Chi-CpG NP的制备及其对rNMB0315蛋白的免疫效果

目的制备黏膜免疫佐剂Chi-CpG NP,并检测其对重组B群脑膜炎奈瑟菌0315蛋白(rNMB0315)的免疫效果。方法用壳聚糖纳米颗粒(Chi NP)包裹免疫刺激分子(CpG-ODN)合成Chi-CpG NP,随后检测其理化性质和安全性。将不同黏膜免疫佐剂与rNMB0315充分混合、吸附,滴鼻免疫雌性BALB/c小鼠,检测PBS组、rNMB0315组、rNMB0315+CpG组、rNMB0315+Chi NP组、rNMB0315+Chi-CpG NP组小鼠免疫42天后的体液免疫(IgG、IgG1、IgG2a、sIgA)、细胞免疫水平[白细胞介素(IL)-4、γ干扰素(IFN-γ)、IL-17A]、免疫保护效果以及血清体外杀菌活性。结果成功制备的Chi-CpG NP呈球形,大小均一,有较好的吸附性能和良好的安全性。小鼠免疫42天后,体液免疫和细胞免疫水平rNMB0315+Chi-NP组、rNMB0315+Chi-CpG NP组高于rNMB0315组(P<0.05);rNMB0315+Chi-CpG NP组高于rNMB0315+CpG组和rNMB0315+Chi-NP组(P<0.05)。致死剂量B群脑膜炎奈瑟菌攻击各组小鼠后,rNMB0315+Chi-CpG NP组小鼠存活率最高;血清体外杀菌抗体滴度为1∶4。结论成功制备了Chi-CpG NP。Chi-CpG NP能增强rNMB0315蛋白的免疫效果,提高小鼠的存活率。

Molecular characterizations of serogroup B Neisseria meningitidis strains circulating in Beijing

Neisseria meningitidis （N. meningitidis） is classified into 13 serogroups based on the immunological reactivity of the capsular polysaccharide.Serogourp-s A,B and C are responsible for over 90% of meningococcal disease.2 In developed countries, endemic disease is generally caused by serogroups B and C.

PCR结合酶切-序列比对法鉴定B群脑膜炎奈瑟菌菌株

目的用PCR结合酶切-序列比对法对B群脑膜炎奈瑟菌菌株进行鉴定。方法用玻片凝集法对不同来源的15株B群脑膜炎奈瑟菌菌株进行初步检定,再用PCR结合酶切-序列比对法对上述15株菌株进行进一步鉴定,即用PCR结合酶切法扩增菌株的唾液酸转移酶sia D基因并对PCR产物进行酶切后,用BLAST软件将PCR产物测序结果与Gene Bank中原始sia D序列比对。结果 15株菌株玻片凝集结果均为阳性;15株菌株的PCR产物片段大小均为460 bp;TaqⅠ酶切后,13株菌株的酶切产物片段大小仍为460 bp,其PCR产物测序比对结果与B群脑膜炎奈瑟菌原始sia D序列同源性均达到99%;其余2株酶切产物片段大小约200 bp,与C群脑膜炎奈瑟菌sia D原始基因序列同源性分别为98%和99%。结论 15株菌株经PCR结合酶切-序列比对法鉴定,13株为B群脑膜炎奈瑟菌菌株,2株为C群脑膜炎奈瑟菌菌株;该方法可准确鉴定B群脑膜炎奈瑟菌菌株。

B群脑膜炎球菌疫苗候选抗原研究进展

B群脑膜炎球菌(MenB)的荚膜多糖结构与人体胚胎组织和神经组织结构类似,以MenB荚膜多糖作为疫苗抗原可能会引起人类的自身免疫病。因此,寻找非荚膜多糖抗原成为研制B群脑膜炎球菌疫苗的新选择。目前,可作为B群流脑疫苗的候选抗原包括:外膜囊泡和外膜蛋白、新型重组蛋白抗原NspA、fHBP、NadA、NhhA、GNA等。

