Shotgun法鉴定牙龈卟啉单胞菌Pg301外膜蛋白

目的采用Shotgun法对牙龈卟啉单胞菌Pg301外膜蛋白进行分析,为筛选牙周炎疫苗候选抗原奠定基础。方法培养Pg301,提取外膜蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,胶内酶解成多肽混合物,经高效液相色谱-串联质谱分析,结合美国国立生物技术信息中心蛋白质数据库进行蛋白鉴定,获得外膜蛋白成分。结果分析出586个唯一肽段,鉴定出93种蛋白,其中有50种是已确定的蛋白。结论 Shotgun法能够快速高效分析细菌外膜蛋白,为筛选保护性抗原、毒力相关候选蛋白等奠定基础。

羊骨脂质的组成分析

为了实现羊骨副产物的有效利用和为羊骨油高值化产品开发提供基础数据,以羊腿骨为原料,提取其中的油脂,分别采用高效液相色谱法(HPLC)、多维质谱鸟枪法(MDMS-SL)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)对羊骨油的甘油酯组成、脂质组学、脂肪酸组成进行分析。结果表明:羊骨油中甘油三酯含量达到96.76%,还有少量的甘油二酯(1.41%),而甘油一酯未检出;羊骨油中共鉴定出19种酰基肉碱、17种鞘磷脂、37种磷脂酰胆碱、39种甘油三酯,总含量分别为5.76、96.58、85.18 nmol/g和15.76μmol/g;羊骨油中共鉴定出11种脂肪酸,其中饱和脂肪酸含量为11.51%,单不饱和脂肪酸含量为72.34%,多不饱和脂肪酸含量为7.56%。

如何“综合运用”解释方法?——检讨法律解释的“霰弹枪模式”

如何综合运用解释方法是法律解释的核心问题。一类惯常的做法可称“霰弹枪模式”,其具有理由虚饰、以量取胜、就事论事以及平等主义等特质。该解释模式的流行乃由能动司法、法官追求自我利益并普遍存在“道德分裂症”倾向,以及法律解释的位阶模式不敷适用等多重原因共同促成。该模式的诸特质显示出其对解释方法的规范属性、裁判证立与科学证明以及合理化的区别、后果论证的客观性等方面问题存在误解。这些错误令霰弹枪模式在实践中容易导致恣意解释、同案不同判、损害裁判可预期性与司法公信力等弊病。抑制霰弹枪模式,须在方法论上重申最佳化、回应性、一致性与位阶性等规则,并在裁判文书释法说理、类案裁判以及典型案例遴选等相关制度上做配套改革。

响应面法提取南极磷虾磷脂及其分子种组成的测定

南极磷虾(Euphausia superba)生物储量巨大,含有丰富的磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC),而PC是生物生长的必需磷脂。现今南极磷虾的研究主要针对磷虾油和蛋白,尚未见有PC分子组成的系统研究报道。该研究使用超声辅助Bligh Dyer脂质提取法提取南极磷虾中磷脂,并采用Box-Benhnken设计原理优化提取工艺,以正离子模式下胆碱碎片(m/z 184)为特异性碎片,利用鸟枪脂质组学法鉴定南极磷虾组织中的PC分子组成。结果表明,南极磷虾磷脂的最佳提取条件为超声时间21.0 min、超声温度30℃、溶剂用量3.1 mL,此条件下磷脂实际提取率的平均值为(7.59±0.03)%。利用鸟枪脂质组学法鉴定出南极磷虾中共含有36种PC分子,其中EPA/DHA脂肪酸链含量占47.75%,质量分数为269.82μg·g^(-1)。研究表明南极磷虾组织中含有丰富的EPA和DHA,而磷脂状态存在的ω-3脂肪酸具有较高的利用效率,这为开发南极磷虾类营养保健产品提供数据支持和理论基础。

