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CKIP-1 siRNA影响膝关节骨性关节炎进展的动物实验研究
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作者 戴章生 《齐齐哈尔医学院学报》 2024年第17期1601-1605,共5页
目的 探讨CKIP-1 siRNA对膝关节骨性关节炎进展的影响研究。方法 建立大鼠膝关节骨关节炎模型,选取其中一只分离培养实验大鼠骨髓间充质干细胞,分为空白组、阴性对照组和不同浓度的Ckip-1 siRNA组(10 pmol/ml、20 pmol/ml和50 pmol/ml)... 目的 探讨CKIP-1 siRNA对膝关节骨性关节炎进展的影响研究。方法 建立大鼠膝关节骨关节炎模型,选取其中一只分离培养实验大鼠骨髓间充质干细胞,分为空白组、阴性对照组和不同浓度的Ckip-1 siRNA组(10 pmol/ml、20 pmol/ml和50 pmol/ml)检测不同组的Ckip-1 siRNA表达量,确定最佳的Ckip-1 siRNA组为50 pmol/ml;将大鼠模型分为模型组20只、生理盐水组20只、CKIP-1 siRNA组20只,向生理盐水组注射生理盐水,向CKIP-1 siRNA组注射CKIP-1 siRNA干预的骨髓间充质干细胞,空白组不做处置。检测注射后的实验鼠膝关节处成骨相关基因OPN、Runx2的mRNA的相对表达量,检测其成骨能力变化情况。结果 检测注射后的实验鼠膝关节处成骨相关基因OPN、Runx2的mRNA的相对表达量明显增加(P<0.05),检测其成骨能力增强(P<0.05)。结论 Ckip-1基因对骨髓间充质干细胞的负调控作用。CKIP-1 siRNA干预后骨髓间充质干细胞能够增加实验鼠膝关节处骨再生能力,为膝关节骨性关节炎的治疗提供新的方法,期望能够提出新的靶点。 展开更多
关键词 CKIP-1 sirna 膝关节骨性关节炎 动物实验 机制进展
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创面siRNA敲降HO-1改善小鼠放创复合伤创面愈合的实验研究
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作者 吕晓凡 汪国建 +5 位作者 赵娜 龙爽 王双 冉新泽 王军平 王涛 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1194-1205,共12页
目的检测血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)在放创复合伤(radiation-wound combined injury,R-W-CI)创面修复中的表达情况,评价通过siRNA敲降HO-1对放创复合伤创面愈合的改善作用。方法将36只8周龄雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法... 目的检测血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)在放创复合伤(radiation-wound combined injury,R-W-CI)创面修复中的表达情况,评价通过siRNA敲降HO-1对放创复合伤创面愈合的改善作用。方法将36只8周龄雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为单纯皮肤创伤组(W组,n=18)和合并全身辐射(6 Gy)损伤的皮肤创伤组(R-W-CI组,n=18),建立单纯皮肤创伤与放创复合伤的小鼠模型。在创面愈合过程中,拍照记录创面愈合情况并通过Image J量化分析残留面积;取材创面组织进行HE染色及病理组织学观察;动态检测外周血象评估造血系统损伤情况。通过创面组织定量PCR及Western blot检测创面HO-1表达水平及变化情况。将26只8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为siRNA敲降HO-1组(si-HO-1组,n=13)和siRNA阴性对照组(si-NC组,n=13)。放创复合伤致伤后,si-HO-1组在每个创面涂抹负载si-HO-1(5μmol/L)的F127凝胶60μL,si-NC组创面涂抹等量负载阴性对照si-NC的F127凝胶。通过创面组织Western blot检测HO-1的敲降情况,观察创面面积变化,对伤后第3天样本进行定量PCR检测IL-1β、IL-6、TNF-α等炎症因子的表达变化,组织切片进行Ki67免疫组织化学和HE染色;对第9天创面组织进行HE染色病理评估;综合评价敲降HO-1对放创复合伤创面愈合的改善作用。结果与W组相比,创面残留面积的半定量分析表明R-W-CI组愈合在伤后第7、10天显著延迟(P<0.01);第7天的HE病理显示R-W-CI组再上皮化延缓,肉芽组织生长不良;同时R-W-CI组外周血白细胞及其分类计数显示在损伤后早期即显著下降(P<0.05)。检测发现,R-W-CI组创面HO-1蛋白在伤后第3、7天表达略高于W组,但无显著差异(P>0.05),而在第10天显著升高(P<0.05),同时伴有全长与截短形式的分布改变;定量PCR显示R-W-CI组在伤后第7天、10天的创面组织HO-1的表达显著高于W组(P<0.05)。放创复合伤创面siRNA干预实验显示:与si-NC组比较,si-HO-1组能有效敲降创面HO-1蛋白含量(P<0.05),促进伤口收缩(P<0.05),减小创面宽度(P<0.01),上调致伤第3天创面IL-6、TNF-α等炎症因子表达,促进创缘组织细胞增殖,改善肉芽组织生长情况。结论放创复合伤创面修复过程中存在HO-1蛋白的持续高表达,创面siRNA敲降HO-1可以改善R-W-CI组小鼠创面乏炎状态,促进创面愈合。 展开更多