B群脑膜炎球菌外膜蛋白0315不同形式疫苗免疫效果比较

目的:初步探讨和评价NMB0315核酸疫苗、重组蛋白疫苗及核酸疫苗+重组蛋白疫苗联合免疫诱导小鼠产生的特异性体液/细胞免疫应答水平及其免疫保护效果,为进一步探索NMB0315疫苗有效的免疫方法和途径提供实验依据。方法:大量制备核酸疫苗[pc DNA3.1(+)/NMB0315]和重组蛋白疫苗(p ET-30a/NMB0315),采用核酸初免-蛋白加强的方法联合免疫或分别免疫雌性BALB/c小鼠,测定特异性体液/细胞免疫应答水平、免疫血清体外杀菌效价,观察疫苗对感染B群脑膜炎球菌小鼠的免疫保护效果。结果:NMB0315核酸疫苗组(p NMB0315-Cp G)、蛋白疫苗组(r NMB0315-FA)及联合免疫疫苗组(p NMB0315-Cp G+r NMB0315-FA)诱导的血清特异性Ig G、Ig G1、Ig G2a及生殖道灌洗液中特异性s Ig A水平在第八周达到峰值,A450值分别为(0.505±0.042、0.513±0.022、0.342±0.017、0.250±0.015)、(0.823±0.061、0.807±0.045、0.596±0.027、0.450±0.028)和(0.694±0.053、0.711±0.032、0.455±0.021、0.386±0.024),明显高于PBS对照组(P<0.01);其中,蛋白疫苗组的抗体水平明显高于联合免疫疫苗组和核酸疫苗组(P<0.05)。小鼠脾淋巴细胞刺激指数及IFN-γ水平,联合免疫疫苗组明显高于蛋白疫苗组和核酸疫苗组(P<0.05);核酸疫苗组、蛋白疫苗组和联合免疫疫苗组免疫血清在补体介导下的体外杀菌抗体效价分别为1∶64、1∶128和1∶128,对实验小鼠的免疫保护率分别为70%、95%和80%。免疫2、4、6、8周时,核酸疫苗组、重组蛋白疫苗组和联合免疫疫苗组Ig G2a/Ig G1比值均小于1。结论:NMB0315疫苗诱导的体液免疫(包括黏膜免疫)效果从高到低为:重组蛋白疫苗组、联合免疫疫苗组、核酸疫苗组;诱导细胞免疫的效果从高到低为:联合免疫疫苗组、核酸疫苗组、重组蛋白疫苗组;NMB0315疫苗对实验小鼠的免疫保护效果从高到低为:重组蛋白疫苗组、联合免疫疫苗组、核酸疫苗组。

B群脑膜炎球菌多组分疫苗研究进展

目前获准上市的流脑疫苗主要有A群、A+C群脑膜炎球菌疫苗及A,C,W-135及Y群的四价脑膜炎球菌疫苗,B群脑膜炎球菌疫苗尚未研制成功。近年来,研究人员以疫苗外膜蛋白为基础,应用反向疫苗学技术对B群脑膜炎球菌疫苗进行了大量研究,现重点对B群脑膜炎球菌多组分疫苗的研究进展予以综述。

中国B群脑膜炎奈瑟菌分子流行病学特征分析

目的分析中国B群脑膜炎奈瑟菌分子流行病学特征。方法485株B群脑膜炎奈瑟菌为1968—2016年分离和收集于29个省份的菌株,包括流行性脑脊髓膜炎(流脑)病例脑脊液或血液标本分离菌株100株,健康带菌者鼻咽部分离菌株385株。根据多位点序列分型(MLST)网站公布的方法,对菌株进行PorA外膜蛋白分型和MLST分型,采用Bionumerics软件分析序列型(ST型),构建最小生成树;针对B群脑膜炎奈瑟菌蛋白疫苗的主要成分FHbp、NadA和NHBA蛋白进行分子型别分布和序列特征分析。结果485株B群脑膜炎奈瑟菌分为270种ST型,其中107种ST型(211株菌)可归入已知的10个克隆群,163种ST型(274株)不能归入任何克隆群;CC4821为主要流行的克隆群(28.7%,139株)。病例分离菌株的主要PorA型为P1.5-2,2-2(10.0%,10株)、P1.5-1,2-2(9.0%,9株)和P1.5-1,10-4(9.0%,株)。421株含有完整的FHbp氨基酸序列,其中变异1型(v1)、2型(v2)和3型(v3)菌株分别占12.8%(54株)、85.0%(358株)和2.2%(9株)。432株完成nadA基因测序,其中10株(2.3%)含有完整的nadA基因。172株完成nhba基因测序,均具有完整的nhba基因序列,其中170株的NHBA氨基酸序列共分为68个型,呈现出多态性特征。结论中国B群脑膜炎奈瑟菌优势克隆群为CC4821;其疫苗相关蛋白多态性较强。中国应该根据本国菌株的特征慎重选择B群流脑疫苗候选蛋白。