孕晚期妇女的社会经济学因素、营养素摄入、肠道菌群和孕期增重的关系

目的研究孕晚期妇女的社会经济学因素、营养素摄入、肠道菌群和孕期增重的关系。方法招募2015年10月至2016年5月于北京协和医院妇产科行产检的健康孕晚期妇女98人,采用结构式问卷调查年龄、民族、身高、孕前体质量和文化程度等,采用24 h膳食回顾法评估孕妇营养素摄入状况,收集粪便样本,记录临分娩前体质量。依据世界卫生组织成人体质量指数(BMI)分类标准和美国医学研究所孕期增重推荐值(2009)评价孕前BMI和孕期增重,采用宏基因组测序技术检测肠道菌群。结果孕期增重不足和过量者分别占15. 3%和50. 0%。孕期增重是否合理与年龄(F=2. 495,P=0. 088)、民族(χ2=0. 065,P=0. 968)、文化程度(χ2=0. 827,P=0. 661)、孕前BMI (F=0. 121,P=0. 887)无关,但与脂肪(F=3. 113,P=0. 049)、碳水化合物(F=3. 750,P=0. 027)、膳食纤维(F=4. 499,P=0. 014)摄入有关。孕期增重过量组Akkermansia muciniphila、Atopobium parvulum和Alistipes indistinctus丰度显著高于孕期增重适宜组,而Lactobacillus rhamnosus、Weissella unclassified、Eubacterium ventriosum、Ruminococcus torques和Bacteroides uniformis丰度则较低;孕期增重不足组Dialister invisus、Alistipes unclassified、Peptoniphilus harei、Escherichia unclassified、Parvimonas unclassified、Campylobacter ureolyticus、Lactobacillus crispatus和Fusobacterium nucleatum丰度显著高于孕期增重适宜组,而Eubacterium ventriosum丰度则较低。结论孕妇孕期增重不合理现象比较普遍,除脂肪、碳水化合物、膳食纤维摄入外,肠道菌群和孕期增重也存在显著关联。

“鸟枪”蛋白组学技术鉴定牙龈卟啉单胞菌47A-1亚型外膜蛋白

目的利用shotgun（鸟枪）蛋白质组学策略鉴定牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.g）亚型47A-1外膜蛋白,深化P.g外膜蛋白的蛋白质组学研究,为进一步研究P.g外膜蛋白的致病性奠定基础。方法提取P.g47A-1外膜蛋白,SDS-PAGE电泳分离蛋白,胶内酶解为多肽混合物,应用毛细管高效液相色谱加串联质谱分析,SEQUEST程序进行数据库搜索并鉴定蛋白。结果用考马斯亮蓝法染色凝胶分离的蛋白,发现P.g47A-1蛋白条带主要在14.3~97 ku之间。酶解的肽段经毛细管高效液相色谱分离,得到肽段水平的总离子流图,分析肽段序列后发现P.g47A-1蛋白有623个唯一肽段,鉴定出136种蛋白,包括了51种已知蛋白,85种未知蛋白。结论 Shotgun技术可分析出P.g47A-1大量未知蛋白,尤其是丰度低、疏水性强的外膜蛋白,优于二维凝胶电泳（two dimensional gelelectrophoresis,2-DE）等传统蛋白质组学方法,为进一步研究P.g外膜蛋白的致病性奠定了基础。

产阿魏酸酯酶乳酸菌的乳杆菌筛选以及基因克隆

运用平板法和高效液相色谱法筛选出一株具有阿魏酸酯酶活性的发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum ATCC9338),其酶活力为260mU/L,并成功运用鸟枪法对该菌株进行阿魏酸酯酶克隆并测序,为产阿魏酸酯酶益生菌的开发提供理论依据。

质谱鸟枪法非靶向快速初筛青鱼中微囊藻毒素残留

母离子扫描(PreIS)是一种功能强大的扫描模式,但较少受到质谱工作者关注。本实验利用PreIS的功能特性和微囊藻毒素(MCs)的分子结构特征,建立了一种鸟枪法用于非靶向快速初筛青鱼(Mylopharyngodon piceus)中MCs残留。通过优化固相萃取条件和质谱参数,选取m/z 135([C_9H_(11)O+H]^+)为特征碎片峰,快速初步定性筛查了所有含该基团的MCs。实验发现,MCs在质谱气相环境内更容易形成双电荷离子,且谱图较纯净,以[M+2H]^(2+)为主。通过方法学验证,该方法的线性关系良好,相关系数R^2介于0.992 5～0.997 1之间;灵敏度较高,检出限和定量限分别低于1.25μg/L和3.99μg/L;日内、日间精密度的相对标准偏差分别为6.8%～8.6%和7.2%～9.1%,重现性较好;方法回收率为68.2%～83.4%,RSD为4.5%～6.8%,能够满足一般分析测试的要求。采用该方法对市售青鱼进行MCs快速初筛,阳性检出率为15%,MCs总浓度为3.4～15.8μg/kg,主要检出的种类为微囊藻毒素RR(MC-RR)和LR(MC-LR)。该方法能够快速检测青鱼中MCs残留,可以为相关部门提供依据和参考,从而为消费者食品安全提供保障。

