应用FQ-PCR技术检测乌鲁木齐地区性病病原体的流行病学分析

目的掌握本地区性病病原体的现行感染水平及发展规律,为控制该疾病的传播和流行提供科学依据。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应技术,定量测定病原体基因。结果连续4年对引起性病的5种主要病原体UU、HPV、HSV、NG及CT进行了检测,结果显示①阳性率分别为45·84%、29·68%、21·45%、9·09%和7·10%,与国内已有文献比较,本组UU感染率最高,而NG、CT却较低。②UU、NG及CT在女性中的阳性率高于男性,但HPV和HSV却低于男性,其性别差异与通常的认识既相一致(如UU、CT),也有不同(如HPV、HSV、NG)。③4年间UU、HPV和NG感染逐年升高,CT感染逐年下降,流行趋势与国内外相关报道存在较大差异。结论乌鲁木齐性病病原体的感染现状显示明显的地区特点,深入研究并从流行病学角度分析该地性病病原体的发生、发展趋势,对加强性病防治工作具有重要意义。

荧光定量PCR检测女性商业性性工作者性传播感染

目的 : 了解女性商业性性工作者 (FSWs)沙眼衣原体 (Ct)、淋球菌 (NG)、单纯疱疹病毒 (HSV)及人乳头瘤病毒 (HPV)等常见性传播感染 (STI)的患病情况。方法 : 选取深圳市收容教育所 2 0 0 2年 11～12月因卖淫而收容教育的 130例FSWs作为研究对象 ,采用荧光定量PCR(FQ -PCR)检测宫颈分泌物Ct、NG、HSV及HPV感染。结果 : FQ -PCR检测 130例FSWs宫颈分泌物的Ct阳性检出率为 32 .3%、NG阳性检出率为 16 .2 %、HSV为 5 .4 %、HPV6 11、HPV16和HPV18分别为 7.7%、2 3.8%和 12 .3%。STI总的阳性检出率为 6 0 .8% ,混合感染率为 2 5 .4 %。结论 : 女性商业性性工作者的STI患病率高 。

荧光定量PCR检测性传播病原体结果分析

目的了解深圳市女性性服务者(FCSW)性传播感染(STIs)的流行现况。方法选取深圳市女性性服务者,采集其宫颈和阴道分泌物,采用荧光定量PCR分别检测其中的CT、NG、HPV及HSV-2,评价其感染状况。结果391例FCSW中,STIs病原体总阳性检出率为53.20%(208/391),其中,CT阳性检出率最高,为27.62%;余依次为HPV、NG和HSV-2,阳性检出率分别为26.34%,21.23%和2.81%;在STIs病原体的阳性者中,感染2种以上STIs病原体者83例,占39.90%(83/208),其中,83例NG阳性者中,CT的阳性检出率为45.78%;108例CT阳性者中,NG的阳性检出率为35.18%。结论深圳市FCSW人群中,STIs流行率较高;加大该人群的STIs筛查及健康教育,是当前预防和控制STIs传播的重要策略。

性传播疾病与输卵管妊娠的PCR分析

目的 探讨性传播疾病与输卵管妊娠是否具有相关性。方法 采用聚合酶键反应 (PCR)技术 ,检测输卵管妊娠石蜡包埋标本中 ,沙眼衣原体、淋球菌和解脲支原体DNA。同时、用HE染色观察组织学改变。结果 4 1例沙眼衣原体DNA阳性 (41/133,30 % ) ,淋球菌、解脲支原体DNA均为阴性。 91例输卵管粘膜下见有浆细胞浸润 (6 8% ) ,4 1例沙眼衣原体阳性标本中 ,4 0例见有浆细胞浸润。浆细胞浸润的分级与沙眼衣原体感染是否阳性无相关性 (P >0 ,0 5 )。结论 输卵管妊娠的标本中存在沙眼衣原体感染 ,性传播疾病与输卵管妊娠具有相关性。

实时荧光PCR在男性性病尿道炎及男性尿道炎后综合征的应用评价

目的探讨实时荧光PCR技术检测男性性病尿道炎及男性尿道炎后综合征(MPUS)患者的病原体的临床价值。方法用实时荧光PCR法对718例男性性病尿道炎及MPUS患者尿道分泌物或前列腺液同时作淋球菌(NG)、沙眼衣原体(C t)、解脲支原体(UU)检测。结果52.2%的淋病患者并发C t、UU感染。非淋菌性尿道炎(NGU)患者C t、UU阳性率68.2%,C t阳性率31.1%、UU阳性率42.6%,5.4%患者C t、UU合并感染。MPUS患者NG、C t、UU阳性率仅为10.2%。结论实时荧光PCR技术灵敏度高,特异性强,对男性性病尿道炎及MPUS的诊断和治疗具有重要的指导意义。

