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氧化型低密度脂蛋白对单核巨噬细胞株U937表达Siglec-1蛋白及分泌细胞因子的影响 被引量:2
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作者 熊怡淞 吴韦霖 +3 位作者 张玲珍 周运恒 韩志君 仲人前 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期33-36,共4页
目的探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的致动脉粥样硬化(AS)作用是否通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1的表达发挥作用。方法制备ox-LDL并用不同浓度刺激人巨噬细胞株U937,48h后收集细胞和培养上清液,分别用流式细胞仪和RT-PCR检测不同浓... 目的探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的致动脉粥样硬化(AS)作用是否通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1的表达发挥作用。方法制备ox-LDL并用不同浓度刺激人巨噬细胞株U937,48h后收集细胞和培养上清液,分别用流式细胞仪和RT-PCR检测不同浓度ox-LDL刺激后Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA的表达水平,并用ELISA试剂盒测定培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的浓度。结果与对照组相比,ox-LDL能刺激U937细胞表面Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA表达升高(P<0.01),培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的表达升高(P<0.01),并呈浓度依赖性。结论ox-LDL的致AS作用可能部分是通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1蛋白表达而活化巨噬细胞,分泌细胞因子和趋化因子诱导更多巨噬细胞和淋巴细胞的活化参与粥样斑块中的炎症反应。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 氧化型低密度脂蛋白 siglec-1 细胞因子类 单核巨噬细胞
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定量RT-PCR测定冠心病患者外周血Siglec-1(CD169)的基因表达水平 被引量:2
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作者 熊怡淞 王皓 +5 位作者 吴炜霖 周运恒 梁艳 杨再兴 荣光华 仲人前 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1307-1310,共4页
目的:建立检测人Siglec-1(sialic acid-binding immunoglobulin-like lectins,唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素1,CD169)mRNA含量的实时荧光定量RT-PCR的方法,并用来测定冠心病患者外周血单个核细胞(PBMCs)中Siglec-1的基因表达水平,探讨... 目的:建立检测人Siglec-1(sialic acid-binding immunoglobulin-like lectins,唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素1,CD169)mRNA含量的实时荧光定量RT-PCR的方法,并用来测定冠心病患者外周血单个核细胞(PBMCs)中Siglec-1的基因表达水平,探讨Siglec-1基因表达水平与冠状动脉粥样硬化发生发展的关系。方法:基于SYBR Green荧光标记技术,建立实时荧光相对定量RT-PCR方法,在ABI PRISM 7000荧光定量PCR仪上测定了57例冠状动脉粥样硬化性心脏病患者和38例健康对照者外周血中Siglec-1 mRNA的含量。生化常规测定所有入选者血脂水平。结果:冠心病组Siglec-1 mR-NA的平均拷贝数显著高于健康对照组,为健康对照组的3.23(1.28~8.11)倍(P<0.01);其中急性心肌梗死组(AMI)、稳定型心绞痛组(SA)和不稳定型心绞痛组(UA)分别为对照组的3.32(1.38~7.97)、2.56(0.88~7.42)、3.35(1.25~8.96)倍,而三组之间差异无统计学意义;冠心病血脂正常组和血脂异常组的Siglec-1 mRNA平均拷贝数无显著差异。结论:成功建立了人Siglec-1基因表达含量的实时荧光定量RT-PCR检测方法;冠心病患者Siglec-1 mRNA的含量显著高于健康对照组,且其含量高低与血脂无关;Siglec-1mRNA含量在冠心病患者外周血单核细胞上表达显著升高,说明冠心病患者外周血单核细胞已经发生巨噬细胞化,单核巨噬细胞介导的免疫炎症反应在冠心病发生发展过程中起重要作用。 展开更多
