UPLC-MS法同时测定增免抑瘤颗粒中5种成分

目的建立同时测定增免抑瘤颗粒（黄芪、党参、白芍等）中芍药苷、芍药内酯苷、黄芪甲苷、野黄芩苷和汉黄芩素的UPLC-MS方法。方法采用Waters公司UPLC—Micro2000仪器ESI＋离子模式下选择离子监控，以柳胺酚为内标；色谱分离采用AcquityUPLCBEHC18色谱柱（50mm×2．1mm，1．7μm）；流动相为0．1％甲酸水溶液（含5mmol／L的乙酸铵）（A）-乙腈（B），梯度洗脱；体积流量0．3mL／min；柱温30℃。结果芍药苷、芍药内酯苷、黄芪甲苷、野黄芩苷、汉黄芩素分别在12．63—1616ng／mL（r=0．9998），12．44—1592ng／mL（r=0．9999），12．53。1604ng／mL（r=0．9994），12．94～1606ng／mL（r=0．9997），2．5—160ng／mL（r=0．9998）范围内线性关系良好。平均回收率分别为101．6％（RSD为2．40％），98．84％（RSD为2．75％），97．89％（RSD为1．49％），98．34％（RSD为2．03％）和97．13％（RSD为1．73％）。结论所建立UPLC—MS方法简捷、准确、重复性好，可用于增免抑瘤颗粒剂的质量控制。

HPLC法测定灯盏花素片中野黄芩苷的含量

目的建立灯盏花素片中野黄芩苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,C18柱色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),柱温40℃;进样量10μL,流动相:甲醇-水-磷酸(40∶60∶0.5),流速:1.0mL.min-1;检测波长:335nm。结果野黄芩苷在0.1615～0.8075μg范围内,进样量与峰面积积分值之间线性关系良好;野黄芩苷平均回收率为98.7%,RSD为1.26%。结论该方法简便准确,重现性好,可用于灯盏花素片的质量控制。

灯盏乙素对DPPH所致血管内皮依赖性舒张功能障碍的影响

目的研究灯盏乙素对DPPH所致血管内皮依赖性舒张功能障碍的影响.方法采用家兔胸主动脉血管环DPPH氧化损伤模型评价灯盏乙素对内皮依赖性舒张反应的影响.结果灯盏乙素能显著减轻DPPH对乙酰胆碱(Ach)诱导的血管内皮依赖性舒张反应的抑制作用.结论灯盏乙素对血管内皮依赖性舒张功能具有保护作用.

野黄芩苷通过抑制线粒体凋亡通路对抗心肌细胞急性缺血损伤

目的观察野黄芩苷对心肌细胞急性缺血损伤的保护作用，并探讨其分子作用机制。方法用小生1～3d的SD大鼠进行心肌细胞原代培养，将生长良好的心肌细胞按随机数字表法分为空白对照组、缺血模型组以及高、中、低剂量野黄芩苷组（缺氧前加入100、50、25μmol／L药物）5组，每组设6个样本。通过体外建立低氧（O2〈1％）、无糖的培养条件（6h），模拟心肌细胞急性缺血损伤；用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测各组细胞的生长活性；用流式细胞仪测定细胞凋亡率，用烟酸己可碱一碘化丙啶（Hoeehst—PI）染色观察细胞凋亡形态学变化；用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）分析细胞色素C、Bax、Bel-2及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（easpase-3）的蛋白表达水平。结果与空白对照组比较，缺血模型组细胞活性显著降低[吸光度（4值）：0．053±0．013比0．173±0．017]，细胞凋亡率显著升高[（44．78±5．73）％比（5．09±0．43）％，均P〈0．01]；在高、中、低剂量野黄芩苷干预下细胞活性则较缺血模型组明显回升（A值：0．159±0．022、0．133±0．015、0．124±0．011比0．053±0．013），细胞凋亡率则显著下降[（19．58±0．22）％、（24．49±3．15）％、（26．09±0．27）％比（44．78±5．73）％，均P〈0．01]。与空白对照组比较，缺血模型组中大量细胞出现核固缩、染色质凝集等凋亡形态改变，各剂量野黄芩苷干预下凋亡细胞明显减少。与空白对照组比较，缺血模型组细胞色素C、Bax及easpase-3蛋白表达升高[细胞色素C（A值）：0．784±0．039比0．694±0．035，Bax（A值）：0．623±0．031比0．490±0．025，easpase-3：0．744±0．037比0．624±0．031]，Bcl-2蛋白表达降低（0．813±0．041比0．917±0．046，均P〈0．01）；与缺血模型组比较，高、中、低剂量野黄芩苷组细胞色素C、easpase-3及Bax蛋白表达降低[细胞色素C：0．735±0．037、0．736±0．037、0．744±0．037比0．784±0．039，casqpasse-3（A值）：0．652±0．033、0．684±0．034、0．691±0．035比0．744±0．037，Bax（A值）：0．523±0．026、0．527±0．026、0．579±O．027比0．623±0．031]，Bel-2蛋白表达升高（4值：0．885±0．044、0．876±0．044、0．841±0．042比0．813±0．041，均P〈0．01）。结论野黄芩苷可以显著对抗心肌细胞急性缺血损伤，其机制是通过调控线粒体通路抑制心肌细胞凋亡的发生。