绵羊精液中X、Y 精子比率快速评价方法的建立

研究旨在建立以TaqMan荧光PCR为基础的快速检测绵羊X、Y精子比率的方法,为绵羊X、Y精子分离技术的发展与应用提供技术支撑。试验分别针对X、Y染色体特异性基因F9和SRY设计引物与探针,以绵羊基因组DNA为模板进行片段扩增、质粒连接、扩增提纯后按不同比率混合构建标准曲线,计算拟合方程。并通过对3份商用X、Y性控精液及2份鲜精进行测定来检验方法的准确性、稳定性及可靠性。结果表明,商用X性控精液中X精子的比率分别为(89.46±3.37)%、(89.86±2.85)%、(90.02±2.19)%,商用Y性控精液中Y精子的比率分别为(89.02±2.68)%、(88.21±2.63)%、(88.72±3.93)%,检测结果与质控报告所标注的X、Y精子比率无显著性差异(P<0.05)。鲜精的检测结果表明,X、Y精子比率分别为(49.86±2.90)%、(49.30±2.10)%,与理论值50%无显著性差异(P<0.05)。综上,研究建立的以TaqMan探针荧光定量PCR为基础的快速检测绵羊X、Y精子比率的方法速度快、检测所需精液体积小,准确性、稳定性及可靠性高,能够为绵羊X、Y精子分离检测提供技术支撑。

PCR法对HLA-DQ_α基因的分型及其在性犯罪鉴定中的应用

本文应用 PCR 法及 ASO 探针斑点杂交技术,对100例无关个体血液 DNA 及10例性犯罪案件混合斑中精子 DNA 进行了 HLA-DQα基因的扩增及其 DNA 分型。结果正常人0.1～0.3μgDNA 就能满足 DQα基因扩增的需要。在100例个体中可以观察到由4种等位基因组成的10种 DQα基因型。10例不同条件的混合斑中精子 DNA 经30～60次扩增后与 ASO 探针杂交均能准确地判定 DQα基因型。HLA-DQα是个体识别能力较强的遗传标志。本文为性犯罪中精子来源的个体识别提供了一个新方法,具有一定的实用价值。

夜光藻配子细胞实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

夜光藻是我国广泛分布的赤潮原因种之一,其有性繁殖在种群增长中的作用尚不明确,定量分析配子细胞是研究夜光藻有性繁殖过程的重要手段。利用实时荧光定量PCR技术,以夜光藻rRNA基因的18S-ITS1为靶区域,建立了定量检测夜光藻配子细胞的方法。以配子细胞基因组DNA和含目的片段的重组质粒分别建立标准工作曲线,二者均呈现良好的线性响应,检出限分别为每反应0.17个细胞和102个拷贝,满足定量检测应用需求。应用该方法对2015年逐月采集的胶州湾环境样品进行检测,并首次对夜光藻配子细胞的季节变化、水平分布与垂直分布进行了研究。结果表明,调查海域夜光藻配子丰度呈冬末春初、夏季双峰分布,范围为18.12~9.70×105 cells/L;在水深小于10 m的湾内近岸站位,配子丰度较低,垂直分布均匀;在湾中心、湾口和湾外的深水站位,配子丰度较高,仅在2~3月、7月和11月出现垂向差异。夜光藻配子细胞对种群增长和存续有潜在的积极意义,其丰度在营养细胞丰度高值期相对较高,在营养细胞丰度极低时仍可普遍检出。丰富了对近岸海域夜光藻配子细胞时空分布的认识,为深入研究夜光藻的种群增长模式、进一步探究其赤潮暴发的内在机理奠定了基础。

DNA改组(DNA shuffling)及其研究进展

自1994年首次提出至今,DNA改组已经成为定向进化最为有效的方法之一。无论DNA、蛋白质还是生物体的进化,DNA改组都有十分突出的表现。通过对十余年来DNA改组的发展作以简要综述,为日后相关研究的开展提供理论基础。