关键词 放创复合伤 创面愈合 炎症反应 血红素加氧酶1 小干扰RNA
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融合蛋白anti-EGFR-iRGD修饰的红细胞外囊泡联合siRNA靶向抑制三阴性乳腺癌恶性进程
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作者 韦雪妮 杨忠慧 +2 位作者 黄吉 陈国梅 成昌娟 《现代肿瘤医学》 CAS 2024年第17期3197-3205,共9页
目的:通过红细胞来源的细胞外囊泡(red blood cell-derived extracellular vesicles,RBCEVs)构建靶向递送系统以提高对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)恶性进程的抑制效率。方法:采用脂质插入法将融合蛋白anti-抗人... 目的:通过红细胞来源的细胞外囊泡(red blood cell-derived extracellular vesicles,RBCEVs)构建靶向递送系统以提高对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)恶性进程的抑制效率。方法:采用脂质插入法将融合蛋白anti-抗人表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)-iRGD多肽结合至RBCEVs膜表面以构建生物相容性药物递送系统。通过电穿孔方式使连环蛋白β1(Catenin Beta 1,CTNNB1)-siRNA有效装载至anti-EGFR-iRGD-RBCEVs。进一步验证anti-EGFR-iRGD-si-CTNNB1-RBCEVs对TNBC增殖、迁移的影响及对上皮间充质转化相关蛋白表达的调控。结果:anti-EGFR-iRGD-si-CTNNB1-RBCEVs在120 h内具有较高血清稳定性,并且可有效防止RNA酶对CTNNB1-siRNA的降解。另外,该复合物可显著提高si-CTNNB1对TNBC细胞中CTNNB1基因及β-catenin蛋白的抑制作用并抑制TNBC细胞的增殖、迁移能力,下调Snail、Vimentin、N-cadherin并促进E-cadherin蛋白的表达。结论:该研究通过构建融合蛋白anti-EGFR-iRGD修饰的RBCEVs联合siRNA靶向抑制TNBC恶性进程,这将为治疗整合素α_(v)β_(3)高表达的TNBC提供更有利治疗方式。 展开更多
关键词 红细胞来源的细胞外囊泡 三阴性乳腺癌 sirna 上皮间充质转化 脂质插入法 连环蛋白β1
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纳米凝胶搭载的siRNA通过靶向抑制施万细胞铁死亡促进周围神经损伤修复
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作者 杨俊 黄欣林 +3 位作者 覃汉俊 谢思远 朱煜华 吴珺 《中国医学物理学杂志》 CSCD 2024年第4期495-503,共9页
目的:探究周围神经损伤(PNI)后施万细胞的死亡机制,使用纳米凝胶搭载的siRNA靶向抑制施万细胞死亡。方法:下载GEO数据库中PNI的转录组数据,依次进行数据处理、差异分析、GO功能富集分析、铁死亡通路鉴定以及靶基因的筛选。通过蛋白印记... 目的:探究周围神经损伤(PNI)后施万细胞的死亡机制,使用纳米凝胶搭载的siRNA靶向抑制施万细胞死亡。方法:下载GEO数据库中PNI的转录组数据,依次进行数据处理、差异分析、GO功能富集分析、铁死亡通路鉴定以及靶基因的筛选。通过蛋白印记和qPCR实验验证靶基因的差异性。自组装单宁酸(TA)-siRNA纳米凝胶,通过丁达尔效应实验、粒径和电位测量、细胞吞噬实验、细胞骨架染色和CCK-8细胞活力实验鉴定纳米凝胶的物理学和生物学特性。通过划痕实验、免疫荧光染色实验、蛋白印记和qPCR实验验证TA-siRNA纳米凝胶抑制施万细胞铁死亡的有效性。结果:PNI后施万细胞出现明显的铁死亡现象,Bex1是调控施万细胞铁死亡的关键基因。TA-siRNA纳米凝胶具有优良的物理学和生物学特性,能够将siRNA成功地携带到损伤的施万细胞中并沉默靶基因,从而有效地抑制施万细胞损伤后的铁死亡。结论:纳米凝胶搭载的siRNA可以靶向抑制施万细胞铁死亡,为临床治疗PNI提供新的方向。 展开更多
关键词 周围神经损伤 施万细胞 铁死亡 纳米凝胶 sirna 靶向治疗
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Targeted anti-cancer therapy: Co-delivery of VEGF siRNA and Phenethyl isothiocyanate (PEITC) via cRGD-modified lipid nanoparticles for enhanced anti-angiogenic efficacy 被引量:1
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作者 Bao Li Haoran Niu +10 位作者 Xiaoyun Zhao Xiaoyu Huang Yu Ding Ke Dang Tianzhi Yang Yongfeng Chen Jizhuang Ma Xiaohong Liu Keda Zhang Huichao Xie Pingtian Ding 《Asian Journal of Pharmaceutical Sciences》 SCIE CAS 2024年第2期170-187,共18页
