miR-92a-1-5p通过调控SOCS3和P53促进急性白血病细胞增殖的机制研究

目的探讨miR-92a-1-5p通过调控细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)、P53促进急性白血病(AL)细胞增殖的机制。方法收集20例初诊AL患者和15例正常人的骨髓标本,检测miR-92a-1-5p、SOCS3、P53 mRNA、蛋白质的表达水平,剖析其与临床特征和预后的关联性;利用基因工程手段,在急性淋巴细胞白血病细胞系HL-60和急性髓系白血病细胞系K562中分别提高和降低miR-92a-1-5p的表达水平,以评估其对SOCS3和P53蛋白表达水平的调控作用;研究miR-92a-1-5p对细胞周期、增殖和凋亡的影响。结果miR-92a-1-5p的表达水平与白细胞计数、骨髓增生程度、分化程度、髓外浸润和预后均呈负相关,与SOCS3和P53 mRNA表达水平均呈正相关。在HL-60和K562细胞中,上调miR-92a-1-5p表达水平能抑制SOCS3和P53 mRNA的表达,促进细胞周期进入S期,增加细胞增殖能力,抑制细胞凋亡;下调miR-92a-1-5p表达则产生相反的效果。结论miR-92a-1-5p通过调控SOCS3和P53促进AL细胞增殖,可能作为AL的潜在诊断标志物和治疗靶点。

血清miR-92a联合miR-33a对膀胱癌患者预后的预测价值

目的探讨血清miR-29a联合miR-33a对膀胱癌患者预后的预测价值。方法回顾性分析2018年5月至2020年3月江苏省海安市人民医院收治的105例膀胱癌患者的临床资料。术后随访2年,根据预后情况分为预后不良组与预后良好组。分析膀胱癌患者预后不良的影响因素,分析血清miR-92a、miR-33a水平对膀胱癌患者预后不良的预测价值。结果105例膀胱癌患者预后不良的发生率为36.19%(38/105)。预后不良组肿瘤直径>3 cm、T_(2)~T_(4)期、淋巴结转移、低分化占比高于预后良好组,血清miR-92a、miR-33a水平低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。临床分期、淋巴结转移、肿瘤分化程度及血清miR-92a、miR-33a为膀胱癌患者预后不良的影响因素(P<0.05)。血清miR-92a、miR-33a联合预测膀胱癌患者预后不良的曲线下面积高于二者单独预测(P<0.05)。结论血清miR-92a、miR-33a水平可用于预测膀胱癌患者预后,且二者联合具有更高的预测价值。

MiR-92a-3p靶向KLF4促进肝细胞癌恶性进程

目的:探究微小RNA-92a-3p(miR-92a-3p)对肝细胞癌(HCC)的影响及其分子机制。方法:qRT-PCR检测人肝细胞癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、Hep3B和人正常肝细胞系HL-7702中miR-92a-3p和Krüppel样因子4(KLF4)的表达。将SMMC-7721、Bel-7402细胞分组为Inhibitor NC组、miR-92a-3p Inhibitor组、mimic NC组、miR-92a-3p mimic组、mimic NC+oe-NC组、mimic NC+oe-KLF4组、miR-92a-3p mimic+oe-NC组、miR-92a-3p mimic+oe-KLF4组。qRT-PCR检测细胞中miR-92a-3p和KLF4的mRNA表达水平。Western blot检测KLF4蛋白表达水平。MTT增殖实验检测细胞活力。划痕愈合、Transwell侵袭实验分别检测细胞迁移能力和侵袭能力。通过TargetScan分析miR-92a-3p与KLF4的靶向关系,并通过双荧光素酶实验验证。结果:相比于正常细胞,miR-92a-3p在HCC细胞中高表达,KLF4在HCC细胞中低表达(P<0.05)。与正常表达组相比,下调miR-92a-3p显著抑制了SMMC-7721和Bel-7402细胞的增殖、迁移、侵袭能力(P<0.05)。双荧光素酶实验验证了miR-92a-3p与KLF4存在靶向结合位点。过表达KLF4能够阻碍HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制过表达miR-92a-3p对HCC细胞生长的促进作用,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-92a-3p能够通过靶向下调KLF4来促进HCC细胞的增殖、迁移、侵袭。