黄芩及双黄连注射剂中黄芩甙含量测定

采用双波长薄层扫描法测定中药黄芩及双黄连注射剂中黄芩甙的含量。方法简单,灵敏度高,重现性好,结果稳定,可作为质量检验的一个快速定量方法。

HPLC法测定灯盏花素片中灯盏花乙素的含量

目的:建立灯盏花素片中灯盏花乙素的含量测定方法;方法:采用高效液相色谱法,使用C18柱,流动相为甲醇-水-冰醋酸(30:70:1),检测波长335nm;结果:该制剂中灯盏花乙素在0.2～4.0μg范围内线性良好,平均回收率为100.21%,RSD为1.48%;结论:该方法简便、快速、准确,可用于灯盏花素片的含量测定和质量控制。

灯盏乙素对大鼠动脉粥样硬化的防治作用

目的:研究灯盏乙素对大鼠实验性动脉粥样硬化的防治作用。方法:复制免疫损伤加高脂喂养大鼠AS模型,观测灯盏乙素对大鼠血清SOD、NO、MDA、血脂、tP A和PAI-1水平及主动脉病变的影响。结果:10、20 mg/kg的灯盏乙素明显升高血清SOD和NO水平,降低血清MDA水平;明显降低TG、TC和LDL-C水平,同时升高HDL-C水平;能明显降低血清PAI-1水平,同时升高血清tP A水平;并可减轻主动脉病变。结论:灯盏乙素体内具有抗氧化、改善血脂异常、维持纤溶系统平衡和减轻主动脉病变的作用。

野黄芩苷对骨肉瘤细胞系MG-63的增殖侵袭的抑制作用和Bax/Bcl-2表达的影响

目的研究野黄芩苷(scutellarin)对骨肉瘤细胞系MG-63的增殖侵袭和Bax/Bcl-2表达的影响。方法将骨肉瘤细胞系MG一63做4组处理:MG-63对照组(MG-63),野黄芩苷低、中、高剂量组(10、20、50μmoL/L);细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Transwell检测细胞侵袭能力;蛋白质印迹检测Ki67、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(cvsteine aspartate specific protease-3,Caspase-3)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达;水溶性四氮唑法检测总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活力和硫代巴比妥酸法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量;蛋白质印迹检测Bax和B细胞淋巴瘤2(B-cell lymphoIna-2,Bcl-2)的表达。结果MG-63细胞经野黄芩苷加药处理后,细胞增殖速率显著降低;凋亡细胞的比率显著上升;细胞侵袭能力显著降低;Ki67的表达显著下调,Caspase-3的表达显著上调,VEGF的表达显著下调;总SOD的活力显著降低,MDA的含量显著上升;Bax的表达显著上调,Bcl-2的表达显著下调。结论野黄芩苷抑制骨肉瘤细胞系MG-63的增殖侵袭,提高Bax/Bcl-2的比例。