是马铃薯蛋白酶抑制剂I和南瓜韧皮胰蛋白酶抑制剂．本研究丰富了对杨扇舟蛾的中肠蛋白酶种类的了解，为杨树抗虫基因构建和转化提供了依据．

寄生性蠕虫丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展

丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin)是一种蛋白水解酶,广泛存在于生物体中。本文论述了丝氨酸蛋白酶抑制剂的分类、结构、功能及在寄生性蠕虫中的研究进展。指出通过对Serpin的研究,有望使其作为寄生性蠕虫病诊断和疫苗的候选分子,为寄生性蠕虫病防治奠定基础。

血清Vaspin、CTRP9在多囊卵巢综合征患者中的表达及其意义

【目的】探讨血清丝氨酸蛋白酶抑制剂（Vaspin）、肿瘤坏死因子相关蛋白9（CTRP9）在多囊卵巢综合征（PCOS）患者中的表达及其意义。【方法】收集2015年3月至2016年8月在本院确诊为PCOS患者59例（观察组），按照WHO肥胖标准[体质量指数（BMI）≥25kg／m2]分为非肥胖28例（观察A组）、肥胖31例（观察B组）；另选同期在本院行体检的健康女性60例（对照组），根据BMI分为非肥胖31例（对照A组）、肥胖29例（对照B组）。检测并比较四组受栓者血清中Vaspin、CTRP9水平，比较四组一般情况及生化指标如三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、空腹胰岛素（FINS）、总睾酮、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）及稳态期120-180min葡萄糖代谢率（M120-180）。【结果】观察组血清Vaspin水平明显高于对照组，血清CTRP9水平明显低于对照组，其差异有统计学意义（P〈0．05）；Pearson相关分析显示，Vaspin水平与患者HDL-C、M120-180呈负相关（P〈0．05），与BMI、TC、LDL-C、腰围、FINS、TG、总睾酮、HO-MA-IR水平呈正相关（P〈0．05）；CTRP9水平与患者HDL-C、M120-180呈正相关（P〈0．05），与BMI、TC、LDL-C、腰围、FINS、TG、总睾酮及HOMA-IR水平呈负相关（P〈0．05）；血清Vaspin、CTRP9水平与年龄均无明显相关性（P〉0．05）。【结论】与健康人群相比，PCOS患者血清Vaspin水平较高，CTRP9水平低；BMI、TC、HDL-C、腰围、FINS、TG、总睾酮、HOMA-IR、LDL-C、M120-180指标与血清Vaspin、CTRP9水平密切相关。

瑞舒伐他汀对冠心病患者血清Vaspin、ROCK活性及FMD的影响及其临床意义

目的 探讨瑞舒伐他汀对冠心病（CHD）患者血清腹腔脂肪型丝氨酸蛋白酶抑制剂（Vaspin）水平、Rho激酶（ROCK）活性、肱动脉血流介导的舒张功能（FMD）的影响及其临床意义.方法 选取2015年7月至2016年7月在我院诊治的120例CHD患者,采用前瞻性随机研究方法分为瑞舒伐他汀组和阿托伐他汀组各60例.两组患者均采用一致的基础治疗,对比两组治疗8周后的血清Vaspin、ROCK活性、FMD等指标.结果 治疗后,瑞舒伐他汀组与阿托伐他汀组比较,TG[（1.20±0.35）mmol/L比（1.28±0.37）mmol/L]、TC[（4.41±0.85）mmol/L比（4.60±0.76）mmol/L]、LDL-C[（1.56±0.45）mmol/L比（1.71±0.48）mmol/L]、HDL-C[（1.29±0.22）mmol/L比（1.22±0.27）mmol/L]未见统计学差异（P〉0.05）.治疗后,瑞舒伐他汀组的ROCK活性低于阿托伐他汀组[（40.8±6.3）%比（45.2±7.0）%]（P〈0.05）,FMD[（7.86±1.59）%比（6.82±1.63）%]、 血清Vaspin[（1.74±0.32）ng/ml比（1.48±0.39）ng/ml]高于阿托伐他汀组（P〈0.05）.瑞舒伐他汀组的血清IL-6[（200.7±32.5）pg/ml比（228.1±34.0）pg/ml]、IL-10[（20.9±2.4）ng/ml比（22.6±2.8）ng/ml]、TNF-α[（2.21±0.39）ng/ml比（2.65±0.44）ng/ml]水平低于阿托伐他汀组（P〈0.05）.结论 瑞舒伐他汀能抑制CHD患者ROCK活性,提高FMD及Vaspin水平,降低血清炎性因子水平.

长角血蜱丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的原核表达

根据GenBank中的长角血蜱丝氨酸蛋白酶抑制剂(Haemaphysalis longicornisserine proteinase inhibitor-2,HLS2)基因序列设计特异性引物,以长角血蜱饥饿成蜱总RNA为模板,经RT-PCR扩增出1 164 bp的HLS2DNA片段。将其与pET-30a载体连接,构建pET-30a-HLS2表达载体,转化J M109大肠杆菌,筛选阳性克隆,经双酶切鉴定及测序分析后转化到E.coliBL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析。优化表达条件后纯化融合蛋白,用Western blotting鉴定其抗原性。结果表明,获得的HLS2 DNA片段与GenBank中的HLS2(序列号AB162827)序列的同源性为98%。构建的pET-30a-HLS2表达载体在大肠杆菌中表达了约为47000的HLS2融合蛋白,主要以包涵体形式存在,IPTG终浓度为1.0 mmol/L、28℃诱导7 h后融合蛋白的表达量最高。Western blotting显示该融合蛋白可与兔抗长角血蜱阳性血清反应。

丝氨酸蛋白酶及其抑制剂研究新进展

该文综述了丝氨酸蛋白酶组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、尿激酶型纤溶酶原激活剂((u-PA)和凝血酶及其同源性抑制剂PAI-1、Neuroserpin和PN-1的表达以及在神经系统疾病中的作用,讨论了t-PA及其抑制剂Neuroserpin在神经系统中的作用,旨在为人类急性脑损伤的治疗提供新的思路。