miR-92b、miR-320a表达水平与非小细胞肺癌患者临床病理及术后3年生存率的关系

目的:探讨miR-92b、miR-320a表达水平与非小细胞肺癌(NSCLC)患者临床病理及术后3年生存率的关系。方法:回顾我院肿瘤外科2017年10月—2019年5月收治的86例NSCLC患者资料,比较患者肿瘤组织及癌周组织的miR-92b、miR-320a表达水平,比较不同miR-92b、miR-320a表达水平患者的预后,并进行生存分析。结果:肿瘤组织的miR-92b表达水平高于癌周组织,miR-320a表达水平低于癌周组织,差异有统计学意义(P<0.05);不同miR-92b、miR-320a表达水平患者肿瘤分期、淋巴结转移比较差异有统计学意义(P<0.05);miR-92b低表达组术后3年累积生存率、平均生存时间优于miR-92b高表达组,miR-320a高表达组术后3年生存率、平均生存时间优于miR-320a低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤分期、淋巴结转移、miR-92b、miR-320a表达水平为影响NSCLC患者预后独立影响因素(P<0.05)。结论:miR-92b、miR-320a表达水平与NSCLC患者临床病理及术后3年生存率相关,可作为预后预测指标。

miR-92b-3p抑制物在阿尔兹海默病并发癫痫动物模型中的抗癫痫效应

目的:评估miR-92b-3p抑制物在阿尔兹海默病(AD)并发癫痫动物模型中的抗癫痫效应。方法:通过生物信息学方法和双荧光素酶实验筛选解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)的调控分子,采用实时定量聚合酶链反应和Western Blot评估miR-92b-3p和ADAM10在神经元细胞和AD并发癫痫动物模型中的表达水平,经鼻腔给药方法给予miR-92b-3p的抑制物,评估其在AD并发癫痫动物模型中的抗癫痫效应。结果:通过生物信息学方法,双荧光素酶实验,Western Blot条带及其灰度分析,确认miR-92b-3p可转录后调控ADAM10,且在神经元细胞中对ADAM10调控作用较强。与AD动物模型组相比,miR-92b-3p在AD并发癫痫动物模型(AD+EP)组中显著上调。与AD+EP组相比,经鼻腔给予miR-92b-3p抑制物的治疗组癫痫发生率,Racine 4级以上发生率均显著减少。Racine 4级以上发作的潜伏期显著延长。结论:本研究初步证实miR-92b-3p抑制物在AD并发癫痫动物模型中具有抗癫痫效应。

血清miR-92a-3p、miR-147水平与脓毒症患者病情严重程度、炎症反应的关系及对预后的评估价值

目的探讨血清微小核糖核酸(miR)-92a-3p、miR-147与脓毒症患者病情严重程度、炎症反应以及预后的关系,分析miR-92a-3p、miR-147预测脓毒症患者预后的价值。方法将2018年3月至2022年6月邯郸市中心医院急诊科收治的157例脓毒症患者(患者组)和107例体检健康者(对照组)纳入研究。患者组又根据脓毒症病情分为脓毒症组(66例)和脓毒症休克组(91例)。检测纳入研究者血清miR-92a-3p、miR-147以及炎症因子水平,追踪临床结局。采用Pearson相关分析miR-92a-3p、miR-147水平与序贯器官衰竭(SOFA)评分、急性生理和慢性健康状态Ⅱ(APACHEⅡ)评分和炎症因子水平的相关性。采用多因素Logistic回归分析影响脓毒症患者预后的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-92a-3p、miR-147在脓毒症患者预后判断中的价值。结果患者组血清miR-92a-3p水平高于对照组(P<0.05),miR-147水平低于对照组(P<0.05)。脓毒症休克组血清miR-92a-3p水平高于脓毒症组(P<0.05),miR-147水平低于脓毒症组(P<0.05)。脓毒症患者血清miR-92a-3p水平与白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)水平,APACHEⅡ评分、SOFA评分均呈正相关(P<0.05),miR-147水平与上述指标均呈负相关(P<0.05)。脓毒症休克、miR-92a-3p水平升高是脓毒症患者预后不良的危险因素(P<0.05),miR-147水平升高是保护因素(P<0.05)。miR-92a-3p、miR-147联合用于预测脓毒症患者预后不良的曲线下面积(AUC)为0.855,高于两者单独使用(AUC分别为0.711、0.723)。结论脓毒症患者血清miR-92a-3p水平增高,miR-147水平降低,而且与病情加重、炎症反应加剧以及预后不良有关。

miR-92a通过调控NF-κB信号通路及EMT过程对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响