Anti-tumor angiogenesis therapy, targeting the suppression of blood vessel growth in tumors, presents a potent approach in the battle against cancer. Traditional therapies have primarily concentrated on single-target ... Anti-tumor angiogenesis therapy, targeting the suppression of blood vessel growth in tumors, presents a potent approach in the battle against cancer. Traditional therapies have primarily concentrated on single-target techniques, with a specific emphasis on targeting the vascular endothelial growth factor, but have not reached ideal therapeutic efficacy. In response to this issue, our study introduced a novel nanoparticle system known as CS-siRNA/PEITC&L-cRGD NPs. These chitosan-based nanoparticles have been recognized for their excellent biocompatibility and ability to deliver genes. To enhance their targeted delivery capability, they were combined with a cyclic RGD peptide (cRGD). Targeted co-delivery of gene and chemotherapeutic agents was achieved through the use of a negatively charged lipid shell and cRGD, which possesses high affinity for integrin αvβ3 overexpressed in tumor cells and neovasculature. In this multifaceted approach, co-delivery of VEGF siRNA and phenethyl isothiocyanate (PEITC) was employed to target both tumor vascular endothelial cells and tumor cells simultaneously. The co-delivery of VEGF siRNA and PEITC could achieve precise silencing of VEGF, inhibit the accumulation of HIF-1α under hypoxic conditions, and induce apoptosis in tumor cells. In summary, we have successfully developed a nanoparticle delivery platform that utilizes a dual mechanism of action of anti-tumor angiogenesis and pro-tumor apoptosis, which provides a robust and potent strategy for the delivery of anti-cancer therapeutics. 展开更多
关键词 ANTI-ANGIOGENESIS Tumor apoptosis Nanoparticles VEGF sirna Hypoxia inducible factor(HIF)-1 protein Phenethyl isothi ocyanate(PEITC)
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靶向端粒酶逆转录酶基因siRNA抑制兔早期后发性白内障的实验研究
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作者 张翔翔 何娜 +1 位作者 何佳玲 吕志刚 《中国眼耳鼻喉科杂志》 2024年第1期60-66,共7页
目的观察靶向端粒酶逆转录酶(TERT)基因小干扰RNA(siRNA)对兔眼白内障术后早期晶状体后囊膜混浊的抑制作用。方法选取20只新西兰大白兔(40眼)纳入研究,采用自身对照法,分为2组:右眼为靶向TERT基因siRNA重组腺病毒TERT-siRNA-Adv组(实验... 目的观察靶向端粒酶逆转录酶(TERT)基因小干扰RNA(siRNA)对兔眼白内障术后早期晶状体后囊膜混浊的抑制作用。方法选取20只新西兰大白兔(40眼)纳入研究,采用自身对照法,分为2组:右眼为靶向TERT基因siRNA重组腺病毒TERT-siRNA-Adv组(实验组),左眼为阴性对照重组腺病毒Adv组(对照组),每组20眼;均实施超声乳化晶状体吸除术,术后前房内分别注入0.1 mL滴度为10^(9) PFU/mL的TERT-siRNA-Adv和阴性对照腺病毒;术后第1天、1周、2周、4周观察眼压、角膜水肿、前房闪辉及后发性白内障(PCO)分级情况,术后4周对术眼各组织行病理学检查及采用Western印迹法检测后囊膜细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达变化。结果实验组后囊膜混浊较对照组明显减轻(P<0.05);术后早期存在轻度眼压升高以及眼前节炎症反应(角膜水肿、前房闪辉),但于术后1周恢复,2组间差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,实验组后囊膜细胞内α-SMA相对表达量明显下降(P<0.05);组织病理学结果显示,实验组后囊膜下少量成纤维细胞增殖,对照组后囊膜下多层成纤维细胞增殖,囊膜结构紊乱;2组角膜、虹膜各层组织细胞排列整齐,结构完整,无明显炎性细胞浸润。结论靶向TERT基因siRNA可有效抑制晶状体上皮细胞增殖以及兔早期PCO的发生,且对眼前段各组织无明显毒性作用。 展开更多
