日粮添加维生素A对肉鸡和蛋鸡生长性能及免疫功能的影响

试验研究了不同的维生素A(VA)添加水平对肉鸡和蛋鸡的生长性能及机体免疫功能的影响。试验选用1日龄的雌性蛋鸡和雌性肉鸡各270只,分别随机分成3个处理,每个处理6个重复,每个重复15只,分别饲喂含维生素A0(对照)、4000和20000IU/kg的日粮,饲养试验时间为84d。试验结果表明,日粮添加维生素A为0IU/kg处理的肉鸡和蛋鸡的采食量显著高于添加维生素A的各处理(P<0.05);日粮维生素A添加水平对肉鸡和蛋鸡的免疫器官指数(胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数)无显著影响(P>0.05);对照的肉鸡和蛋鸡异嗜粒细胞/淋巴细胞(H/L)高于其他处理(P>0.05);肉鸡和蛋鸡绵羊红细胞(SRBC)抗体滴度和新城疫(ND)抗体滴度随着日粮维生素A添加水平的升高而升高;日粮添加4000IU/kg维生素A处理的肉鸡和蛋鸡钥孔戚血蓝蛋白(KLH)抗体滴度、白蛋白浓度和白介素-2(IL-2)的浓度最高。蛋鸡的免疫器官指数和血清白蛋白浓度显著高于肉鸡(P<0.05);肉鸡和蛋鸡的其他免疫指标差异不显著(P>0.05)。综上所述,日粮添加4000IU/kg维生素A能提高肉鸡和蛋鸡的生长性能和免疫功能,当添加水平达到20000IU/kg时,可对生长性能和免疫机能产生不利影响。肉鸡和蛋鸡的主要免疫指标没有显著差异。

有限稀释微量溶血法测定小鼠血清溶血素的活性

目的检测抗绵羊红细胞（ＳＲＢＣ）抗体（溶血素）。方法将含有溶血素的血清样品适当预稀释，然后取１００μｌ加入９６孔板中进行有限的倍比稀释，每孔再加入体积分数为１５％ＳＲＢＣ和１∶１０稀释的豚鼠血清各５０μｌ，在３７℃温育１～１２ｈ后，有足够溶血素活性孔的红细胞将全部溶解，小孔液体清彻见底；溶血素活性低于足量时，只能部分溶血，受未溶解红细胞的阻挡，小孔底部只有不同程度的透明度，将印有字母“Ｒ”的测试纸放在９６孔板底部，根据字母“Ｒ”的能见程度和已知的稀释倍数判断样品的活性。结果样品的测定值与理论值成良好直线关系。对已知药物的效果测定与用分光光度法所测得结果一致。结论本方法简单、快速、准确、重复性好。

牙鲆的淋巴细胞表面抗原

To observe the surface microstructure features by using scanning electron microscope,and study the surface antigen on lymphocytes of Paralichthys oliveaceus by form rosette with sheep red bloods cells and the cross-reactivity by using monoclonal antibody against human CD.Under scanning microscope ,there are two kinds of lymphocytes,type I lymphocytes is characterized with being full of bumpiness and holes, the surface of type II lymphocytes is rather smooth with tiny finger like tubercle. The rosette formation of lymphocytes with sheep red blood cells is obvious however the rosette forming percents of lymphocytes is rather low,lower than 2%. The cross reactivity of lymphocytes with monoclonal antibody against human CD showed that there are 5.25%+0.38% of NK cells in peripherial lymphocytes of Paralichthys oliveaceus,and the CD25^+ percentage of lymphocytes is 5.25%+0.38%.No cross-reactivity with T-cell antigen,B-cell antigen and other activity antigen is found on the lymphocytes surface of Paralichthys oliveaceus.