目的探究miR-92a通过调控核因子-κB(NF-κB)信号通路及上皮间质转化(EMT)过程对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响。方法收集2021年6月—2022年6月于本院行手术切除的50例宫颈癌组织标本及其癌旁正常组织标本,体外培养的细胞株包括正常人宫颈上皮HCvEpC细胞及宫颈癌细胞系Me 180、Caski、C-33A、Hela。qRT-PCR检测宫颈癌组织和细胞中miR-92a、NF-κB mRNA的表达;分析miR-92a表达与患者临床病理参数的关系;靶基因预测、双荧光素酶验证miR-92a对NF-κB的靶向调控作用;Pearson检验分析宫颈癌组织中miR-92a与NF-κB mRNA的相关性;将Hela细胞分为对照组、miR-NC组、miR-92a组、miR-92a inhibitor组、miR-92a inhibitor+pcDNA-NC组和miR-92a inhibitor+NF-κB组,采用脂质体瞬时转染法分别转染相应的质粒;MTT法、CCK-8、Transwell小室实验、划痕实验、流式细胞术分别检测各组细胞的增殖、侵袭、迁移、凋亡及细胞周期分布情况;Western blot分析各组细胞中NF-κB及EMT相关蛋白的表达。结果宫颈癌组织和细胞中miR-92a和NF-κB mRNA的表达均显著上调(P<0.05);miR-92a表达与患者的肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移有明显的相关性(P<0.05);miR-92a靶向促进NF-κB表达;宫颈癌组织中miR-92a与NF-κB mRNA呈明显正相关(P<0.05);与对照组和miR-NC组相比,miR-92a组细胞OD值、单克隆形成数目、细胞侵袭数目、划痕愈合率、停留在S期的比例明显增加,NF-κB、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平明显升高,细胞凋亡率、停留在G0/G1期的比例、E-cadherin、α-catenin蛋白表达水平明显下降,miR-92a inhibitor组获得与上述相反的结果(P<0.05);与miR-92a inhibitor+pcDNA-NC组相比,miR-92a inhibitor+NF-κB组细胞OD值、单克隆形成数目、细胞侵袭数目、划痕愈合率、停留在S期的比例明显增加,NF-κB、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平明显升高,细胞凋亡率、停留在G0/G1期的比例、E-cadherin、α-catenin蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论miR-92a可靶向促进NF-κB表达,增强宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力和EMT,促进细胞周期进程,抑制细胞凋亡,从而降低宫颈癌细胞的放疗敏感性。

miR-92a通过调控TGF-β1/Smads通路对心房颤动心肌纤维化的影响

目的探究miR-92a通过调控转化生长因子(TGF)-β1/Smad家族成员通路对心房颤动(AF)心肌纤维化(MF)的影响。方法将50只大鼠随机分为对照组、AF组、AAV-NC组、AAV-miR-92a组、AAV-inhibitor组,除对照组外,其他组大鼠构建AF模型。AAV-NC组、AAV-miR-92a组、AAV-inhibitor组分别在第1天尾静脉注射对应腺病毒载体,14 d后处死大鼠。采用超声心动图评估大鼠左心室重构及功能;生物信息学预测及双荧光素酶实验验证miR-92a对Smad7的调控作用;HE、Masson染色、免疫组化染色观察心肌组织病理学改变及心肌组织Ⅰ型胶原蛋白(Collagen-Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(Collagen-Ⅲ)的表达;免疫荧光检测大鼠心肌组织α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、成纤维细胞特异蛋白(FSP)-1表达;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测心肌组织miR-92a、Smad7 mRNA表达;Western印迹检测心肌组织TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7蛋白表达。结果生物信息学预测和双荧光素酶实验验证了miR-92a对Smad7的靶向调控作用;与对照组相比,AF组、AAV-NC组、AAV-miR-92a组左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)水平、Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、α-SMA、FSP-1水平、miR-92a、TGF-β1、Smad2、Smad3水平显著升高,Smad7 mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05);与AF组相比,AAV-miR-92a组LVEF、LVFS水平、Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、α-SMA、FSP-1水平、miR-92a、TGF-β1、Smad2、Smad3水平显著升高,Smad7 mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05),AAV-inhibitor组LVEF、LVFS水平、Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、α-SMA、FSP-1水平、miR-92a、TGF-β1、Smad2、Smad3水平显著降低,Smad7 mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论AF大鼠心肌组织中miR-92a表达量升高,其靶基因Smad7表达量降低;抑制miR-92a表达能提高大鼠LVEF和LVFS水平,改善大鼠心功能;同时减少Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、α-SMA、FSP-1水平,降低心肌纤维化程度;其机制可能与调控TGF-β1/Smads通路有关。