河北省首例B群脑膜炎奈瑟菌感染死亡病例报告

本文报告了河北省首例B群脑膜炎奈瑟菌致流脑死亡病例。患者为3月龄婴儿,始发症状为发热,恶心,呕吐,皮肤瘀点、瘀斑。因在血液和脑脊液中均分离培养得到B群脑膜炎奈瑟菌从而确诊。

北京发现ST4821克隆群B群脑膜炎奈瑟菌

目的对2013年1月北京市1例流行性脑脊髓膜炎(流脑)死亡病例标本进行脑膜炎奈瑟菌检测,了解感染病原及分离菌株的分子流行病学特征。方法对患者脑脊液标本进行细菌分离培养,通过常规细菌学试验对分离菌株进行脑膜炎奈瑟菌鉴定、实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative PCR)方法检测患者脑脊液和抗凝血中脑膜炎奈瑟菌核酸,同时对鉴定的菌株进行多位点序列分型(MLST)分析、外膜蛋白PorA分型和FetA分型,以及体外药物敏感试验。结果从患者脑脊液和抗凝血标本中均检测到脑膜炎奈瑟菌种特异基因ctrA和血清群B特异基因siaD。从患者脑脊液中分离到1株可疑阳性菌,经实验确诊为B群脑膜炎奈瑟菌。PorA为P1.20,23-9,FetA为F1-91;多位点序列分型分析显示基因型为ST10051,属于ST4821序列群。该菌株对复方新诺明为中等耐药,对环丙沙星和四环素耐药,对青霉素、头孢噻肟、头孢曲松、左氧氟沙星、美罗培南、氯霉素、利福平等药物均敏感。从密切接触者咽拭子中未分离到脑膜炎奈瑟菌。结论该菌株经鉴定为B:P1.20,23-9:F1-91:ST10051(ST4821序列群)。北京地区人群中已经存在高致病性ST4821克隆群B群脑膜炎奈瑟菌,并引发死亡病例,提示应全面掌握本地区脑膜炎奈瑟菌健康人群携带情况及病例菌株分子流行病学资料,为流脑的预防控制提供实验室数据支撑。

河北省首例B群流脑死亡病例病原学分析

目的对河北省首例B群流行性脑脊髓膜炎(流脑)死亡病例进行病原学分析。方法采集患儿血和脑脊液标本,进行生化鉴定和PCR目的基因的检测,对分离菌株进行Etest法药敏试验和多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)分析。结果该病例证实为B群脑膜炎奈瑟菌引起的脑膜炎病例,该菌株对磺胺甲基异噁唑、环丙沙星、萘啶酸耐药,对米诺霉素、阿奇霉素等敏感。MLST结果分析该菌为ST-9754型,属于ST-4821高致病克隆群。结论该病例为河北省首例B群流脑死亡病例,病原菌为具有高致病性的ST-9754型脑膜炎奈瑟菌,提示应要加强流脑病原学监测。

河北省B群脑膜炎奈瑟菌药物敏感性及分子分型分析

目的了解河北省分离的9株B群脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides,Nm)的药物敏感性及分子流行病学特征。方法对分离菌株进行E-test法药物敏感性试验和多位点序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)分析。结果药敏试验显示,9株B群Nm均对磺胺类抗生素耐药;6株分离自健康人的Nm中2株对喹诺酮类抗生素耐药;3株分离自流脑病人的Nm中的2株菌株对喹诺酮类抗生素耐药,且对青霉素类抗生素的敏感性降低。显示9株Nm菌株中的6株属于ST-4821克隆群,1株属于ST-175克隆群,2株无相应的克隆群。结论高致病性ST-4821已成为河北省B群Nm的优势克隆群,提示应加强流脑的病原学监测。

两株B群脑膜炎奈瑟氏菌脂寡糖减毒前后抗原性与毒性的检测

两株Ｂ群脑膜炎奈瑟氏菌脂寡糖减毒前后抗原性与毒性的检测孙银燕胡绪敬王君摘要脂寡糖（ＬＯＳ）是Ｂ群Ｎｍ的一种主要外膜抗原，用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－３００ＨＲ或ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶层析方法从两株Ｂ群Ｎｍ（５４２８５２和３４０７）中提取获得了纯度较...