两种免疫方法制备兔抗绵羊红细胞溶血素的效价观察

目的比较两种免疫程序和途径制备抗血清的效价,并在免疫学溶血反应中的运用效果比较,寻求获取符合实验教学需要的高效价溶血素的较佳方法。方法采用不同浓度的绵羊红细胞(Sheep red blood cells,SRBC)间隔1天和间隔3天腹腔、耳静脉免疫家兔,用血球凝集法浓度为1.5%SRBC悬液检测并比较两种免疫程序和途径所制备溶血素的效价结果免疫后获得的溶血素效价几何平均滴度,A组脱纤维绵羊RBC全血皮内多点注射家兔为1:22286.09,B组10%脱纤维绵羊RBC悬液耳静脉注射家兔为1:72407.73。结论 10%脱纤维SRBC悬液耳静脉注射家兔制备的溶血素效价高于脱纤维SRBC全血皮内多点免疫家兔,是获取实验教学用溶血素的较佳免疫程序。

慢性氟中毒对大白鼠免疫功能的影响

长期服用氟化钠水溶液后，对大白鼠进行免疫功能测试，结果证明用８８．５ｍｇ／Ｌ氟化钠水溶液服用３１５ｄ时，大白鼠的体液免疫反应（以血清凝集素和ＰＦＣ为指标）及细胞免疫反应（以Ｅ—玫瑰花结形成和ＡＮＡＥ为指标）均有抑制作用，尤其是对食用低营养食物的大白鼠，抑制作用更为显著。

太行鸡脾脏SRBC免疫应答基因的筛选与分析

为筛选太行鸡脾脏组织中绵羊红细胞(sheep red blood cell,SRBC)免疫应答的关键基因和信号通路,本研究采用高通量测序技术,构建了太行鸡SRBC免疫组和对照组脾脏组织的数字基因表达谱,对差异表达的基因进行筛选与注释、GO分析和通路的功能显著性富集以及差异基因编码蛋白的互作网络分析。结果表明:太行鸡在免疫6 d后的SRBC抗体滴度平均值为7.653;与对照组相比,差异倍数在2倍以上的共有1 108个基因,其中496个上调表达,612个下调表达,412个上调基因只在免疫组表达,537个下调基因仅在对照组表达;上调基因主要涉及T细胞激活、淋巴细胞增殖和单核细胞增殖等生物学过程,下调基因主要参与免疫效应、防御效应、炎性效应、先天性免疫效应生物学过程;在分子注释系统数据库中注释到的免疫相关的显著调控通路有12条,包括抗原的加工递呈、Toll样受体信号通路、沙门氏菌感染、HTLV-Ⅰ感染和单纯疱疹病毒感染等;56个差异基因编码的蛋白产物存在相互作用,其中16个基因位于网络中心节点,部分差异基因与SRBC相关QTL重叠。初步认为抗原加工与递呈的MHCⅡ类分子途径、T细胞激活等调控通路及RAG2、FOS、MHC B-LBⅢ、HSP90AA1、CXCR4和HSPA8等基因可能是参与调控太行鸡SRBC免疫应答的重要信号通路和基因,但其功能和影响还有待于深入研究。

Ⅱ型超敏反应家兔模型的建立

目的建立Ⅱ型超敏反应家兔模型,为免疫毒理学或药效学研究提供新方法。方法家兔耳缘静脉注射绵羊红细胞(SRBC)5×108kg-1,每天1次,每周连续6d,停药1d,连续6周,诱导Ⅱ型超敏反应。每周观察呼吸和喷嚏等症状,并监测体温,检测血清游离血红蛋白和游离胆红素及尿隐血,计数外周血网织红细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和血小板,测定血清谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性及尿素氮和肌酐浓度,用Coombs实验法检测血清抗SRBC抗体水平。6周后处死家兔,测定肝、肾、脾和胸腺指数,并观察组织病理变化。结果与对照组相比,注射SRBC后1～6周,家兔呼吸和喷嚏等症状及体温未见明显变化,外周血网织红细胞数目和血清游离胆红素浓度未见明显变化。但从第1周开始出现尿隐血,第5周时血清游离血红蛋白显著增加,提示出现血管内溶血。外周血淋巴细胞从第1周开始显著增加,第4周时中性粒细胞明显减少,血小板数目未见明显变化,提示粒细胞受损伤。第1和第2周时血清GPT活性增加,第6周时GOT活性增加,尿素氮和肌酐水平未见明显变化。第3周时血清中出现抗SRBC抗体,第6周时脾脏和胸腺显著肿大,提示免疫系统参与此过程。第6周时肾脏、脾脏和胸腺组织未见明显变化,肝脏组织出现肝小叶排列紊乱、炎症细胞浸润和大量空泡等现象,提示肝脏有变性性损伤。结论家兔耳缘静脉注射SRBC6周可导致Ⅱ型超敏反应。