circRNA_MYLK靶向miR-92a-3p调控急性B淋巴细胞白血病细胞增殖及凋亡

目的:探讨环状RNA_MYLK(circRNA_MYLK)对急性淋巴细胞白血病细胞增殖及凋亡的影响及其可能作用机制。方法:选取四川大学华西医院收治的56例急性淋巴细胞白血病患者为研究组,同时选取45例健康志愿者为对照组。取两组骨髓样本后分离单个核细胞,并通过流式细胞仪分选B淋巴细胞;qRT-PCR法检测单个核细胞中circRNA_MYLK、微小RNA-92a-3p(miR-92a-3p)表达量;Pearson法分析急性淋巴细胞白血病患者单个核细胞中circRNA_MYLK与miR-92a-3p相关性。体外培养人急性淋巴细胞白血病细胞系(SUP-B15、NALM-6、BALL-1)和正常B淋巴细胞,并将si-NC、si-circRNA_MYLK、anti-miR-NC、anti-miR-92a-3p、miR-NC、miR-92a-3pmimic、si-circRNA_MYLK和anti-miR-NC、si-circRNA_MYLK和anti-miR-92a-3p转染至SUP-B15细胞;qRT-PCR法检测circRNA_MYLK、miR-92a-3p表达量;CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;双荧光素酶报告实验验证circRNA_MYLK与miR-92a-3p靶向作用。结果:与对照组和正常B淋巴细胞比较,研究组患者单个核细胞和人急性淋巴细胞白血病细胞系(SUP-B15、NALM-6、BALL-1)中circRNA_MYLK表达量升高(P<0.05),miR-92a-3p表达量降低(P<0.05)。急性淋巴细胞白血病患者单个核细胞中circRNA_MYLK与miR-92a-3p呈负相关(r=-0.9682)。干扰circRNA_MYLK或过表达miR-92a-3p降低SUP-B15细胞存活率和S期细胞比例(P<0.05),增加G 0/G 1期细胞比例、细胞凋亡率(P<0.05);circRNA_MYLK可靶向调节miR-92a-3p的表达;抑制miR-92a-3p表达可逆转干扰circRNA_MYLK表达对SUP-B15细胞增殖、细胞周期、凋亡的作用(P<0.05)。结论:干扰circRNA_MYLK表达可诱导急性淋巴细胞白血病细胞凋亡并抑制细胞增殖,其机制与靶向调控miR-92a-3p表达有关。

外周血miR-92a、miR-375及miR-760对结直肠癌不同TNM分级的诊断预测价值

目的 探讨外周血miR-92a、miR-375及miR-760对结直肠癌不同TNM分级的诊断价值。方法 选取2018年1月至2021年1月运城市中心医院收治的70例结直肠癌患者,提取其血清总RNA行反转录,并采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time fluorescence polymerase chain reaction, RT-qPCR)分析不同TNM分期外周血miR-92a、miR-375及miR-760的表达水平。采用Pearson相关性分析miR-92a、miR-375及miR-760表达水平与TNM分期的相关性,采用ROC曲线分析3种miRNAs在不同TNM分期的诊断价值。结果 miR-92a在结直肠癌TNM各分期中的表达呈上升趋势,在不同期的分布差异有统计学意义(P <0.05)。miR-760在结直肠癌TNM各分期中的表达呈下降趋势,在不同期的分布差异有统计学意义(P <0.05)。miR-375在TNM各分期中表达水平呈下降趋势,在不同期的分布差异有统计学意义(P<0.05)。miR-92a、miR-375及miR-760表达水平与性别和年龄均无相关性(P> 0.05),miR-92a表达水平与结直肠癌TNM分期呈正相关(r=0.683,P <0.01),miR-375、miR-760表达水平与结直肠癌TNM分期呈负相关(r=-0.472,-0.684,P <0.01)。miR-92a、miR-375及miR-760鉴别结直肠癌TNM IV期和TNMⅠ~Ⅲ期的AUC分别为0.926(95%CI:0.856~0.997),0.804(95%CI:0.622~0.985)和0.836(95%CI:0.733~0.938),灵敏度分别为100.00%,63.64%和72.73%,特异性分别为73.58%,86.79%和76.56%。结论 miR-92a、miR-375及miR-760可以鉴别结直肠癌不同TNM分期,有望应用于其预后判断。

