桃枝枯病病原菌鉴定及品种(种质)室内抗病性评价

【目的】明确桃枝枯病的病原菌以及不同桃品种(种质)对枝枯病的抗性。【方法】观察桃枝枯病田间症状。通过组织分离法对病样进行分离培养,观察分离物的形态特征,通过扩增测序其ITS、EF-1α和TUB基因序列进行分子鉴定,并对分离物进行致病性验证。选取优势病原菌种类,采用离体有伤接种枝条的方法测定37个桃品种(种质)对其的抗性,并根据病斑长度利用系统聚类方法对不同桃品种(种质)对枝枯病的抗性进行分级和评价。【结果】通过组织分离和纯化,获得54株分离物,经形态学观察和多基因系统发育分析结果显示,这些分离物有3个种,其中:35株为桃拟茎点霉(Diaporthe amygdali),5株为甜樱间座壳(Diaporthe eres),14株为葡萄座腔菌(Botryosphaer dothidea)。致病性测定试验表明,对接种后发病的病斑再分离鉴定,均能得到与原病原菌一致的菌株。抗性测定结果表明,根据病斑长度利用聚类分析将37个桃品种(种质)分为4类,类型Ⅰ有5个、类型Ⅱ有11个、类型Ⅲ有15个、类型IV有6个。抗性评价结果表明:供试品种(种质)中,免疫3个(光核桃、红花山桃和帚形山桃),占8.10%;抗病2个(白根甘肃桃和红根甘肃桃),占5.40%;中抗11个,占29.73%;感病15个,占40.54%;高感6个,占16.22%。【结论】无锡桃枝枯病的病原菌有3种分别为:D.amygdali、D.eres和B.dothidea,其中D.amygdali为优势种,分离频率为64.81%,不同桃品种(种质)对桃拟茎点霉菌的抗性不同,筛选到2个免疫品种(种质)、3个抗性品种(种质)。

桃拟茎点霉的侵染过程及其致病影响因子研究

[目的]桃枝枯病严重威胁着我国南方桃产业的发展,南方桃园中桃拟茎点霉(Phomopsis amygdali)属于桃枝枯病菌流行优势种,但其侵染过程及致病影响因子目前尚不清楚。因此,本文旨在探究P.amygdali侵染过程及其致病影响因子。[方法]探究桃拟茎点霉分生孢子的萌发过程,运用扫描电镜观察不同时间点分生孢子侵染桃嫩枝的部位,并在不同温度、湿度、光照时间的处理下探究该菌致病力的强弱,进一步运用商品化壳梭孢素对其进行毒力测定。[结果]桃拟茎点霉的甲型分生孢子在PDA固体培养基上培养3 h萌发率为66.4%,9 h后分生孢子萌发率为97.6%,24 h后分生孢子产生单根较长的芽管,30 h后菌丝产生隔膜,36 h后产生有分支的营养菌丝。扫描电镜结果显示,侵染菌丝主要入侵桃嫩枝木质部导管及中央髓部,并且破坏木质部导管的结构,然而,在韧皮部并没有观察到侵染菌丝的存在。温度和相对湿度是影响桃拟茎点霉致病力的主要因子,且病害流行的最适温度为30℃,最适相对湿度为98%。桃拟茎点霉产生的壳梭孢素是其致病因子。[结论]本文首次探究了桃拟茎点霉的侵染过程,并发现温度和相对湿度是影响该菌致病力的主要环境因子。