1例罕见的新生儿B群流脑死亡病例的实验室结果分析

目的明确诊断并分析1例新生儿疑似流行性脑膜炎死亡病例可能的传染来源和传播途径。方法收集死亡病例的血液标本及其密切接触者的咽试子标本并进行菌株的分离培养和分型及药敏试验。结果死亡病例的血标本及其密切接触者患儿父亲咽试子标本均分离到B群脑膜炎奈瑟菌菌株,2株菌株对氨苄西林、环丙沙星、利福平、氯霉素、头孢噻吩、红霉素及四环素均敏感,对磺胺类药耐药。结论根据该病例的特点和实验室检测结果,判断该病例为B群脑膜炎奈瑟菌引起的死亡病例。

苏州市首例输入性ST3789型B群流行性脑脊髓膜炎死亡病例的分子特征分析

了解1例输入性B群流行性脑脊髓膜炎死亡病例及密切接触者病原学分子流行病学特征。分离来源于患者瘀斑及密切接触者咽拭子中病原体,常规细菌试验及聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴定,多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)分析脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)的7个管家基因的序列,结果显示分离到的4株脑膜炎奈瑟菌均为B群,基因型为ST3789型,该菌对世界卫生组织推荐的大部分抗生素敏感,对青霉素、磺胺中度耐药;环丙沙星1株中度耐药,2株耐药;氨苄西林1株敏感,2株中度耐药。

贵州省1例B群流行性脑脊髓膜炎病例的病原学分析

目的对贵州省遵义市2016年4月发现的1例B群流行性脑脊髓膜炎(流脑)病例进行病原学分析。方法采集患者血液标本,分离菌株,进行生化鉴定和血清分型、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST);采用KB纸片扩散法和Etest法对菌株进行药敏试验。结果从患者血液中分离到的菌株其菌落形态、生化特征均符合脑膜炎奈瑟菌特性,玻片凝集试验和Real-time PCR鉴定其血清型为B群,基因MLST分型为ST-12885型。该菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢曲松、阿奇霉素、美罗培南、米诺环素、氯霉素、利福平等抗生素敏感,对复方新诺明、左氧氟沙星、环丙沙星耐药。结论贵州省1例流脑患者血液中首次检出B群脑膜炎奈瑟菌,属ST-4821高致病性克隆群。因此应加强对流脑病原菌的检测,采取有效防控措施,合理使用抗菌药物。

2011-2016年河北省B群和C群流行性脑脊髓膜炎流行病学与病原学特征

目的分析201l2016年河北省B群和C群流行性脑脊髓膜炎（Meningococcal meningitis，MM）病例和菌株特征。方法采用描述性方法分析B群和C群MM病例的流行特征，对B群和C群脑膜炎奈瑟菌（Neisseria menin-gitidis，Nm）菌株进行多位点序列分型（Multi-locus sequencetyping，MLST）分析和抗菌药物敏感性试验。结果2011-2016年河北省分别报告B群、C群MM病例14例、27例；B群病例集中在邯郸和石家庄地区（10例，71．43％）、散居儿童（9例，64．29％），C群病例集中在邯郸地区（23例，85．19％）、中小学生（25例，92．59％）；冬春为高发季节（33例，80．49％）。MLST分析发现，CC4821为2012-2013年B群、C群Nm的优势克隆群（14／15）。首次在河北省发现B群Nm对头孢类药物不敏感，同时C群Nm对青霉素类药物敏感性降低。结论河北省B群和C群MM病例分别以婴幼儿、中小学生发病为主，且南部地区高发。建议适时引进B群脑膜炎球菌疫苗、开展中小学生A群C群脑膜炎球菌疫苗强化免疫、临床用药参考药敏试验。

深圳市一起B群流行性脑脊髓膜炎疫情的调查

目的调查B群流行性脑脊髓膜炎(流脑)疫情的原因。方法于2018年2月22、27日对患者和密切接触者进行流行病学调查,并收集脑脊液、血液和咽拭子样品进行分离培养、PCR检测和二代测序。结果在患者血液及其母亲咽拭子中均分离出B群脑膜炎奈瑟菌,多位点序列分型均为ST-3200/CC4821,2株菌的16S rRNA及耐药基因、多肽编码基因的相似性为100%。结论该疫情是由健康携带B群脑膜炎奈瑟菌的母亲传播给患者而引起。