miR-92a-3p在小鼠胚胎神经管闭合中的作用及机制

目的探讨miR-92a-3p与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4,NOX4)之间的相互作用,以及两者在神经管畸形(neural tube defect,NTD)中对细胞迁移的影响。方法实验动物采用C57BL/6J小鼠,孕鼠随机分为NTD组与对照组,每组30只,NTD组采用全反式维A酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导NTD模型,于E9.5采集胚胎样本。实验所用细胞系为小鼠神经干细胞C17.2,转染NOX4过表达质粒、miR-92a-3p模拟物/抑制剂、模拟物对照/抑制剂对照。采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测胚胎和C17.2细胞中miR-92a-3p表达,采用蛋白质印迹法检测NOX4的表达。通过双荧光素酶报告基因实验明确miR-92a-3p对NOX4的结合及靶向调控关系。采用细胞划痕实验与Transwell实验观察miR-92a-3p和NOX4对细胞迁移活动的影响。统计学方法采用单因素方差分析、独立样本t检验。结果NTD组胚胎miR-92a-3p表达低于对照组(0.753±0.052与1.006±0.126,t=3.212,P=0.033),NOX4蛋白表达高于对照组(0.870±0.039与0.688±0.056,t=4.621,P=0.010)。在转染NOX43’端非翻译区(3’untranslated regions,3’UTR)荧光素酶报告基因的C17.2细胞中,共转染miR-92a-3p模拟物组的荧光素酶活性低于模拟物对照组(0.368±0.102与1.000±0.149,t=5.530,P=0.005);共转染miR-92a-3p抑制剂组的荧光素酶活性高于抑制剂对照组(1.254±0.080与1.000±0.129,t=2.899,P=0.044)。C17.2细胞转染miR-92a-3p模拟物组,NOX4的蛋白表达低于模拟物对照组(1.077±0.142与1.432±0.300,t=2.396,P=0.044);转染miR-92a-3p抑制剂组,NOX4的蛋白表达高于抑制剂对照组(1.443±0.054与1.249±0.090,t=3.709,P=0.010)。细胞划痕的实验结果表明,转染NOX4质粒后,细胞伤口愈合的速度低于对照组[(8.8±6.5)%与(44.1±6.8)%,t=6.513,P=0.003],然而当过表达NOX4的同时转染miR-92a-3p,与转染NOX4组比较,细胞伤口愈合速度加快[(37.2±11.7)%与(8.8±6.5)%,t=3.680,P=0.021]。Transwell实验发现,转染NOX4质粒后,迁移的细胞数量低于对照组[(102.7±4.5)与(133.0±11.8)个,t=4.162,P=0.014],而共转染NOX4与miR-92a-3p后,与转染NOX4组比较,发生迁移的细胞明显增多[(176.0±11.0)与(102.7±4.5)个,t=10.680,P<0.001]。结论小鼠NTD模型中,异常低表达的miR-92a-3p能够通过上调NOX4的表达,阻碍小鼠胚胎神经管闭合过程中细胞的迁移活动,最终导致NTD的发生。