土壤干旱对樟子松的影响及与松枯梢病发生的关系

作为我国辽西北主要的造林树种,樟子松在当地发挥着重要的生态环境效益。但近年来,干旱频发,樟子松出现大面积的衰退甚至死亡现象。为研究樟子松(Pinus sylvestris var.mongolica)对不同程度干旱胁迫的响应以及干旱对枯梢病发生的影响,本研究采用盆栽控水试验模拟3种水分条件(CK:80%FWC;中度干旱:40%FWC;重度干旱:20%FWC)分析了不同程度干旱胁迫下樟子松幼苗主根、侧根、茎和针叶的部分生理生化指标以及樟子松枯梢病的发病情况。结果表明:随着干旱胁迫程度的加剧,樟子松幼苗的针叶相对电导率逐渐下降;超氧阴离子(O^(ˉ)_(2))、过氧化氢(H2O2)以及丙二醛(MDA)的含量随着干旱胁迫的加剧,不同器官呈现不同程度的上升趋势;针叶氮蓝四唑(NBT)和伊文思蓝(Evans blue)染色也随之加深。樟子松各器官的超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性则随着干旱胁迫程度的加剧呈现先上升后下降的趋势。同时,在干旱胁迫下,樟子松枯梢病的发病率及病情指数均显著上升,且上升幅度与干旱胁迫程度呈正比。初步说明,干旱胁迫导致樟子松细胞膜受损,且随着干旱胁迫程度的加剧,膜脂过氧化程度加深。严重干旱胁迫下,植株细胞的抗氧化酶活性显著降低。此外,干旱胁迫显著降低了樟子松对枯梢病的抗性,严重抑制樟子松的生长发育。

用高通量测序技术分析红皮云杉梢枯病前后叶围微生物多样性

采用Illumina Miseq高通量测序技术来探究红皮云杉(Picea koraiensis)梢枯病(Dothiorella gregaria)病叶与健康叶之间共生真菌和细菌群落结构的差异。结果表明:红皮云杉叶片感病前后细菌的OTU变化巨大,真菌的OTU变化也偏大。两组样品共有的细菌种类45个,占细菌总数的16.13%,真菌种类73个,占真菌总数的29.32%。两组样品中菌落结构基本相同,但相对丰度差异较大,在门水平下,细菌中变形菌门(Proteobacteria)在两组样品占据绝对优势,真菌中子囊菌门(Ascomycota)在两组样品占据绝对优势。在属水平下,克雷伯菌属(Klebsiella)是健康叶中的优势细菌,马赛菌属(Massilia)在病叶中占据绝对优势;亚隔孢壳属(Didymella)是健康叶及病叶中的优势真菌,在健康叶及病叶中优势真菌种类未有太大变化,小穴壳菌属(Dothiorella)及Naganishia属仅存在于病叶组。

不同栽培模式对患枝枯病库尔勒香梨树光合及叶绿素荧光特征的影响

以库尔勒香梨为试材,选用省力化栽培模式和普通栽培模式2种栽培模式下的梨园,研究了2种栽培模式对于患有枝枯病梨树的光合作用以及叶绿素荧光的影响,以期为香梨枝枯病的预防及合理化、高质量种植提供参考依据。结果表明:在气孔导度和蒸腾速率上,省力化栽培明显高于普通栽培模式。在净光合速率方面,08:00—12:00省力化栽培远高于普通栽培模式,12:00之后省力化栽培模式下降与普通栽培模式持平,胞间二氧化碳浓度却是相反的情况。在叶绿素荧光方面,荧光动力学曲线省力化栽培高于普通栽培,荧光参数方面,除初始荧光(Fo)以及单位面积热耗散掉的能量(DLo/CSo),普通栽培要高于省力栽培,其它最大荧光(Fm)、可变荧光(Fv)、PSⅡ最大光能转化效率(Fv/Fm)、PSⅡ潜在光化学活性(Fv/Fo)、单位面积吸收的光能(ABS/CSo)、单位面积捕获的光能(TRo/CSo)以及单位面积电子传递的量子产额(ETo/CSo)均是省力化栽培下的值更高。因此省力化栽培模式无论是在光合特征上和叶绿素荧光方面均要优于普通栽培模式。