B群Nm 3407菌株外膜蛋白复合物(OMPC)的提取及免疫原性

目的Ｂ群脑膜炎奈瑟氏菌Ｎｍ荚膜多糖作为菌苗候选成分效果不理想，有些非荚膜的抗原成分存在血清型和亚型的限制，为了能提取一种免疫原性强、并具有广泛的抗原交叉反应性的Ｂ群Ｎｍ外膜蛋白复合物（ｏｕｔｅｒｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎｃｏｍｐｌｅｘ，ＯＭＰＣ）以研制更有效的Ｂ群Ｎｍ菌苗提供依据。方法比较了从病人分离的Ｂ群Ｎｍ３４０７菌株提取ＯＭＰＣ的３种方法，用ＥＬＩＳＡ、杀菌力试验、小鼠免疫试验、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ测定ＯＭＰＣ的抗原滴度和免疫原性。结果在提取ＯＭＰＣ的３种方法中，选用７０％饱和硫酸铵初步沉淀细菌培养物的上清液，再经ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ┐３００ＨＲ纯化的方法，获得了３个洗脱峰。其中第一个洗脱峰中ＯＭＰＣ产量最高，溶解性最好。经ＳＤＳ┐ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ测定，其主要含有分子量为（４２，３９，３０，２６和１９）×１０３的蛋白和少量约（９２和７２）×１０３的蛋白。用ＥＬＩＳＡ测定此ＯＭＰＣ与兔抗菌株３４０７和５４２８５２血清反应的滴度分别为１∶３２０００和１∶６４０００；与小鼠抗此ＯＭＰＣ血清反应的滴度为１∶２５６００。另外，上述抗ＯＭＰＣ血清与菌株３４０７和５４２８５２反应的?

海南省首例B群流行性脑脊髓膜炎病例病原学分析

目的对海南省海口市2015年2月发现的1例新生儿B群流行性脑脊髓膜炎(流脑)病例进行病原学分析。方法采集新生儿血液接种于血培养瓶,对培养出的菌株采用生化鉴定、血清学分型和普通聚合酶链反应(polymerasechain reaction,PCR)技术鉴定、基因分型;分离株进行多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)及14种抗生素敏感性试验。结果从新生儿血液中培养出的菌株经生化鉴定、血清学分型与PCR技术鉴定、基因分型结果一致,均是B群脑膜炎奈瑟菌。该菌株MLST结果为序列型ST-7962,属无序列群分类。该菌株对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢曲松、美罗培南、氯霉素、阿奇霉素、米诺环素、利福平敏感,对左氧氟沙星中介,对复方新诺明、磺胺、环丙沙星、萘啶酸耐药。结论海南省发现新生儿感染B群脑膜炎奈瑟菌病例,应加强病原菌监测与研究,以便采取针对性的防控措施,合理使用抗生素。

B群脑膜炎奈瑟氏菌外膜蛋白抗原性分析

挑选了１０株具有代表性的菌株，提取了它们的外膜蛋白（ＯＭＰｓ）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析发现：１０株菌的ＯＭＰｓ带谱不完全相同，但都含有１，２／３，４和５类外膜蛋白，而且纯化的１类外膜蛋白（ＯＭＰ１）显示一条分子量为（４１或４３）×１０３的蛋白带。从中选两株菌５４２８５２（Ｂ：ＮＴ：Ｐ１．２：Ｌ３，７，９：克隆Ｉ：ＲＦＬＰ－ｂ２０）和３４０７（Ｂ：１５：Ｐ１．２：Ｌ３，７，９：克隆群Ｉ：ＲＦＬＰ－ｂ２０）提纯了ＯＭＰ１，以每只小鼠５μｇ、１５μｇ和２５μｇ三个剂量组分别免疫，制备免疫血清。通过ＥＬＩＳＡ，杀菌力试验和双相琼扩试验分别测定了抗ＯＭＰ１特异性ＩｇＧ和杀菌抗体的滴度及ＩｇＧ的亚类组成。结果发现：以２５μｇ剂量组免疫小鼠所产生的ＩｇＧ抗体滴度最高；以菌株５４２８５２ＯＭＰ１所产生的ＩｇＧ抗体滴度较高；菌株５４２８５２的ＯＰＭ１诱导所产生的抗体含有ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ和ＩｇＧ３亚类，对相同亚型菌株具有杀菌反应；用上述免疫血清与菌株５４２８５２和３４０７的ＯＭＰｓ及ＯＭＰ１进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ分析时，均出现一条分子量为（４１～４３）×１０３的反应带，这进一步证实了ＯＭＰ１与其免疫血清之间呈特异性?