COX-2、G-17、miR-92a表达及幽门螺杆菌感染与结直肠息肉、结直肠癌发生的相关性

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)、胃泌素17(G-17)、miR-92a表达及幽门螺杆菌(Hp)感染与结直肠息肉、结直肠癌发生的相关性。方法选取2021年1月至2022年12月在四川绵阳四○四医院就诊的结直肠息肉患者62例(息肉组),结直肠癌患者48例(肿瘤组),检查两组组织COX-2、外周血G-17、粪便miR-92a表达以及幽门螺旋杆菌感染情况,分析其与结直肠息肉、结直肠癌发生的相关性。结果肿瘤组COX-2阳性表达率和Hp感染率分别为68.75%和75.00%,明显高于息肉组(P<0.05);肿瘤组G-17和miR-92a相对表达量分别为(25.56±7.76)pmol/L和(1.94±0.43),明显高于息肉组(P<0.05);息肉最大直径≥10mm患者COX-2阳性表达率、G-17、miR-92a相对表达量和Hp感染率分别为41.94%、(22.42±5.28)pmol/L、(1.29±0.25)和38.71%,明显高于息肉最大直径<10mm患者(P<0.05);息肉多发患者COX-2阳性表达率、G-17、miR-92a相对表达量和Hp感染率分别为45.83%、(23.12±5.14)pmol/L、(1.33±0.23)和54.17%,明显高于息肉单发患者(P<0.05);多发肿瘤患者G-17和miR-92a相对表达量分别为(30.72±6.00)pmol/L和(2.12±0.33),明显高于单发肿瘤患者(P<0.05);TNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者COX-2阳性表达率、G-17、miR-92a相对表达量和Hp感染率分别为100.00%、(29.60±6.80)pmol/L、(2.15±0.44)和100.00%,明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05);息肉组Hp感染患者COX-2阳性表达率、G-17和miR-92a相对变量分别为56.25%、(23.42±5.65)pmol/L和(1.34±0.21),明显高于无Hp感染患者(P<0.05);肿瘤组Hp感染患者COX-2阳性表达率、G-17和miR-92a相对变量分别为83.33%、(27.12±5.109)pmol/L和(2.12±0.26),明显高于无Hp感染患者(P<0.05)。结论COX-2、G-17、miR-92a表达及Hp感染与结直肠息肉、结直肠癌临床特征有关,同时Hp感染可提高COX-2、G-17、miR-92a表达。

miR-20a在妇科常见恶性肿瘤中的作用机制

宫颈癌、子宫内膜癌及卵巢癌作为妇科最常见的三大恶性肿瘤,其发病率近年来在各年龄段中呈上升趋势,已严重威胁我国女性健康。尽管多种靶向药物的应用已使该类患者的生存期明显延长,但其仍是一类无法被精准诊断和治疗的疾病。miR-17-92基因簇作为最早被确定为癌基因的微小RNA(micro RNA,miRNA)家族,其作用机制一直被广泛关注。miR-20a是miR-17-92基因簇中的一员,可通过降低或上调表达的方式发挥转录后调控功能,进而影响下游基因通路,调控恶性肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移,并最终实现恶性肿瘤的发生及进展。根据目前研究进展,miR-20a在宫颈癌、子宫内膜癌及卵巢癌中表达特异性升高通常与疾病的恶性进展有关,综述miR-20a在妇科常见三大恶性肿瘤发病机制中作用的最新研究。

miR-92a/Dickkopf相关蛋白1介导丁酸钠调控Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞增殖

近年来已有研究表明,组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACs)丁酸钠可以抑制结肠癌细胞增殖,促进结肠癌细胞凋亡,但其分子调控机制仍有待于深入研究。在本研究中,CCK-8检测、5-乙炔基-2-脱氧尿嘧啶核苷(Edu)增殖实验和流式细胞术分析证实,丁酸钠处理结肠癌细胞24 h后结肠癌细胞增殖能力明显减弱,凋亡率明显增加(P<0.01)。进一步转录物组测序结果表明,丁酸钠处理结肠癌细胞后,Wnt/β-catenin信号通路的拮抗剂Dickkopf相关蛋白1(DKK1)水平的表达显著高于未处理组(P<0.01);荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western印迹分析进一步验证,丁酸钠可以显著诱导DKK 1的表达水平,同时抑制Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因c-Myc的表达水平(P<0.01)。沉默结肠癌细胞的DKK 1后进一步使用丁酸钠进行处理,Edu增殖实验和流式细胞术结果显示,抑制结肠癌细胞中DKK 1后可以逆转丁酸钠对结肠癌细胞的作用(P<0.01)。生物信息学预测数据库分析显示,DKK 1可能与miR-92靶向结合;qRT-PCR结果显示,丁酸钠可以明显降低结肠癌细胞中miR-92a的表达(P<0.01);Western印迹技术和双萤光素酶报告基因检测证实,miR-92a与DKK 1 mRNA的3′-UTR存在靶向结合关系(P<0.01)。过表达结肠癌细胞中的miR-92a后进一步使用丁酸钠进行处理也能逆转丁酸钠对结肠癌细胞的作用(P<0.01)。总之本研究明确了,丁酸钠可以通过miR-92a/DKK1调控Wnt/β-catenin信号通路进而抑制结肠癌细胞增殖,促进结肠癌细胞凋亡。