樟子松人工固沙林衰退的主要特征

针对辽宁省章古台地区樟子松人工固沙林出现的衰退枯死现象 ,系统地研究了樟子松人工固沙林衰退的主要特征 .结果表明 ,衰退的樟子松人工固沙林外貌景观呈灰绿色 ,针叶纤细 ,开花结实率低 ,平均单株球果数量为 10 4～ 16 5个 ,成熟种子千粒重为 6 96～ 7 39g ,种子空粒、涩粒较多 .生长季内 2年生针叶营养元素季节变化规律相似 ,但N、P含量下降 ,K含量明显增高 ,表明养分循环失调 ;衰退林分 2年生针叶叶绿素含量较高 ,健康林分 1年生较高且增幅较大 .松枯梢病的侵害是樟子松人工固沙林衰退的最明显标志 .林分衰退后 ,树高和胸径生长量下降明显 ,林分胸径分布结构“左移”(径级小的株数增多 ) ,衰弱 (亡 )木数量增加了 15 9%～ 2 7 2 % ;根量分别减少了 2 2 9%～ 2 8 9% 。

樟子松枯死原因与防治技术研究

根据生态环境学和现代森林病理学的原理与方法,通过多学科联合攻关,深入系统地研究了樟子松(Pinussylvestris var. mongolica)枯死的难题,搞清了樟子松枯死的起因与机理.提出以营林措施为主的防治技术对策,为经营樟子松人工林、增强林分的生态功能提供了依据.该项研究丰富了森林病理学内容,补充了松枯梢病的研究成果,为林间生产应用提供了科学依据和技术方法.

桃枝枯病病原鉴定

为明确近年来新发现的严重危害桃树的桃枝枯病病原种类,采集浙江和江苏两地的桃枝枯病病枝,对病原进行分离和鉴定。通过对真菌分离物培养性状、分生孢子器和分生孢子形态观察,两地真菌分离物均为桃拟茎点霉(Phomopsis amygdali)。ITS1-5.8SrDNA-ITS2序列分析表明两地真菌分离物为同一种病原菌,与GenBank中桃拟茎点霉序列具有99%的相似性,其ITS序列已在GenBank中登录(登录号分别为JX081273和JX182974)。离体和活体致病性测定结果表明,分离菌株均能使桃健康新梢产生枝枯病症状,从接种发病部位再次分离到病原菌,完成了柯赫氏法则(Koch’postulates)验证。结合其形态特征、ITS序列和致病性测定结果,浙江和江苏桃枝枯病病原确定为桃拟茎点霉。

松沫蝉与松枯梢病的关系及其防治

研究表明，松枯梢病（Sphaeropsis sapinea)是辽宁单古台樟子松（Pinus sylvestris var.mongolica)林木死亡的直接原因，松沫蝉（Aphrophora flavipes)对松枯梢病的发生与危害有明显的促进作用。在防治松枯梢病的过程中，不能忽略松沫蝉的防治。用50％甲胺磷原液或5倍液注干或涂干、500倍液喷雾等是防治松沫蝉幼龄若虫的适宜措施。采用“林敌”烟剂防治成虫是一种简便易行的有效办法。

樟子松枯梢病的防治研究

樟子松移植苗枯梢病 Sphaeropsissapinea可以通过药剂有效地进行防治。移植前以 50 %多菌灵 wp 50 0倍液浸苗 ;在人工林中 ,内吸性杀菌剂甲基托布津、多菌灵为首选药剂 ;在树木新梢生长停止期和展叶中期 (辽西北为 6月初和 6月中旬 ) ,70 %甲基托布津 wp 1 0 0 0倍液或 50 %多菌灵 wp50 0倍液防治 2次。保护性杀菌剂百菌清效果不佳。适时的卫生伐对该病有明显的抑制作用。

不同杀菌剂对桃枝枯病菌的毒力和田间防效

【目的】为了有效防治我国近些年新发现的桃枝枯病,【方法】采用菌丝生长抑制法,测定了15种杀菌剂对桃枝枯病菌(Phomopsis amygdali)的毒力,筛选出高效药剂,并进行田间防治试验。【结果】室内毒力测定显示,咪鲜胺抑菌能力很强,EC50值为0.0047 mg·L-1;其次是多菌灵、苯醚甲环唑和烯唑醇,EC50值分别为0.0276、0.0692、0.0762mg·L-1。田间防病试验表明,花后连续喷雾3次(每次间隔10 d),40%咪鲜胺水乳剂800倍稀释液防病效果最好,药后15 d对病枝和枯枝的防效分别为95.7%和89.4%,药后40 d分别为90.4%和88.5%;其次是50%多菌灵可湿性粉剂500倍液和10%苯醚甲环唑悬浮剂600倍液,药后40 d防效在70%～80%。【结论】咪鲜胺、多菌灵和苯醚甲环唑对桃枝枯病菌有较强的毒力,且对桃枝枯病的田间防治效果明显,其中咪鲜胺的毒力最强、防效最好。