关键词 冠状动脉硬化 siglec-1 逆转录聚合酶链反应
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Siglec-1在溃疡性结肠炎患者外周血单核细胞中的表达 被引量:1
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作者 陈平 孔梅 +3 位作者 于双 江明万 刘辉 吴泽成 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2016年第7期749-751,共3页
目的分析Siglec-1在溃疡性结肠炎(ulcerative colitic,UC)患者外周血单核细胞中的表达水平,并分析其临床意义。方法收集40例UC活动期患者、30例UC缓解期患者、40名健康体检者的全血,流式细胞术检测各组患者外周血单核细胞中Siglec-1的... 目的分析Siglec-1在溃疡性结肠炎(ulcerative colitic,UC)患者外周血单核细胞中的表达水平,并分析其临床意义。方法收集40例UC活动期患者、30例UC缓解期患者、40名健康体检者的全血,流式细胞术检测各组患者外周血单核细胞中Siglec-1的表达水平。结果 UC活动期患者外周血单核细胞Siglec-1的阳性细胞数明显高于健康对照组和UC缓解期组,差异有显著统计学意义(P<0.01);不同分级(轻度、中度、重度)UC活动期患者外周血单核细胞Siglec-1阳性细胞数差异也有统计学意义(P<0.05)。结论 Siglec-1可能与UC的发生、发展有关,有望成为评价UC患者病情活动性及严重程度的指标之一。 展开更多
关键词 溃疡性结肠炎 siglec-1 流式细胞术 外周血单核细胞
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实时定量PCR检测原发性胆汁性肝硬化单核细胞中Siglec-1 mRNA的表达 被引量:2
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作者 周晔 蒋廷旺 +5 位作者 谷明莉 陈燕 奚伟强 姚定康 邓安梅 仲人前 《中国实验诊断学》 北大核心 2009年第9期1190-1192,共3页
目的检测Siglec-1(sialic acid-binding immunoglobulin-like lectins,唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素,CD169)在原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者外周血单核细胞上的mRNA表达水平,并探讨其在原发性胆汁性肝硬化... 目的检测Siglec-1(sialic acid-binding immunoglobulin-like lectins,唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素,CD169)在原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者外周血单核细胞上的mRNA表达水平,并探讨其在原发性胆汁性肝硬化发生发展中的作用。方法实时荧光相对定量PCR方法检测30例原发性胆汁性肝硬化患者及30例健康对照者3、0例肝炎后肝硬化对照者外周血单核细胞中Siglec-1 mRNA的含量;生化常规测定所有入选者血清GGT、ALP指标水平。结果原发性胆汁性肝硬化组Siglec-1 mRNA的相对表达量为健康对照组的3.42倍,差异具有统计学意义(P<0.01)。PBC患者Siglec-1 mRNA增高与GGT(r=0.482,P<0.01)和ALP(r=0.365,P<0.05)密切相关。结论原发性胆汁性肝硬化患者单核细胞中mRNA含量显著增加,说明原发性胆汁性肝硬化患者外周血单核细胞已经发生巨噬细胞化,单核巨噬细胞介导的免疫炎症反应在原发性胆汁性肝硬化发生发展过程中起重要作用。 展开更多
关键词 原发性胆汁性肝硬化 siglec-1
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原发性胆汁性肝硬化患者Siglec-1蛋白的表达及其临床意义 被引量:1
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作者 周晔 奚伟强 +4 位作者 蒋廷旺 谷明莉 陈燕 邓安梅 仲人前 《临床军医杂志》 CAS 2009年第5期748-750,共3页
