Shugoshin1在非小细胞肺癌多西紫杉醇耐药中的作用

目的:探讨Shugoshin1在非小细胞肺癌A549细胞对多西紫杉醇耐药中的作用。方法:用Western-blot及RT-PCR检测Sgo1在非小细胞肺癌紫杉醇耐药细胞株A549/Taxotere及亲本A549中的表达差异。通过构建Sgo1的si-RNA质粒和过表达质粒经慢病毒包装分别转染A549/Taxotere及亲本A549细胞,利用Western-blot及RT-qPCR鉴定其干预效果。MTT比色法比较下调及上调Sgo1的表达后细胞对化疗药物多西紫杉醇敏感性的影响。结果:在非小细胞肺癌多西紫杉醇耐药细胞株中,Sgo1的表达明显高于其亲本细胞株A549。通过外源性筛选和鉴定,经慢病毒包装载体,成功构建了Sgo1表达上调和下调的细胞株;MTT试验发现:抑制Sgo1的表达能显著增加A549/Taxotere对多西紫杉醇的敏感性,而外源性上调Sgo1的表达能明显降低A549对多西紫杉醇的敏感性。结论:Sgo1的表达与非小细胞肺癌细胞株A549紫杉醇耐药性密切相关。

Shugoshin1对非小细胞肺癌H1299细胞增殖的影响

目的:探讨Shugoshin1(Sgo1)对于非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞株H1299增殖的影响。方法:用Western blot及RT-PCR检测Sgo1在NSCLC细胞株H1299中的表达。成功构建Sgo1siRNA质粒,经慢病毒包装转染H1299细胞,利用Western blot及RT-PCR鉴定转染效力。用单层细胞生长实验和平板克隆形成实验观察Sgo1对H1299细胞株增殖及克隆形成能力的影响。结果:在NSCLC细胞株H1299中,Sgo1表达明显高于人成纤维细胞株。下调Sgo1的表达后,H1299细胞株的增殖能力和克隆形成能力均明显减低。结论:Sgo1的表达与NSCLC细胞株H1299的增殖密切相关,有可能成为肺癌治疗的一个新靶点。

Shugoshin1参与NSCLC细胞多西紫杉醇耐药的机制探讨

目的:探讨SGO1(Shugoshin1)参与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549对多西紫杉醇耐药的可能机制。方法:成功构建SGO1过表达细胞株A549-SGO1,利用RT-PCR和Westernblot进行鉴定;通过RT-PCR和免疫荧光检测A549-Vector细胞及A549-SGO1细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物的表达情况;通过RT-PCR和Western-blot检测EMT相关转录因子Twist2的表达情况。结果:与A549-Vector细胞相比,A549-SGO1细胞中上皮相关标志物E-cadherin和ZO-1的表达明显降低,而间质相关标志物Fibronectin和Vimentin表达明显升高,EMT相关转录因子Twist2的表达也明显升高。结论:SGO1可能通过Twist2介导EMT进而参与NSCLC细胞株A549对多西紫杉醇的耐药。

染色体分离的分子机制

染色体分离是真核生物正确传递遗传信息的关键。通过对真核模式生物特别是酵母突变体的研究,筛选并克隆出了很多与染色体分离相关的基因,初步揭示了染色体分离的分子机制。染色单体黏着的分子基础是黏连素。黏连素的黏着降解、纺锤体检验点的监控及shugoshin的保护作用在染色体正确分离过程中起着关键的作用。

先天性膈疝相关基因的筛选

目的筛选先天性膈疝的相关基因。方法确诊为先天性膈疝的11例胎儿,出生后使用Affymetrix Cytoscan 750K平台微阵列进行分析。结果仅1例患儿检出基因序列异常,包括268-kb的重复2q33.1、ARR[hg19]2q33.1(201,303,201-201,571,143),一个纯合性缺失的8p11.22、ARR[hg19]8p11.22(39,226,335-39,388,919),以及12p13.33的部分损失、ARR[hg19]12p13.33(1,262,947-1,375,084)。检出5个基因发生序列重复,包括SPATS2L、KCTD18、Shugoshin样蛋白2(SGOL2)、醛氧化酶1(AOX1)、AOX2P;2个基因发生纯合缺失,为ADAM5、ADAM3A;1个基因为ERC1发生了杂合性的部分损失。该患儿母亲为初产妇,合并妊娠期糖尿病,进行微阵列分析未检出基因序列异常。结论筛选出先天性膈疝患儿8个基因发生序列异常,包括SPATS2L、KCTD18、Shugoshin样蛋白2、醛氧化酶1、醛氧化酶2P、ADAM5、ADAM3A和ERC1。这些基因序列异常可能是先天性膈疝的潜在根因素。

SGOL1通过调节PKM2促进肺癌细胞增殖和侵袭

Shugoshin-1(SGOL1)是酵母Shugoshin的人类同源物之一,位于着丝粒区域,能够通过阻止着丝粒内聚复合物早熟分裂维持染色体稳定。近年来,SGOL1在肿瘤中的作用受到关注,但它在肺癌中的功能尚不清楚。本研究基于TCGA数据库分析发现,SGOL1在肺癌组织中高表达(n=529,P<0.00001),并与患者的不良预后呈正相关(P=0.0049)。qRT-PCR和Western印迹结果证实:SGOL1在肺癌细胞系表达水平均较正常肺上皮细胞的升高。在肺癌A549和NCI-H2405细胞系中,敲低SGOL1表达水平后,Cell Counting Kit-8(CCK8)实验、平板克隆实验、划痕愈合实验、Transwell实验结果分别提示,细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭能力下降(P<0.05)。同时本研究发现,在TCGA数据中,丙酮酸激酶肌肉同工酶2(PKM2)和SGOL1的表达呈正相关性(r=0.38,P=0)。Western印迹检测显示,在肺癌细胞A549和NCI-H2405中,敲低SGOL1能下调PKM2的表达水平。此外,功能回补实验证实,过表达PKM2能部分逆转敲低SGOL1对肺癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力的抑制作用。因此,本研究表明,SGOL1可能通过调节PKM2促进肺癌细胞的增殖和侵袭。本研究为SGOL1在肺癌中的作用机制提供理论依据。

着丝粒及其在减数分裂中的作用研究进展

着丝粒作为真核生物染色体的重要结构之一,是有丝分裂和减数分裂过程中重要的功能元件,其所起到的重要作用越来越受到人们的重视。在整个真核生物类群中,尽管不同物种之间着丝粒的DNA序列相差极大,但是其功能却是相当保守,这确保了着丝粒在调控细胞分裂和染色单体分离过程中能够正常行使其功能,除此之外,人们还发现着丝粒蛋白不仅在细胞的有丝分裂中起作用,还在减数分裂中起着重要的作用。