关键词 后囊膜混浊 端粒酶逆转录酶 sirna 角膜水肿 前房闪辉 晶状体上皮细胞
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靶向抗HSV-1的siRNA研究进展
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作者 周磊 吕雯雯 +2 位作者 段永忠 钱雯 程继帅 《昆明医科大学学报》 CAS 2024年第9期1-8,共8页
单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)是一种能够在各类人群中携带和传播并能引起包括口唇疱疹、荚膜炎、角膜炎和病毒性脑炎等疾病的重要病原体。虽然已有多种类型的HSV-1疫苗处于研发的不同阶段,但仍没有商业化的疫苗... 单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)是一种能够在各类人群中携带和传播并能引起包括口唇疱疹、荚膜炎、角膜炎和病毒性脑炎等疾病的重要病原体。虽然已有多种类型的HSV-1疫苗处于研发的不同阶段,但仍没有商业化的疫苗上市销售。临床上使用的特异性抗HSV-1药物如阿昔洛韦、伐昔洛韦和喷昔洛韦等也面临严重的抗药性威胁,开发新的特异性抗HSV-1药物是当前所面临的主要任务之一。siRNA是一种长度为20~25核苷酸的双链RNA,通过在转录后水平上沉默基因表达发挥干扰作用。siRNA作为一种新的、有潜力的抗病毒药物备受关注,发展也较为迅速。综述近年来siRNA在抗HSV-1方面的研究进展,包括靶向HSV-1关键基因和HSV-1互作的宿主细胞基因的siRNA设计、递送和靶向策略。 展开更多
关键词 小干扰RNA 单纯疱疹病毒1型 靶向调控
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靶向核转录因子-κB的siRNA和甲氨蝶呤纳米脂质体对类风湿关节炎大鼠骨破坏的影响
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作者 段卫峰 张景伟 +1 位作者 卢岩岩 杜志军 《风湿病与关节炎》 2024年第9期1-6,共6页
目的:探讨靶向核转录因子-κB(NF-κB)的siRNA和甲氨蝶呤(MTX)复合纳米脂质体对胶原诱导类风湿关节炎模型大鼠骨破坏的影响。方法:将48只健康SD大鼠随机分为空白对照组10只和造模组38只。造模成功的30只大鼠随机分为模型对照组、MTX组、... 目的:探讨靶向核转录因子-κB(NF-κB)的siRNA和甲氨蝶呤(MTX)复合纳米脂质体对胶原诱导类风湿关节炎模型大鼠骨破坏的影响。方法:将48只健康SD大鼠随机分为空白对照组10只和造模组38只。造模成功的30只大鼠随机分为模型对照组、MTX组、MTX复合纳米脂质体组(si-MTX组),每组10只。测量各组大鼠治疗前后体质量、脏器指数、足趾肿胀度、血清中炎性因子水平,以及滑膜组织中相关基因和蛋白的表达水平。结果:MTX和复合纳米脂质体均可显著降低胶原诱导性关节炎大鼠胸腺指数、脾指数、足跖肿胀度,降低血清中炎症因子水平,调节滑膜组织中相关基因和蛋白的表达(P<0.05),且si-MTX组作用更强(P<0.05)。结论:复合纳米脂质体发挥作用的机制可能是阻断了NF-κB通路,减少促炎因子释放,抑制骨吸收,保护关节软骨,且靶向性、安全性更高。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 sirna 核转录因子-ΚB 甲氨蝶呤 纳米 脂质体 骨破坏
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siRNA纳米递药系统在胶质瘤治疗中的研究进展
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作者 张俊丽 曹俊如 +3 位作者 张瑶瑶 鲁胜男 苏峰 何广卫 《医药前沿》 2024年第34期52-57,共6页
胶质瘤是最常见的中枢神经系统原发性肿瘤之一,具有高侵袭性和高病死率等特点。小干扰(siRNA)可以通过靶向胶质瘤细胞中的关键基因,对胶质瘤相关基因进行沉默,从而抑制胶质瘤的生长和扩散,近年来受到广泛关注。然而,siRNA的应用受到其... 胶质瘤是最常见的中枢神经系统原发性肿瘤之一,具有高侵袭性和高病死率等特点。小干扰(siRNA)可以通过靶向胶质瘤细胞中的关键基因,对胶质瘤相关基因进行沉默,从而抑制胶质瘤的生长和扩散,近年来受到广泛关注。然而,siRNA的应用受到其性质不稳定和血脑屏障的限制,需要合适的纳米载体提高其稳定性和靶向性。本文对siRNA纳米递药系统在胶质瘤治疗中的研究进展进行综述,旨在为胶质瘤的治疗提供新的策略和方法。 展开更多
关键词 胶质瘤 sirna 纳米递药系统 血脑屏障 综述
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番茄中Ty-1抗性机制研究中siRNA含量的测定
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作者 黄毅 《种子科技》 2024年第20期8-10,共3页