精液中丙型肝炎病毒的研究

目的 :检测精液中是否存在丙型肝炎病毒 (HepatitisCviruse,HCV) ,探讨HCV性传播途径的可能性。 方法 :用双抗体夹心ELISA法检测 147例精浆HCV抗原 ;HCV抗原阳性者检测其夫妻双方血清中抗HCV IgM和抗HCV IgG ;同时采用 90 %和 45 % 2层Percoll梯度离心 ,分离HCV抗原阳性病人的精子 ,用RT PCR分别检测其精浆(组分 1)、90 %Percoll层精子 (组分 2 )、45 %Percoll层精子 (组分 3)及最上层圆形细胞 (组分 4)中的HCV RNA。 结果 :147例精浆中HCV抗原阳性的 4例 (2 7% ) ;4例HCV抗原阳性病人夫妻双方血清抗HCV抗体均为阴性 ;4例HCV抗原阳性病人有 2例精浆中检测出HCV RNA ,而Percoll分离后 3个组分中HCV RNA均为阴性。 结论 :①HCV感染存在性传播途径 ;②人工授精中供精者HCV的检测必不可少 ;③采用Percoll梯度离心分离精子 ,可大大降低感染HCV的风险。

性激素受体及相关生长因子在前列腺基质细胞中的表达

目的 :探讨前列腺基质增生的发病机制与性激素以及相关生长因子的关系。方法 :应用RT PCR的方法研究了在人前列腺不同细胞类型中Smoothelin的表达 ,研究了雄、雌激素受体及相关生长因子在前列腺基质细胞中的表达 ,以及它们在前列腺基质细胞分化中表达的变化。结果 :Smoothelin是前列腺平滑肌细胞特异性的标记蛋白 ;雄激素受体 (AR)、碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、角化细胞生长因子 (KGF)主要在前列腺成纤维细胞中表达 ,而雌激素受体 (ER)、转移生长因子 β1 (TGFβ1 )主要在平滑肌细胞中表达。结论 :前列腺基质增生与雌激素受体和转移生长因子 β1

山羊UBA52基因多态性及其与繁殖性能的关系

根据牛UBA52基因序列,设计3对引物(U1～U3),分别扩增随机选取的济宁青山羊和辽宁绒山羊样本,PCR产物克隆测序,序列比对结果显示仅在U3的扩增产物中发现G63A和T181C突变。设计引物U4,利用PCR-RFLP技术分别在性早熟、高繁殖力品种(济宁青山羊、南江黄羊、马头山羊)和性晚熟、低繁殖力品种(辽宁绒山羊、内蒙古绒山羊、太行山羊)中检测上述位点的多态性,并分析2个突变位点对山羊性早熟和高繁殖力的影响。对于G63A位点,在济宁青山羊和南江黄羊中检测到GG、GA和AA3种基因型,在马头山羊、辽宁绒山羊、内蒙古绒山羊、太行山羊中只检测到GG和GA基因型;该突变位点不同基因型分布在性早熟品种和性晚熟品种间存在一定的差异;济宁青山羊GG、GA和AA基因型频率分别为0.53、0.44和0.03,AA型和GA型母羊平均产羔数分别比GG型多0.85只(P<0.05)和0.49只(P<0.05),AA型与GA型之间差异不显著(P>0.05)。对于T181C位点,在南江黄羊和内蒙古绒山羊中检测到CC、CT和TT 3种基因型,在济宁青山羊、马头山羊、辽宁绒山羊、太行山羊中只检测到CC和CT两种基因型;该突变位点不同基因型分布在性早熟品种和性晚熟品种间没有明显差异;济宁青山羊CC和CT基因型频率分别为0.91和0.09,两种基因型个体间产羔数差异不显著(P>0.05)。本研究结果初步表明,UBA52基因63位点与山羊的性早熟可能存在一定关联,A等位基因可能是提高山羊产羔数的一个潜在有效的DNA标记。

镉对性未成熟鸡卵巢FSHR与LHRmRNA表达的影响

应用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法,检测镉中毒的性未成熟鸡卵巢卵泡刺激素受体(FSHR)和黄体生成素受体(LHR)mRNA表达水平的变化.结果表明,对照组二者的表达随时间的延长呈升高趋势,加镉组二者呈不同程度的降低.由此认为,在卵巢发育早期阶段,镉通过降低FSHRmRNA和LHRmRNA的表达水平,影响卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)生理作用的发挥.