miR-92a-1联合血清CEA、CA-199检测对结直肠癌的诊断价值分析

目的:分析miR-92a-1联合血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原-199(CA-199)检测对结直肠癌(CRC)的诊断价值。方法:选择2020年4月—2022年3月于我院治疗的82例CRC患者作为CRC组,选取同期于我院治疗的80例结直肠息肉患者作为良性组。测定并比较两组miR-92a-1、CEA及CA-199水平,绘制ROC曲线并计算曲线下面积(AUC)值,分析miR-92a-1联合CEA、CA-199检测诊断CRC的价值。结果:CRC组的miR-92a-1、CEA、CA-199水平高于良性组,有统计学差异(P<0.05);ROC曲线分析显示,miR-92a-1、CEA、CA-199单项及联合诊断CRC的AUC分别为0.767、0.965、0.952、0.986;miR-92a-1+CEA+CA-199联合诊断CRC的敏感度与准确度最高,分别为96.30%、93.47%。结论:CRC患者的miR-92a-1、CEA及CA-199水平呈高表达,miR-92a-1、CEA及CA-199联合检测可提高CRC诊断效能,为临床诊治CRC提供参考信息。

结直肠癌患者血清、粪便和癌组织中miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1的检测及其临床意义

目的:探讨结直肠癌(colorectal carcinoma,CRC)患者血清、粪便和癌组织中miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1的表达水平及其临床意义。方法:收集2016年7月至2017年5月在海南省中医院就诊的63例CRC患者,根据CRC有无远处转移将患者分为无转移组(n=35)和转移组(n=28);另选取同期体检的30例健康志愿者纳入对照组。采集所有受试者的血清、粪便及CRC组织,用RT-PCR检测标本中miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1的表达水平,并进行比较分析。结果:CRC患者血清中miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1表达水平显著高于对照组(均P<0.05),以转移组中表达水平最高(P<0.05)。CRC患者粪便中miR-21、miR-217和miR-92a-1表达水平显著高于对照组(均P<0.05),无转移组miR-217表达水平显著低于转移组(P<0.05),而miR-21、miR-29b和miR-92a-1在无转移组和转移组的差异无统计学意义(P>0.05)。无转移组CRC组织中miR-21、miR-29b和miR-92a-1均明显低于转移组(均P<0.05),而miR-217表达水平显著高于转移组(P<0.05)。结论:miR-21、miR-217、miR-29b和miR-92a-1在CRC患者的血清、粪便和癌组织中异常表达,多种miRNAs的联合检测有利于对CRC的发生、诊治和预后的评估。

miR-92a在结直肠癌中的表达及其对肿瘤血管生成的作用

目的:探讨miR-92a在结直肠癌中的表达及其对肿瘤血管新生功能的影响和作用机制。方法:采用qRT-PCR方法检测广东医学院附属深圳南山医院2014年6月至2015年12月经手术切除的25例结直肠癌组织和对应癌旁组织及4种结直肠癌细胞(HCT116、SW620、SW480、HT29)中miR-92a的表达;免疫组织化学法检测结直肠癌和癌旁组织中CD31阳性表达的微血管密度(microvessel density,MVD),Pearson相关性分析探讨miR-92a表达与肿瘤血管新生MVD的相关性。通过转染miR-92a-mimic、inhibitor上调或抑制结直肠癌细胞HCT116、SW620中miR-92a的表达水平,采用小管形成实验检测miR-92a不同表达对HUVEC小管形成的影响,免疫印迹法检测对其下游潜在靶点PTEN的蛋白表达的影响。结果:结直肠癌组织miR-92a的表达水平显著高于对应癌旁组织(P<0.01);4种人结肠癌细胞系miR-92a的表达水平均显著高于正常肠上皮组织(P<0.05);结直肠癌组织CD31阳性微血管密度显著高于癌旁组织(P<0.01),miR-92a表达水平与结直肠癌血管新生MVD呈显著正相关(r=0.580,P=0.01);上调miR-92a表达的HCT116细胞培养上清液可以显著促进HUVEC小管形成(P<0.05);上调miR-92a表达可以显著抑制HCT116细胞中PTEN蛋白表达水平(P<0.01)。结论:miR-92a在结直肠癌细胞和组织中高表达,与肿瘤血管新生增加密切相关;miR-92a可能通过抑制PTEN的表达发挥促进结直肠癌血管新生的生物学功能。