Ty-1抗性基因是一种被广泛应用于预防番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)的基因。该基因已被克隆,并被证明代表了一类新型的R基因,其编码一种为RNA依赖的RNA聚合酶(RDR),这种酶与已知在RNAi信号扩增中起作用的RDR1、RDR2和RDR6有所不同。近期研究... Ty-1抗性基因是一种被广泛应用于预防番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)的基因。该基因已被克隆,并被证明代表了一类新型的R基因,其编码一种为RNA依赖的RNA聚合酶(RDR),这种酶与已知在RNAi信号扩增中起作用的RDR1、RDR2和RDR6有所不同。近期研究表明,Ty-1通过增强转录基因沉默(TGS)来获得抗性,并且还能防御与之相关的双组分番茄严重皱缩双生病毒(ToSRV)。在带有Ty-1基因的番茄植株中,利用病毒诱导的基因沉默(TRV2-180和TRV2-190)技术,证明Ty-1抗性基因还能够保护植物免受单组分、叶蝉传播的甜菜曲顶病毒(BCTV)的感染。虽然已知的siRNA是DNA甲基化(RdDM)和诱导TGS所必需的因素,但是在本次实验中未能成功证明Ty-1番茄植物中24-nt大小siRNA的相对富集情况。 展开更多
关键词 番茄 Ty-1抗性机制 sirna
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靶向siRNA阻断Wnt/β-catenin信号通路对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜基质细胞VEGF、MMP-9表达的影响 被引量:31
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作者 刘儒彪 刘义 +2 位作者 于岚 郑婷婷 王罡 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期6-11,26,共7页
目的通过观察人子宫内膜异位症在位子宫内膜基质细胞β-catenin的表达,及利用siRNA靶向沉默β-catenin基因以阻断Wnt/β-catenin信号通路来观察其下游靶基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶... 目的通过观察人子宫内膜异位症在位子宫内膜基质细胞β-catenin的表达,及利用siRNA靶向沉默β-catenin基因以阻断Wnt/β-catenin信号通路来观察其下游靶基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)表达的变化,探讨Wnt/β-catenin信号通路在子宫内膜异位症发生机制中的作用。方法采用随机、对照设计,将体外分离、培养的24例子宫内膜异位症患者在位子宫内膜基质细胞分成3组(n=8):空白组、阴性组(以含阴性荧光siRNA 100pmol和转染试剂5μg的混合物转染)以及siRNA干扰组(以含β-catenin siRNA 100pmol和转染试剂5μg的混合物转染),并以10例非子宫内膜异位症患者子宫内膜基质细胞作为正常组。利用Real-time PCR和Western blot方法分别检测子宫内膜异位症在位子宫内膜空白组和非子宫内膜异位症正常组β-catenin的表达。转染24h后,用以上方法分别检测子宫内膜异位症空白组、阴性组和siRNA干扰组β-catenin、VEGF以及MMP-9的表达。结果子宫内膜异位症空白组β-catenin mRNA和蛋白的表达明显高于非子宫内膜异位症正常组(均P<0.05)。子宫内膜异位症siRNA干扰组β-catenin、VEGF以及MMP-9mRNA和蛋白的表达明显低于空白组和阴性组(均P<0.05),而空白组与阴性组之间差异无统计学意义(均P>0.05)。结论子宫内膜异位症在位子宫内膜基质细胞β-catenin的表达明显高于非子宫内膜异位症患者,阻断Wnt/β-catenin信号通路后,其下游靶基因VEGF、MMP-9的表达明显受到抑制。因此,Wnt/β-catenin信号通路可能在子宫内膜异位症的发生机制中起重要作用。 展开更多
关键词 子宫内膜异位症 WNT/Β-CATENIN信号通路 sirna β-catenin VEGF MMP-9
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人工注射Dnmt3 siRNA对意大利蜜蜂雌蜂发育的影响 被引量:14
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作者 石元元 曾志将 +2 位作者 吴小波 颜伟玉 王子龙 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期272-278,共7页
为了研究人工注射DNA甲基化转移酶3(DNA methyltransferase3,Dnmt3)siRNA对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica雌蜂的Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA表达量、dynactin p62基因甲基化水平以及蜜蜂形态指标之间的影响和关系,分别给3组3日龄的... 为了研究人工注射DNA甲基化转移酶3(DNA methyltransferase3,Dnmt3)siRNA对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica雌蜂的Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA表达量、dynactin p62基因甲基化水平以及蜜蜂形态指标之间的影响和关系,分别给3组3日龄的意大利蜜蜂幼虫人工注射50ng Ringer,uth siRNA和Dnmt3 siRNA溶液。在幼虫的发育过程中,测定每组幼虫头部的Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA表达量、dynactin p62基因甲基化水平以及刚羽化雌性蜜蜂的初生重、体长、前翅长、前翅宽、吻长、第3背板长等形态指标。结果表明:人工注射Dnmt3 siRNA不仅可以显著降低意大利蜜蜂幼虫头部Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA表达量和dynactin p62基因整体甲基化水平,同时显著提高了刚羽化雌性蜜蜂的初生重、体长、第3背板长。结果说明Dnmt3的改变可以影响雌性意蜂幼虫的发育。 展开更多