TDAR在药物临床前毒理学研究中的应用

目的 TDAR试验被认为是检测药物潜在免疫毒性预测性较好的功能性试验,本文综述总结TDAR检测方法在药物临床前毒理学研究中应用的一般原则,以便同行参考。方法通过综合分析、对比,总结国内外文献资料中关于TDAR的实验方法和评价,得出在药物临床前毒理学研究中应用的一般原则。结果 T细胞依赖性抗体反应(TDAR)是检测免疫功能的主要试验。TDAR通过人为引入外来抗原,反映药物或化学物质对免疫系统整体的影响,目前在药物免疫毒理学研究中逐渐得到广泛应用。结论 TDAR试验是检测药物潜在免疫毒性预测性较好的功能性试验,该试验可以用来在临床前的反复给药毒性试验或者临床试验中检测免疫功能的改变,可以对候选药物的免疫调节和免疫毒性特点进行早期预测。

高原过渡期白萨福克绵羊血液生理生化指标的测定

为了研究高原过渡期白萨福克绵羊的机体状况,为其转运至青藏高原进行饲养奠定基础,测定了高原过渡期白萨福克绵羊的血液生理生化指标。结果表明:白萨福克绵羊各项指标均处于我国正常生长绵羊的血液指标范围内,红细胞平均容积公母羊间差异显著(P<0.05),其他19项指标差异不显著(P>0.05)。

绵羊红细胞诱发迟发型变态反应机制致肝损伤的动物模型

用绵羊红细胞（ＳＲＢＣ）ｉｐ小鼠致敏，５ｄ后用ＳＲＢＣ在肝脏攻击，诱发肝脏的迟发型变态反应（ＳＲＢＣ－ＤＴＨ），２４ｈ后可见肝脏重量增加，血清ＡＬＴ、ＡＳＴ水平升高；组织镜检见肝细胞坏死及弥漫性水样变性，嗜酸性变性等；而用生理盐水攻击的对照组则未出现上述现象。肝损伤小鼠肝重量的增加及血清ＡＬＴ水平的上升均在攻击２４ｈ后达到峰值。致敏前用环磷酰胺处理，增强了肝损伤。上述结果提示，该肝损伤系肝脏局部发生的ＳＲＢＣ－ＤＴＨ所引起，其成立与ＤＴＨ的强度有关。

矽肺大鼠肺脏对不同侵入途径、不同抗原的免疫应答

目的 通过观察矽肺大鼠肺脏对不同途径、不同抗原的免疫应答 ,探讨矽肺易受感染的免疫学机制。方法 分别 2次通过气道、腹腔途径给予矽肺大鼠模型及正常对照动物绵羊红细胞 (SRBC)或卡介苗 (BCG)进行免疫后 ,再观察皮内注射SRBC及BCG动物迟发性变态反应 ;实验终期检测血清和肺灌洗回收液特异性IgG水平及细胞因子浓度。结果 SRBC免疫后矽肺气道免疫组表现出异常强烈的迟发性变态反应 ,矽肺气道BCG免疫各组出现相同反应 ;两种抗原免疫后矽肺动物血清及肺灌洗液特异性IgG水平显著高于正常对照组 ;BCG免疫动物中 ,矽肺气道免疫组动物肺灌洗液IFN γ水平显著高于矽肺腹腔免疫组及正常对照组 ,3个组的TNF α水平差异无显著性 ;SRBC免疫动物 3个组的IFN γ水平差异无显著性。结论 矽肺对肺局部以及机体免疫功能具有明显影响 ,导致对外来抗原产生异常强烈的体液免疫反应和迟发性变态反应 ;