海口市STD患者6种病原体检测结果分析

姚敏,阮国杰摘要:目的了解海口市STD患者中6种病原体感染的情况、病种的分布及感染特点。方法对2001年5月～2004年7月7834例可疑STD患者采用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测NG、CT、UU、HPV、HSV-Ⅱ5种病原体的DNA;采用RPR、TPHA法检测梅毒螺旋体并对结果进行分析。结果检出STD病原体阳性者2477例,总检出率为31.62%(2477/7834);其中UU检出率20.42%(1600/7834);CT检出率2.95%(231/7834);HPV检出率3.17%(248/7834);HSV-Ⅱ1检出率1.71%(134/7834);TP检出率2.60%(204/7834);NG检出率0.77%(60/7834);UU和CT混合感染216例;UU、CT、HPV3种病原体混合感染28例。结论4年的检测结果显示,海口地区STD病原体检出率逐年上升,UU的检出率最高;20～40岁年龄段是STD发病的高危人群,应予以重点关注。

性成熟启动时间不同的母鸡瘦素及其受体mRNA表达的差异

为探讨瘦素(leptin)及其受体在禽类性成熟启动过程中的作用,试验采用120羽60日龄伊莎蛋母鸡,随机均分为2组,分别饲养于光照逐渐延长(以光/暗为8 h/16 h为起点每周增加0.5 h光照,简称长光照组)和恒定的短光照(光/暗为8 h/16 h,简称短光照组)条件下,记录体重变化与性成熟时间。长光照组和短光照组母鸡分别于136和151日龄时开产。在136日龄时,每组取10只鸡宰杀后取血液、脂肪和下丘脑组织,分别检测血清leptin水平、脂肪leptin mRNA与下丘脑leptin受体mRNA的表达。结果表明:136日龄时,长光照组和短光照组母鸡血清雌二醇(E2)和leptin水平均无显著差异(P>0.05,n=10)。相对定量RT-PCR结果显示:136日龄时,长光照组母鸡脂肪leptin mRNA表达丰度极显著高于短光照组(P<0.01,n=10),但下丘脑leptin受体mRNA的表达水平无显著差异(P>0.05,n=10)。以上结果提示:15 d的性成熟时间差异并不伴随产蛋母鸡血清leptin及下丘脑leptin受体mRNA表达水平的显著变化,而脂肪leptin mRNA表达水平与血清leptin蛋白水平的不一致性则提示循环leptin的其他组织来源。

50例性分化发育不良患者的SRY基因分析

目的 探讨性分化发育不良患者SRY基因的作用及其临床意义。方法 选择在我院遗传室咨询的性分化发育不良患者 5 0例 ,在染色体核型分析的基础上 ,应用聚合酶链 (PCR)技术对每例患者检测SRY基因 ,应用DNA序列分析技术对 6例性染色体XX或XY而SRY(+)的女性患者和 2例染色体为 4 6 ,XY、SRY(+)睾丸发育不良的男性患者 ,进行了SRY基因序列分析。结果 (1) 1例 4 6 ,XX女性SRY(+) ,1例 4 6 ,XX男性SRY(- ) ,1例 4 6 ,XX/ 4 6 ,XY女性和 1例核型为 4 7,XXY男性SRY(+) ,在 4 6 ,XY患者中女性 11例 ,男性 6例SRY(+)。 (2 ) 1例 4 6 ,XX女性SRY基因存在点突变 ,1例 4 6 ,XY女性患者SRY基因序列存在点突变和移码突变。结论 对性分化发育不良患者进行SRY检测及其基因分析 ,不仅有利于为该类患者寻找病因 ,而且有利于指导治疗。

四川玉米小斑病菌交配型组成与育性分析

【目的】明确四川省玉米小斑病菌(Cochliobolus heterostrophus)自然群体的交配型和有性态形成能力(育性),探索小斑病菌有性生殖在自然界发生的可能性。【方法】利用多重PCR技术对2013—2018年间采自四川和云南的玉米小斑病菌的交配型进行检测,通过相反交配型菌株的两两杂交筛选一对高配合力的菌株作为标准菌株,采用与标准菌株对峙的方法对待测田间菌株进行育性测定,以假囊壳及子囊的形成情况判定菌株的育性水平。【结果】544株玉米小斑病菌中交配型MAT1-1菌株286株,交配型MAT1-2菌株258株,出现频率分别为52.57%和47.43%。卡方检验两种交配型的比例符合1﹕1的分离比(χ2=1.441,P=0.230),未出现偏离。两种交配型菌株在各采样区均有分布,不同年份间交配型结构基本一致。筛选得到MSRS-2-3(MAT1-1)和DY-12-1-2(MAT1-2)作为一对标准菌株,与标准菌株杂交能够产生子囊孢子的可育菌株比例为88.79%,不能产生子囊孢子的不育菌株比例为11.21%。可育菌株中存在育性的分化,高育性、中等育性和低育性菌株分别占测试菌株的12.32%、27.39%和49.08%。采自不同年份、不同地区的小斑病菌育性结构存在差异,2013—2018年可育菌株率分别为77.88%、78.57%、93.33%、94.87%、93.49%和88.76%。云南西双版纳地区的菌株可育率最高,达到100%;其次为四川北部、中部、南部和东部地区,菌株可育率分别为93.25%、89.87%、83.33%和79.31%;四川西部地区菌株可育率最低,为69.23%。【结论】玉米小斑病菌自然群体中普遍存在MAT1-1和MAT1-2两种交配型,两种交配型均衡分布且多为可育菌株。尽管未见自然条件下玉米小斑病菌有性世代的报道,但两种交配型菌株和高比例可育菌株的普遍存在表明有性生殖可能正在发生。