间伐与修枝对沙地樟子松人工林生长与枯梢病的影响

沙地樟子松人工林密度调控试验显示,降低密度可有效促进林木生长,缓解土壤水分亏缺程度,减轻松枯梢病危害。对于20年生左右的片状林,从促进生长和蓄积收获量考虑,900株/hm2保留密度较好;从防病角度考虑,保留密度600株/hm2左右较好。对于31年生的带状近熟林,从控制病害和促进生长角度综合考虑,留优去劣式30%采伐强度较好;采伐并修枝是防病控病的积极有效措施,防病效果好于采伐未修枝措施;从生长量角度看,40%采伐强度下不宜大强度修枝。

樟子松苗木枯梢病的药剂防治试验

为了有效控制樟子松苗木枯梢病的发生、进行了连续2a的试验研究。结果表明．樟子松苗木枯梢病可以通过药剂有效地进行防治。在甲基托布津、菌核净、三唑铜、朴海因、代森锌、多菌灵、可杀得、退菌特、百菌清和苯来特等10种药剂中，多菌灵（500×）、苯来特（800×）和甲基托布津（1000×）3种内吸性杀菌剂效果良好、稳定．应被视为首选药剂。对1年生播种苗在6月中旬至9月中旬施药．隔14d施一次药与隔7d施一次药效果没有明显区别．宜采用14d施一次药。

不同杀菌剂对番石榴枝枯病病原菌的毒力和田间防效

为有效防治我国近些年新发现的番石榴枝枯病,本研究采用菌丝生长速率法和孢子萌发法,测定了8种杀菌剂对番石榴枝枯病菌(小新壳梭孢)的毒力,筛选出高效药剂,并进行田间防治试验。结果表明:30%咪鲜胺CS对小新壳梭孢的抑菌能力最强,EC_(50)为0.2 mg/L;其次是60%苯醚甲环唑WG和35%苯甲·嘧菌酯SC,EC_(50)分别为0.23和0.29 mg/L。30%咪鲜胺CS和35%苯甲·嘧菌酯SC对小新壳梭孢分生孢子萌发的抑制作用最强,EC_(50)分别为0.07和0.09 mg/L;30%咪鲜胺CS和60%苯醚甲环唑WG的预防作用和治疗作用效果也最好;田间试验结果表明,使用30%咪鲜胺CS和60%苯醚甲环唑WG防治番石榴枝枯病的防效最好,达到56.87%和52.40%,有较大的应用潜力。

肉桂枝枯病的防治试验

于广东德庆县三叉顶林场肉桂林设试验小区对枝枯病及其媒介昆虫进行了化学防治试验 ,采用杀菌剂和杀虫剂单施或混施的方式 ,施用的农药包括甲基托布津、菌毒清、敌杀死、桂虫灵和敌敌畏 ,其中只有 1%敌杀死粉剂防治枝枯病效果较好 ,达 63 5 %。

桃枝枯病菌生物学特性研究

桃枝枯病是近年来在江、浙、沪一带出现的一种新病害,为有效防控桃枝枯病,对其病原桃拟茎点霉(Phomopsis amygdali)的生物学特性进行研究。结果表明:桃枝枯病菌菌丝在PDA培养基、温度25℃、pH 6.0~7.0及光照12 h·d^(-1)条件下生长最好;菌丝生长最适碳源是蔗糖和葡萄糖,最适氮源是蛋白胨和牛肉浸膏。病菌在PDA上易产生分生孢子器和分生孢子。分生孢子在温度25℃、pH 6.0~7.0、光照12 h·d^(-1)及高湿(95%以上)条件下萌发率最高。综合而言,不同的营养(培养基、碳源、氮源)、温度、光照、pH、湿度等环境条件对桃枝枯病菌菌丝生长和孢子萌发有显著影响。