不同海拔高度的白萨福克羊生理生化指标比较

为了比较不同海拔高度白萨福克羊的生理生化指标,试验以高海拔(四川红原)和低海拔(四川新津)饲养的白萨福克羊为研究对象,测定了生理指标和血液生理生化指标。结果表明:1)不同海拔高度的白萨福克羊体温在公母间均差异不显著(P>0.05),低海拔地区的呼吸和心率高于高海拔地区;2)白细胞数、血红蛋白含量、红细胞平均容量、红细胞平均血红蛋白量、红细胞平均血红蛋白浓度和红细胞体积分布宽度变异系数等指标在不同海拔地区的公母羊间差异较小,红细胞数和红细胞比容等指标高海拔地区公母羊极显著高于低海拔地区(P<0.01),高海拔地区公母羊血小板数极显著低于低海拔地区(P<0.01);3)谷丙转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白、乳酸脱氢酶、葡萄糖和总胆固醇等指标在不同海拔地区公母羊间差异不显著(P>0.05),高海拔地区公母羊总蛋白、球蛋白和胆碱酯酶等指标极显著高于低海拔地区(P<0.01),低海拔地区公母羊总钙和碱性磷酸酶等指标极显著高于高海拔地区(P<0.01)。

绵羊红细胞的质量对静脉注射用人免疫球蛋白抗补体活性测定的影响

为了分析IVIG抗补体活性测定出现负值与绵羊红细胞质量的关系。采用CH50试验测定IVIG ACA时,在被检样品和其他试验条件相同的情况下,比较了被污染的和未污染的绵羊红细胞对IVIG抗补体活性测定的影响。结果显示,使用被污染的绵羊红细胞(作为试验材料时所得的)检测10份样品ACA(%)均为负值;使用未污染的绵羊红细胞未出现负值。提示被污染的绵羊红细胞干扰了抗补体活性测定,从而引起CH50试验结果出现偏差。

Expression of B Locus Beta 2 (<i>BLB2</i>) Gene at Cytolytic and Latent Immune Response Stages of Immunocompetence in Nigerian Indigenous Chickens

An economically-important trait in poultry for which gene identification continues to be a challenge is immune response. The objective of the study was to quantitate the expression of major histocompatibility complex (MHC) class II BLB2 gene at cytolytic and latent immune response stages in Nigerian indigenous chickens. A total of 108 Nigerian indigenous chickens (NIC) were sourced across the South-western states in Nigeria. The birds were inoculated with sheep red blood cells (SRBC), after which blood samples were obtained (5 days post-inoculation) and antibody haemagglutination test was carried out to place the birds into groups of high and low antibody titre levels. The categorisation of the birds resulted in six groups of normal feather high, normal feather low, naked neck high, naked neck low, frizzle feather high and frizzle feather low antibody groups. A total of 48 chicks were selected from the progeny for gene expression studies. Surgical excision of thymus and spleen was carried out for the detection of cytolytic and latent responses of the birds. β-actin was used as the endogenous control and the critical threshold method (2–ΔΔCт) was carried out for the determination of fold change. The fold change of spleen tissue expression at cytolytic immune response of the birds was 30,362.44 compared to latent response 294.07;and the fold change of thymus expression at cytolytic immune response of the birds was 51.98 compared to latent response 5.24. At both cytolytic and latent stages of immune response to SRBC antigen, BLB2 expression in the spleen was comparatively higher than in the thymus and the height of transcriptional activity was associated with the cytolytic stage. The birds of high titre at both the cytolytic and the latent responses had higher mRNA expression. This study concluded that BLB2 gene expression in the Nigerian indigenous chicken was induced at the cytolytic stage and repressed at the latent stage. During avian infections, the category of high immune response birds would perform better than the low immune response counterpart;and the protective response that BLB2 gene offers will be repressed from one time point to the other.

人工合成抗菌肽的抑菌和溶血作用的分析

为了研究4条人工合成抗菌肽的抑菌和溶血作用。在大肠杆菌悬浮液和绵羊血红细胞悬浮液中,分别加入不同溶度的人工合成抗菌肽,观察其抑菌效果和溶血作用。同时,用圆二色谱仪测定抗菌肽的二级结构。在4条人工合成抗菌肽中,抗菌肽CM-S的抑菌效果为最佳,最小抑菌溶度为25μg/mL,而LB平板菌落的杀菌溶度为50μg/mL;在对绵羊血红细胞的溶血试验中,CM-S在50μg/mL时无溶血作用,100μg/mL时只表现出轻微溶血特性;用圆二色谱仪测定CM-S的二级结构,在2.5%SDS溶液中,208 nm和222 nm出现典型α-螺旋特征峰。人工合成抗菌肽CM-S,含有17个氨基酸,呈典型α-螺旋结构,对大肠杆菌的抑杀效果显著,且溶血性很低,有良好的临床药物开发前景。