荧光聚合酶链反应用于阴道炎性病病原体检测

目的 了解阴道炎患者生殖道性病病原体NGH、CT、Uu、HPV6 ,1 1 流行情况。方法 将PCR技术与荧光素标记探针相结合 (FQ -PCR) ,对阴道炎患者的宫颈柱状上皮进行NGH、CT、Uu、HPV6 ,1 1 定量检测。结果 阴道炎患者中四种病原体总感染率95 .70 % ,阳性率依次为Uu(70 .0 0 % ) >CT(61 .30 % ) >NGH(1 4 .0 0 % ) >HPV6 ,1 1 (1 0 .30 % )。病原体混合感染率 (51 .30 % ) ,以解尿支原体并发其他病原体感染率最高 (45 .30 % ) ,其次是沙眼衣原体 (44.30 % ) ,淋球菌 (9.0 0 % ) ,尖锐湿疣 (5 .70 % ) ,病例中 2 0～ 39岁患者感染NGH、CT、Uu、明显多于其他年龄组。结论 对阴道炎患者医生应尽可能做各种性病病原体检测 ,以明确诊断 ,及时治疗。

泸州地区性传播疾病检测结果分析

目的:分析泸州地区2010年至2011年性传播疾病(STD)的检测结果,为制定性传播疾病相应的预防措施提供相应的参考依据。方法:采用聚合酶链式反应(PCR)的方法检测解脲支原体、沙眼衣原体、淋球菌、单纯疱疹病毒、人乳头瘤病毒、梅毒。结果:在本轮2252例怀疑为性传播疾病患者的检测中,解脲支原体检出549例,占24.3%,在单纯感染中所占比例为73.9%;沙眼衣原体检出76例,占3.4%,在单纯感染中所占比例为10.2%;淋病检出率为47例,占2.08%,在单纯感染中所占的比例为6.3%。在复合感染中,解脲支原体和沙眼衣原体同时感染阳性率最高,为26例,占所有复合感染的46.4%;淋球菌和解脲支原体同时感染阳性率次之,为13例,占所有复合感染的23.2%,淋球菌和沙眼衣原体同时感染阳性率居第三位,为7例,在复合感染中所占的比例为12.5%。结论:泸州地区性传播疾病谱发生了变化,其前三位分别为解脲支原体,沙眼衣原体和淋病,我们应该进行相应的预防知识的宣传,使人们意识到它的危害,并做出相应的预防。

103例生殖道沙眼衣原体感染患者的临床特征及随访结果分析

目的：分析我院皮肤性病科门诊生殖道沙眼衣原体感染患者的临床特征及随访情况。方法：回顾性分析我院2013年4月至2015年10月经聚合酶链反应（PCR）确诊并有治疗后PCR随访结果的103例生殖道沙眼衣原体感染患者的临床及随访资料。结果：103例生殖道沙眼衣原体感染患者中,男性67例（65.05%）,女性36例（34.95%）,年龄17~58岁,平均（29.48±6.79）岁。38.83%（40/103）患者无明显临床症状,其中男性患者中29.85%（20/67）无明显临床症状,女性患者中55.56%（20/36）无明显临床症状。56.31%（58/103）患者存在混合感染,45.63%（47/103）合并解脲脲原体感染,10.68%（11/103）合并淋病。92.23%（95/103）患者治疗后PCR复查沙眼衣原体核酸阴性。结论：生殖道沙眼衣原体感染患者常为混合感染,且临床症状轻微或隐匿,临床应对有不安全性行为史的患者及其性伴做全面性病检查。PCR方法值得在生殖道沙眼衣原体感染患者的诊断及随访中推广使用。