关键词 意大利蜜蜂 蜂王 工蜂 sirna Dnmt3 dynactin P62
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瞬时表达靶向TMV外壳蛋白基因的siRNA能干扰病毒侵染 被引量:22
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作者 赵明敏 安德荣 +2 位作者 黄广华 何祖华 陈江野 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期35-40,共6页
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA导入细胞后,该mRNA发生特异性降解,从而导致该基因表达沉默的现象。小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)作为RNAi途径的重要中介, 已被广泛应用于动、植... RNA干扰(RNA interference,RNAi)是与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA导入细胞后,该mRNA发生特异性降解,从而导致该基因表达沉默的现象。小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)作为RNAi途径的重要中介, 已被广泛应用于动、植物抗病毒治疗研究。本文以烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)外壳蛋白基因为靶位,设计合成表达小干扰RNA的寡核苷酸,亚克隆到植物双元表达载体pBI121中,直接转化根癌农杆菌。通过根癌农杆菌介导的瞬时表达法,研究了同源于TMV外壳蛋白的siRNA对TMV侵染的干扰作用。结果表明,瞬时表达的siRNA能够特异性干扰TMV侵染。含有重组表达载体pBI121/siRNA的根癌农杆菌渗入普通烟植株,在TMV接种后14 d其上部叶片没有表现典型的花叶症状。对这些叶片进行Northern杂交试验也没有检测到TMV病毒的RNA积累或仅有很少量的积累。在枯斑寄主心叶烟上,siRNA的瞬时表达可使TMV侵染后的枯斑数明显减少,甚至不产生枯斑。此外,同源于TMV外壳蛋白的siRNA瞬时表达对非同源的黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)没有抑制作用,表明siRNA的干扰作用具有高度的同源依赖性。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 烟草花叶病毒 外壳蛋白 sirna 干扰
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ChREBP基因siRNA表达质粒构建及对原代培养猪脂肪细胞生脂的影响 被引量:10
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作者 卢建雄 张国华 +4 位作者 李昌辉 陈妍 霍生东 郭鹏辉 蔡勇 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第24期5196-5204,共9页
【目的】构建ChREBP基因siRNA表达质粒,干扰ChREBP在原代培养猪脂肪细胞的表达,研究其在葡萄糖诱导脂肪细胞生脂中的作用。【方法】合成4对靶向ChREBP基因的siRNA寡核苷酸,分别连接于pcDNA6.2-GW/EmGFP载体构建siRNA表达质粒,测序验证后... 【目的】构建ChREBP基因siRNA表达质粒,干扰ChREBP在原代培养猪脂肪细胞的表达,研究其在葡萄糖诱导脂肪细胞生脂中的作用。【方法】合成4对靶向ChREBP基因的siRNA寡核苷酸,分别连接于pcDNA6.2-GW/EmGFP载体构建siRNA表达质粒,测序验证后,采用脂质体介导法转染从3日龄仔猪皮下脂肪组织分离培养的脂肪细胞,荧光定量RT-PCR检测ChREBP基因沉默效率;以葡萄糖浓度为0—20 mmol·L-1的培养液培养转染细胞48 h,测定生脂及生脂基因表达变化。【结果】筛选出了1个转染效果好、ChREBP基因沉默效率达85%的siRNA表达质粒,转染原代培养猪脂肪细胞后,细胞生脂水平及生脂基因ACC1和FAS mRNA表达比阴性对照表达质粒转染细胞和未转染细胞显著降低(P<0.05),且生脂水平不受葡萄糖水平的影响(P>0.05)。【结论】构建的siRNA表达质粒能有效干扰猪脂肪细胞ChREBP表达,葡萄糖通过转录因子ChREBP调控猪脂肪细胞生脂及生脂基因表达。 展开更多
关键词 CHREBP sirna 脂肪细胞 脂肪生成
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高效siRNA设计的研究进展 被引量:21
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作者 许德晖 黄辰 +1 位作者 刘利英 宋土生 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1457-1461,共5页