一种改进的微量体液免疫功能测定法

本文作者对传统的体液免疫功能测定方法进行了多方面的改进,使有绵羊红细胞、致敏动物血清及补体参加的体外溶血反应在96孔培养板中进行。作者通过选择合适的比色波长及应用MINIREADER Ⅱ,SERIES小型电子分光光度计,使这种新改进的实验方法的检测灵敏度有了很大的提高,这种改进后的新方法使实验操作步骤变得更加简单易行,同时各种试剂用量也大大地减少。该方法的测定结果准确、客观,并有良好的重复性,它能给药物筛选工作及其它方面的体液免疫研究带来诸多方便。

绵羊红细胞溶血试验用于化妆品眼刺激试验的动物替代方法研究

采用绵羊红细胞(SRBC)体外溶血试验测定了32种不同品类化妆品筛选配方或终配方样品的半数溶血浓度(HC5)0,并与家兔眼刺激试验结果比较,研究了SRBC体外溶血试验替代动物眼刺激试验的可靠性,初步确定其判断标准。32个样品中有30个样品可测得其HC50,1个样品中含有红色物质,另有1个样品不能导致血红蛋白变性而不能测得其HC50。家兔眼刺激试验结果表明,32个样品中有5个样品具有轻微眼刺激性,其余样品均无眼刺激性。该5个样品的HC50在0.017%～0.026%之间,-logHC50≥3.59,其余25个无眼刺激性样品的HC50>0.026%,-logHC50<3.59。结果显示,SRBC溶血试验可以用于替代化妆品的动物眼刺激试验。

Direct passive hemagglutination test for rapid quantification of plasma load of the <i>Human Immunodeficiency Virus</i>

An inexpensive and rapid test for determining titers of Human Immunodeficiency Virus (HIV) in plasmas was developed. Washed sheep red blood cells were applied onto HIV positive plasmas, in V-bottomed microtiter plates, to complement the HIV antigens and antibodies present in plasmas. The setup was incubated for 30 minutes at 37℃. Reciprocal of the highest dilution of each plasma which gave passive agglutination of the RBCs was read as its HIV titer. Mean HIV load of five samples, was ≥ 4096.00 ± 0.00 after one day of storage at 4℃ but it reduced to 256.00 ± 70.10, 28.80 ± 3.20, 7.20 ± 0.80 and 1.60 ± 0.98 on days 2, 3, 4 and 7, respectively. HIV antibodies were still detectable, by ELISA, in plasma dilutions that were tested negative with the new test. It was concluded that when HIV antibodies have been confirmed, or added to plasmas, passive hemagglutination test can be applied to assess their viral loads.

绵羊红细胞及补体活性对静注人免疫球蛋白(PH4)抗补体活性测定的影响

目的考察不同地方来源的绵羊红细胞及补体的活性对静注人免疫球蛋白(PH4)(IVIG)抗补体活性测定的影响。方法采用CH50方法测定静注人免疫球蛋白(PH4)抗补体活性,在被检样品、溶血素、补体及其他试验条件相同的情况下,用不同地方的绵羊红细胞,测定IVIG中抗补体活性;在其他条件相同,补体活性不同的情况下,测定IVIG中抗补体活性。结果使用3个不同地方采集的绵羊红细胞(作为试验材料无菌采集),采用补体活性不同的补体分别检测3份IVIG样品中的抗补体活性,结果明显不同。结论不同地方的绵羊红细胞及补体活性不同的补体干扰了抗补体活性的测定,从而引起CH50试验结果出现偏差。

绵羊红细胞敏感性对补体结合试验的最佳反应时间

补体结合试验（CFT）是一种经典的抗原、抗体检测方法,其敏感性、特异性均较高,不仅可用于诊断各种传染病,也可用于鉴定病原体,是免疫学上一个应用较广泛的重要试验[1]。在布鲁氏菌病（布病）的血清学诊断方法中,CFT被世界动物卫生组织（OIE）认可为布病血清学确诊的经典标准方法[2]。在CFT实际操作中经常发现,使用不同保存时间的绵羊红细胞（SRBC）滴定同一批次溶血素和补体时,结果存在较大差异,