miR-17～92基因簇在宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌多种细胞系中的表达及意义

目的检测宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌多种细胞系中miR-17～92基因簇的表达，初步探讨miR-17～92基因簇与妇科肿瘤发生的关系。方法利用实时定量PCR方法配对检测Hela／Siha、Ishikawa／HEC-1A、H0—8910／HO．8910PM、SKOV3／SK0v3．TR30／SKOV3-DDP、COCl／COCl-DDP和CAOV3、OVCAR3中miR-17—92基因簇的表达水平；应用miRWalk数据库、nfiR2Subpath数据库和KEGGpathway功能聚类分析miR-17～92基因簇调控的靶基因及参与的与肿瘤相关的信号通路。结果与人脐静脉血管内皮细胞系ECV-304相比，miR-17～92基因簇在宫颈癌细胞系Hela与Siha中均呈下调表达（F=9．86，P〈0．001）；在子宫内膜癌细胞系Ishikawa与HEC-1A中均呈上调表达（F=10-35，P〈0．005）；与人正常卵巢细胞系IOSE386相比，miR-17～92基因簇在卵巢癌细胞系HO-8910、HO-8910PM、COCl、COCl／DDP、CAOV3、OVCAR3、SKOV3、SKOV3-TR30、SKOV3／DDP均呈上调表达（F=12．64，P〈0．001）。，预测得出miR-17～92基因簇的靶基因为ABCAJ、ARHGAP21、BAP1、C100ff46、CCND1、CD4等共30个；通过miR2Subpath数据库富集分析得出miR-17—92基因簇参与的生物学过程共8个，KEGGpathway分析得出miR-17～92基因簇参与的信号通路共11条。结论miR-17～92基因簇在宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌多种细胞系中表达，且在生物学行为不同的同一肿瘤细胞系中存在差异表达。miR-17～92基因簇可能通过相关的靶基因和信号通路参与宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌的发生、发展并影响其生物学行为。

miR-92b通过调控EZH2基因的表达抑制食管癌细胞Eca109的增殖和侵袭

目的:探讨食管癌(esophageal carcinoma,EC)细胞中miR-92b对组蛋白甲基转移酶zeste同源物增强子2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)基因表达的调控作用,以及对EC细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:选取河北医科大学第四医院科研中心保存的2016年1月至2017年1月15例EC患者手术癌组织标本,通过生物信息学软件预测分析对EZH2可能调控的miRNAs,将预测的miRNAs mimic分别转染人EC细胞Eca109后,采用实时荧光定量PCR、Western blotting和双荧光素酶报告基因实验验证miRNAs对EZH2基因的靶向调控作用。同时将EZH2过表达质粒共转染至Eca109,然后采用CCK-8法、流式细胞术和Transwell细胞侵袭及迁移实验分别检测miRNAs和EZH2表达变化对EC细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。结果:转染miR-92b的Eca109细胞中EZH2 mRNA与mimic-NC相比明显降低(P<0.01),转染miR-92b的Eca109细胞中EZH2蛋白表达水平明显低于转染mimic-NC组(0.525±0.052 vs 0.689±0.026,P<0.01)。生物信息学软件分析显示,miR-92b、let-7a及miR-25可与EZH2基因3’端非翻译区的结合位点相结合,但仅有miR-92b可以调控EZH2基因的表达,且miR-92b表达与EZH2 mRNA表达成负相关(P<0.01)。miR-92b mimic转染后EZH2 mRNA、蛋白及荧光素酶报告基因活性均明显下调(均P<0.01),对Eca109细胞凋亡无明显影响(P>0.05);miR-92b mimic转染能抑制ECa109细胞的增殖和侵袭及迁移能力(P<0.01)。而EC细胞转染EZH2过表达质粒后,miR-92b mimic对ECa109细胞增殖和侵袭及迁移能力的抑制作用明显减弱(P<0.01)。结论:miR-92b可抑制ECa109细胞的增殖和侵袭及迁移能力,其作用机制可能与靶向调控抑癌基因EZH2的表达有关。

内皮细胞缺氧后miR-210、miR-92a、miR-126表达及意义

目的进一步探讨缺氧后血管新生的调控机制。方法常规方法培养人微血管内皮细胞,低氧培养箱制备内皮细胞缺氧模型(观察组),正常细胞作为对照组。采用real time PCR法检测两组内皮特异性microRNA(miR-210、miR-92a、miR-126)表达变化。结果与对照组比较,miR-210、miR-92a、miR-126分别上调了(5.19±0.99)、(3.02±0.88)、(3.87±0.83)倍,P均<0.05。结论缺氧可促使内皮细胞特异性microRNA表达改变,此可能为缺氧后血管新生的主要调控机制。