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是生物界普遍存在的一种抵御外来基因和病毒感染的保守进化机制,其本质是siRNA与靶向mRNA特异结合、并由RISC介导其降解,从而阻止mRNA的翻译,导致基因沉默。因此, RNAi可以作为基因功能研究、基因治疗等... RNA干扰(RNA interference,RNAi)是生物界普遍存在的一种抵御外来基因和病毒感染的保守进化机制,其本质是siRNA与靶向mRNA特异结合、并由RISC介导其降解,从而阻止mRNA的翻译,导致基因沉默。因此, RNAi可以作为基因功能研究、基因治疗等的新工具。但是,随机设计的siRNA之间沉默效应差别很大。如何针对靶基因设计特异、高效的siRNA就成了一个关键的问题。文章对siRNA设计原则的研究进展进行了总结论述。 展开更多
关键词 RNAI sirna 序列设计
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BC047440-siRNA对肝癌HepG2细胞增殖抑制及其分子机制的初步探讨 被引量:10
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作者 刘世呈 李靖 +4 位作者 黄小兵 杨彤翰 梁平 郑璐 赵弘智 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第23期2207-2211,共5页
目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制肝癌相关基因BC047440的表达,观察其受抑制后对细胞增殖能力的影响并初步分析其抑制增殖的分子机制。方法设计针对BC047440基因的siRNA,构建pGenSil-1-BC047440-siRNA真核表达载体... 目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制肝癌相关基因BC047440的表达,观察其受抑制后对细胞增殖能力的影响并初步分析其抑制增殖的分子机制。方法设计针对BC047440基因的siRNA,构建pGenSil-1-BC047440-siRNA真核表达载体。分别用脂质体法将介导siRNA的真核绿色荧光表达载体pGenSil-1-BC047440-siRNA、空载体质粒pGenSil-1转染人肝癌HepG2细胞建立稳定细胞株;随后实验分为3组:转染siRNA表达载体组(PP2)、转染空质粒组(PP1)和未处理的亲本HepG2细胞组(PP0)。采用荧光定量PCR检测BC047440mRNA表达变化;CCK-8分析细胞增殖活性;平板克隆形成实验检测单个细胞的增殖能力;最后选取NF-κB下游增殖相关基因c-myc、bcl-2、cyclin D1,用荧光定量PCR检测其mRNA水平的变化。结果成功转染并获得PP1、PP2组抗性克隆,PP2组与PP0组比较,BC047440mRNA水平明显降低,抑制率约为75%;细胞增殖实验中PP2组细胞增殖能力明显降低,平板克隆形成实验结果显示PP2组克隆形成率为(8.42±0.82)%,明显低于PP1组[(39.31±5.39)%]和PP0组[(40.96±3.21)%](P<0.01)。检测NF-κB下游增殖相关的几个基因时发现PP2组c-myc mRNA表达明显降低,约为PP0组的12/25;其余基因无明显变化。结论干扰BC047440基因表达可以抑制肝癌细胞的增殖,初步揭示BC047440基因可以对c-myc起正向调控作用,从而促进肝癌细胞的增殖,提示抑制BC047440基因可能成为控制人肝癌细胞生长的有效靶点。 展开更多
关键词 BC047440 HEPG2 C-MYC 人肝癌细胞sirna
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siRNA抑制丙型肝炎病毒IRES介导的基因表达 被引量:12
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作者 饶林 詹林盛 +1 位作者 彭剑淳 王全立 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期38-43,共6页
以HCVIRES为靶位 ,应用T7RNA多聚酶体外转录合成了 5条小干扰RNA(siRNA) .脂质体转染法将其导入HCVIRES介导萤光素酶表达的转基因细胞 (HepG2 .970 6 )中 ,通过测定萤光素酶的量 ,评价T7siRNA对HCV介导基因表达的抑制作用 .结果表明 ,... 以HCVIRES为靶位 ,应用T7RNA多聚酶体外转录合成了 5条小干扰RNA(siRNA) .脂质体转染法将其导入HCVIRES介导萤光素酶表达的转基因细胞 (HepG2 .970 6 )中 ,通过测定萤光素酶的量 ,评价T7siRNA对HCV介导基因表达的抑制作用 .结果表明 ,所合成的 5条T7siRNAs ,均能特异性地抑制萤光素酶基因的表达 ,抑制率分别为 94 31%、80 0 1%、78 0 1%、80 33%、85 6 4% ,其中以靶向HCVIRES第二茎环结构的T7siRNA1抑制率最高 ,且对HCV基因的抑制作用有剂量依赖性 ,随T7siRNA1量的增加 ,抑制率逐渐增强 .siRNA抑制HCV基因的作用具有良好的特异性 ,改变其中 1个核苷酸即无显著抑制作用 . 展开更多
关键词 RNA干涉 T7 sirna 萤光素酶 内部核糖体进入位点 丙型肝炎病毒
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KDR为靶的siRNA抑制乳腺癌细胞增殖的体内外研究 被引量:13