生物农药与化学农药复配对桃枝枯病菌的毒力

[目的]明确生物农药和化学农药复配对桃枝枯病菌的抑制效果。[方法]采用菌丝生长抑制法,测定10种生物药剂对桃枝枯病菌的毒力,将毒力强的生物农药与化学农药咪鲜胺、多菌灵和烯唑醇进行复配,探讨复配剂对桃枝枯病菌的联合毒力效果。[结果]毒力作用最强的生物农药是中生菌素,其次是申嗪霉素和梧宁霉素,其抑制中浓度(EC50)分别为0.041 9、0.231 4和0.655 4μg/m L,与3种化学药剂复配,发现申嗪霉素与3种化学农药复配均达到增效作用,而中生菌素和梧宁霉素与化学农药复配大多配比具有增效作用或相加作用。[结论]生物农药与化学农药复配能增加对桃枝枯病菌的毒力。

绿木霉T43发酵液不同菌剂剂型的制备及野外应用

采用摇瓶和发酵罐两种方法制备绿木霉Trichoderma virens T43发酵液,制备水剂和干粉剂两种菌剂剂型,测定其有效保存温度和保存期,评价了其对樟子松枯梢病Sphaeropsis sapinea的野外防治效果。结果表明:发酵罐发酵更有利于绿木霉T43的菌丝生长和抑菌活性成分代谢,制备的菌剂水剂抑菌效果好于干粉剂,其中水剂A2的10倍液室内抑菌效果最好,达到64.58%。4℃和25℃均可以长期保存菌剂,保存90 d后仍可发挥有效作用。在野外对樟子松枯梢病的控制试验中,水剂效果均高于干粉剂,水剂A1为78.88%,A2为81.66%;4种剂型对樟子松枯梢病的预防效果均在50%左右。

接种点柄乳牛肝菌对樟子松枯梢病抗病性的影响

为了研究外生菌根菌提高寄主抗病性的机理,以3年生樟子松(Pinus sylvestris var.mongolica)实生苗为研究对象,测定了樟子松枯梢病原菌(Sphaeropsis sapinea)侵染对接种点柄乳牛肝菌(接SG×接菌组)与不接种点柄乳牛肝菌(接菌组)和单独接种点柄乳牛肝菌(接SG组)3个处理组的病情指数、叶绿素质量浓度、抗病相关酶(CAT、PPO、SOD)活性的影响。结果表明:在接种病原菌30 d后,接菌组病情指数明显高于接SG×接菌组;叶绿素质量浓度由高到低依次为接SG组、接SG×接菌组、接菌组;PPO和SOD活性由高到低依次为接SG组、接SG×接菌组、接菌组,且变化趋势不随时间改变;CAT活性由高到低依次为接菌组、接SG×接菌组、接SG组。综上,在枯梢病病原胁迫下,点柄乳牛肝菌根可以有效提高樟子松叶绿素质量浓度、PPO和SOD活性,降低樟子松枯梢病的病情指数及CAT活性,且大部分指标差异显著(P<0.05)。在枯梢病病原菌的作用下,点柄乳牛肝菌根能够正向调节樟子松的生理生化指标,进而提高樟子松对枯梢病的抗病性。

沈阳地区油松枝枯病病原菌的鉴定

采用传统形态分类学和现代分子生物学(DNA测序)相结合的方法,对沈阳地区近些年发生的油松枯枝病病原菌进行了分类鉴定研究,对筛选的2种真菌的子实体进行了接种试验。结果表明,在沈阳地区油松发病枯死枝上分离到的6个菌株(A1、A2、A3、A4、B1与B2)为2种菌,其中,菌种A为铁锈薄盘菌(Cenangium ferruginosum Fr.ex Fr.),菌种B为松丛赤壳菌(Nectria cucurbitula Sacc.)。2种真菌对油松健康小枝条均有侵染致病性,并分别获得有性子实体,证明了2种真菌为引起油松枯枝病的病原菌。