目的检测Siglec-1(CD169)在原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单核细胞上的蛋白表达,并探讨其与原发性胆汁性肝硬化发生发展的作用及临床意义。方法流式细胞术检测35例原发性胆汁性肝硬化患者及35例健康对照者、35例肝炎后肝硬化对照... 目的检测Siglec-1(CD169)在原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单核细胞上的蛋白表达,并探讨其与原发性胆汁性肝硬化发生发展的作用及临床意义。方法流式细胞术检测35例原发性胆汁性肝硬化患者及35例健康对照者、35例肝炎后肝硬化对照者外周血CD14CD169双阳性细胞的表达率;生化常规测定所有入选者血清生化指标水平。结果流式细胞术检测结果显示:原发性胆汁性肝硬化组外周血CD14CD169双阳性率为(13.0±2.2)%,显著高于健康对照组(1.0±0.2)%,及肝炎后肝硬化对照组(4.1±0.4)%,差异具有统计学意义(P<0.01)。并且Siglec-1表达与GGT(r=0.44,P<0.01)和ALP水平(r=0.33,P<0.05)密切相关。结论原发性胆汁性肝硬化患者单核细胞表面siglec-1蛋白表达显著增高,说明原发性胆汁性肝硬化患者外周血单核细胞已经发生巨噬细胞化,单核巨噬细胞介导的免疫炎症反应在原发性胆汁性肝硬化发生发展过程中起重要作用。 展开更多
关键词 原发性胆汁性肝硬化 siglec-1 流式细胞术
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Siglec-1与原发性胆汁性肝硬化的相关性研究
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作者 周晔 奚伟强 +4 位作者 蒋廷旺 陈燕 姚定康 邓安梅 仲人前 《现代检验医学杂志》 CAS 2009年第3期20-24,共5页
目的检测Siglee-1(sialic acid—binding immunoglobulin—like lectins,唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素,CD169)在原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者外周血单核细胞上的蛋白及mRNA表达水平,并探讨其在原... 目的检测Siglee-1(sialic acid—binding immunoglobulin—like lectins,唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素,CD169)在原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者外周血单核细胞上的蛋白及mRNA表达水平,并探讨其在原发性胆汁性肝硬化发生发展中的作用。方法流式细胞术检测45例PBC患者及36例健康对照者、40例肝炎后肝硬化对照者外周血CD14,CD169双阳性细胞的表达率;实时荧光相对定量RT—PCR方法检测入选对象单核细胞中Siglec—1mRNA的含量;生化常规测定所有入选者血清生化指标水平。结果流式细胞术检测结果显示:PBC组单核细胞cD14,CD169双阳性率为13.0%±2.5%,显著高于健康对照组(1.0%±0.2%,P〈0.01)及肝炎后肝硬化对照组(4.1%±0.5%,P〈0.01)。PBC组Siglec—1mRNA的相对表达量为健康对照组的3.42倍,差异具有统计学意义(P〈0.01)。结论PBC患者单核细胞表面siglec-1蛋白表达显著增高,mRNA含量显著增加,说明PBC患者外周血单核细胞已经发生巨噬细胞化,单核巨噬细胞介导的免疫炎症反应在PBC发生发展过程中起重要作用。 展开更多
关键词 原发性胆汁性肝硬化 siglec-1 相关性 流式细胞术 实时荧光定量PCR
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猪 Siglec-10基因的克隆与生物信息学分析
7
作者 张毅 张晏 +2 位作者 王晓杜 方维焕 温贵兰 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第11期14-19,共6页
为了研究猪Siglec-10(pSiglec-10)的分子生物学特征,利用Ensemble网站提供的预测序列(ENSSSCT00000032460)设计一对特异性引物,采用RT-PCR技术,克隆pSiglec-10分子的全长CDS区,经过测序比较鉴定正确后,对该分子的基本特征进行分析;构建... 为了研究猪Siglec-10(pSiglec-10)的分子生物学特征,利用Ensemble网站提供的预测序列(ENSSSCT00000032460)设计一对特异性引物,采用RT-PCR技术,克隆pSiglec-10分子的全长CDS区,经过测序比较鉴定正确后,对该分子的基本特征进行分析;构建截短pSiglec-10的原核表达载体,另将该分子的CDS区全长克隆至真核表达载体pcDNA3.1-3′FLAG,将重组质粒转染至PK-15和Marc-145细胞中分析其表达定位特征。结果克隆的pSiglec-10分子的全长CDS为2 127bp,编码709个氨基酸;pSiglec-10基因序列与猴的同源性最高,同源性达73.6%,与鼠的同源性为66.9%;与人的同源性为62.5%,氨基酸序列的同源性分别为58.9%、69.4%和65.3%;pSiglec-10C端的ITIM区域和磷酸化位点高度保守;pSiglec-10分子具有较好的抗原特性和亲水性;该分子主要表达定位在细胞浆中,在Marc-145细胞中呈不连续的点状分布于细胞浆,细胞核周围荧光强度较强。pSiglec-10分子全长CDS区的克隆和分析将对该分子的功能研究提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 siglec-1 0 分子克隆 真核表达 生物信息学分析