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作者 张晓静 葛银林 +1 位作者 侯琳 李泉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期58-61,共4页
目的:采用化学修饰的小干扰RNA(siRNA)在体内外抑制含激酶插入区受体(KDR)基因表达,探讨化学修饰的siRNA介导的RNA干扰(RNA i)技术在乳腺癌基因治疗的可行性和特异性。方法:采用阳离子脂质体L ipofectam ine2000TM作为转染试剂将针对人... 目的:采用化学修饰的小干扰RNA(siRNA)在体内外抑制含激酶插入区受体(KDR)基因表达,探讨化学修饰的siRNA介导的RNA干扰(RNA i)技术在乳腺癌基因治疗的可行性和特异性。方法:采用阳离子脂质体L ipofectam ine2000TM作为转染试剂将针对人KDR基因的siRNA转染人类乳腺细胞株MCF-7,诱导RNA i,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,RT-PCR,Western blot试验等检测KDR基因和蛋白表达及细胞增殖变化。采用阳离子聚合物纳米粒In vivojetPEITM为转染试剂将siRNA直接注射进裸鼠移植瘤,监测肿瘤生长变化,RT-PCR,免疫组化方法等监测KDR基因和蛋白表达变化。结果:靶向KDR基因siRNA转染MCF-7后,细胞增殖被抑制,KDRmRNA和蛋白的表达明显降低;裸鼠体内实验显示siRNA治疗组瘤组织的增长受到明显抑制;RT-PCR,免疫组化结果同时表明治疗组KDR表达下调。各对照组指标无明显变化。结论:化学修饰的siRNA介导的RNAi在体内外均能成功抑制靶基因的表达和MCF-7细胞增殖,是潜在的肿瘤治疗新方法,而KDR亦可作为肿瘤治疗的新靶点。 展开更多
关键词 RNA干扰 sirna MCF-7细胞 血管内皮生长因子受体2 基因治疗
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消岩汤含药血清介导下Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响 被引量:11
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作者 张欣 贾英杰 +1 位作者 杨佩颖 张蕴超 《天津中医药》 CAS 2017年第2期113-116,共4页
[目的]分析消岩汤含药血清介导下Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响,探究其抑瘤机制。[方法]在Invitrogen公司的网上设计系统中设计靶向Survivin基因的siRNA序列,并将其转染A549细胞,应用噻唑蓝(MTT)法检测消岩汤以及... [目的]分析消岩汤含药血清介导下Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响,探究其抑瘤机制。[方法]在Invitrogen公司的网上设计系统中设计靶向Survivin基因的siRNA序列,并将其转染A549细胞,应用噻唑蓝(MTT)法检测消岩汤以及转染组对A549细胞生长抑制的情况,免疫组化法观察A549细胞Survivin蛋白的表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。[结果]MTT法显示消岩汤具有抑制A549细胞生长的作用,其作用具有一定的时间依赖性,转染中药组的抑制率显著高于转染对照组及非转染中药组。经免疫组化法检测,转染对照组对Survivin蛋白表达的抑制率明显高于非转染中药组,但显著低于转染中药组。流式细胞术检测结果显示消岩汤及重组质粒以诱导细胞晚期凋亡为主,转染中药组A549细胞凋亡率显著高于其他各组。[结论]消岩汤可诱导A549细胞的凋亡,联合应用转染靶向Survivin基因的重组质粒可增强其体外诱导A549细胞凋亡的作用。 展开更多
关键词 消岩汤 SURVIVIN sirna A549 细胞增殖 凋亡
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siRNA敲除STAT3基因对结肠癌HCT116细胞侵袭的抑制 被引量:8
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作者 范钰 张尤历 +6 位作者 张宇川 吴莺 魏金文 程兆明 何亚龙 王银环 李华 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2007年第1期46-48,共3页
目的:了解RNA干扰沉默STAT3基因对结肠癌细胞侵袭的可能作用。方法:根据STAT3基因特点,设计合成STAT3小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),并转染人结肠癌细胞系HCT116后,采用RT-PCR检测STAT3mRNA,采用软琼脂集落培养试验检测癌细... 目的:了解RNA干扰沉默STAT3基因对结肠癌细胞侵袭的可能作用。方法:根据STAT3基因特点,设计合成STAT3小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),并转染人结肠癌细胞系HCT116后,采用RT-PCR检测STAT3mRNA,采用软琼脂集落培养试验检测癌细胞锚着不依赖性增殖,采用Boyden小室模型试验检测癌细胞的侵袭能力。结果:STAT3 siRNA可有效抑制结肠癌细胞集落生长和侵袭能力,且与浓度相关。结论:STAT3 siRNA可抑制结肠癌细胞的侵袭。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 STAT3 RNA干扰 sirna 侵袭
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