一种滑膛霰弹枪用碰炸引信保险机构

为保证某霰弹枪系统碰炸杀伤弹在勤务处理、装填、发射和飞行过程中的安全性及在预定的时间可靠解除保险激活下一级火工品问题,严格参照GJB373A《引信安全设计准则》设计一种保险机构。主要利用2种独立环境激励(火焰延期保险和后坐保险)实现安保功能,并给出剪断销及击针保险簧的关键设计参数。实验结果表明,该设计科学、合理。

以胶原蛋白为例浅述古蛋白质组学研究现状与未来

蛋白质作为参与构建生物体的重要生物大分子,是生物功能与代谢的物质基础,同时蛋白质的序列信息又源自生物的遗传编码信息,因此是认识生物演化本质的重要研究对象。近年来,随着质谱技术的发展,获取生物化石中的古蛋白质序列信息不再遥不可及,这为在形态学与DNA序列信息缺乏的条件下对古生物的认识提供了一条新途径。胶原蛋白(Collagen)在动物骨骼中极为丰富,又因为其特殊的结构,易于在化石中保存,故已成为古蛋白质组学研究的重要对象。本文将以胶原蛋白为例,对古蛋白质组学现有的研究方法与已经取得的研究成果进行总结,并对古蛋白质组学目前面临的挑战与困难及未来研究趋势进行讨论,旨在展示古蛋白质组学的应用潜力,并探讨其在生物演化研究中的意义。

年龄轨迹对细菌性阴道病女性阴道-宫颈宏基因组菌群的影响

目的探索苏州高新区35~65岁妇女下生殖道菌群的分布情况,并分析细菌性阴道病(bacterial vaginosis,BV)与下生殖道菌群的相关性。方法从苏州高新区2018年7月至2022年9月参与“两癌”筛查的女性中招募本项目受试者,并采集宫颈分泌物样本以及相关表型信息,从入组的女性中筛选出232名女性的样本进行分析,包括125名BV女性(BV组)和107名健康女性(对照组)。对分泌物样本进行宏基因组鸟枪法测序检测微生物菌群,并通过统计学方法分析宫颈微生物与BV的相关性。结果232名女性的阴道-宫颈微生物在种水平的研究提示阴道-宫颈菌群聚类成7种类型,BV导致惰性乳杆菌型(Type 1)减少,而加德纳菌型(Type 3)增加。进一步探索与BV相关的微生物标志物,发现加德纳菌(Gardnerella vaginalis)、人型支原体(Mycoplasma hominis)、疱疹病毒(Cyprinid herpesvirus 3)以及解脲支原体(Ureaplasma urealyticum)在BV组女性中明显富集。进一步按<50岁和≥50岁将女性分为中年组和老年组,发现不同年龄阶段,BV对菌群影响的程度不同。相对中年女性,老年女性阴道菌群结构受BV影响的程度更大。上述提到的BV相关标记物更容易在老年BV女性中富集。结论本研究通过宏基因组鸟枪法探索中老年女性下生殖道菌群谱图,发现BV对阴道菌群的影响会根据年龄轨迹发生变化,可为疾病的分年龄段诊断、治疗、评估预后提供一定的研究基础。

373例妇女下生殖道微生物宏基因组鸟枪法测序分析

目的探索苏州高新区妇女下生殖道菌群的分布情况,并分析绝经、避孕方式对下生殖道菌群的影响。方法采集苏州高新区2018年6~7月参与"两癌"筛查的373例女性的宫颈分泌物样本,并收集对应的表型数据。对分泌物样本进行宏基因组鸟枪法测序检测微生物菌群,并通过统计学方法分析宫颈微生物与表型的相关性。结果373名女性的微生物在种水平的研究提示惰性乳杆菌、卷曲乳杆菌和加德纳菌在人群中占前三位,分别占人群的20%,15%和13%,另有38%混合类型(Diverse类型),即没有明显主导菌;育龄期妇女和绝经期女性菌群类型有明显差异;采用不同避孕方式的女性阴道菌群有明显差异。结论本研究通过宏基因组鸟枪法探索中国苏州高新区女性下生殖道菌群谱图,发现阴道微生物与年龄、避孕方式的选择有关联。建立全面客观了解女性生殖道微生物的生物组学将为疾病诊断、治疗、评估预后提供充分的依据。