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唾液酸黏附素Siglec-1在疾病中作用的研究进展 被引量:1
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作者 李克雷 李想 +1 位作者 丛喆 薛婧 《中国比较医学杂志》 北大核心 2017年第12期109-114,共6页
唾液酸黏附素(Siglec-1或CD169)是表达于组织的巨噬细胞上免疫球蛋白超家族类黏附分子。在炎症反应中,Siglec-1可调节MIP-1α/β、MCP-1、MIP-2等细胞因子的分泌,促进炎症反应的发生;在病毒感染过程中,Siglec-1可通过介导病原体与巨噬... 唾液酸黏附素(Siglec-1或CD169)是表达于组织的巨噬细胞上免疫球蛋白超家族类黏附分子。在炎症反应中,Siglec-1可调节MIP-1α/β、MCP-1、MIP-2等细胞因子的分泌,促进炎症反应的发生;在病毒感染过程中,Siglec-1可通过介导病原体与巨噬细胞的的结合,促进病毒感染和吞噬;在对免疫的调节过程中,Siglec-1既可也以抑制IFN-α的过量表达,抑制固有免疫,也可抑制DC细胞活性,降低适应性免疫。本文主要阐述了Siglec-1在病原体感染、炎症反应和免疫调节中最新研究进展。 展开更多
关键词 siglec-1 炎症反应 免疫调节 HIV
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CFSE标记结合流式细胞术检测单核细胞Siglec-1刺激CD4^+/CD8^+T细胞增殖
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作者 熊怡淞 俞娟 +2 位作者 孙懿 李畅 仲人前 《国际检验医学杂志》 CAS 2011年第15期1670-1672,共3页
目的建立CFSE标记结合流式细胞术检测T淋巴细胞增殖的方法,并探讨其在研究单核细胞唾液酸黏附素(Si-glec-1)对CD4+/CD8+T细胞增殖中的应用。方法免疫磁珠分离冠状动脉综合征(ACS)患者和健康对照者外周血CD14+单核细胞,与经CFSE标记的第... 目的建立CFSE标记结合流式细胞术检测T淋巴细胞增殖的方法,并探讨其在研究单核细胞唾液酸黏附素(Si-glec-1)对CD4+/CD8+T细胞增殖中的应用。方法免疫磁珠分离冠状动脉综合征(ACS)患者和健康对照者外周血CD14+单核细胞,与经CFSE标记的第三方健康献血者CD4+/CD8+T细胞共培养5 d,流式细胞术检测T淋巴细胞增殖情况。结果 ACS患者CD14+单核细胞具有比健康人单核细胞更强的刺激CD4+/CD8+T淋巴细胞增殖能力;当用干扰素-α(INF-α)刺激增强正常单核细胞Siglec-1表达后,其刺激T细胞增殖能力增强;用单抗阻断单核细胞Siglec-1后,其刺激T细胞增殖能力减弱。结论 ACS患者增强的CD4+/CD8+T淋巴细胞增殖能力部分是由于激活的单核细胞高表达Siglec-1引起。 展开更多
关键词 流式细胞术 细胞增殖 Siglec—1
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SIGLEC-1与1型糖尿病自身免疫机制:新兴研究视角
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作者 郭梦琪 王颜刚 李树法 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期570-572,共3页
Diabetologia的最新研究发现, 唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素1(SIGLEC-1)阳性单核细胞在1型糖尿病早期发病中扮演关键角色。这些细胞主要通过干扰素信号通路, 而非传统抗原呈递方式, 激活免疫效应细胞, 进而引发胰岛炎症和破坏。这一发... Diabetologia的最新研究发现, 唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素1(SIGLEC-1)阳性单核细胞在1型糖尿病早期发病中扮演关键角色。这些细胞主要通过干扰素信号通路, 而非传统抗原呈递方式, 激活免疫效应细胞, 进而引发胰岛炎症和破坏。这一发现为1型糖尿病的早期诊断与靶向治疗开辟了新的途径。 展开更多
关键词 siglec-1 单核细胞 糖尿病 1 自身免疫反应 干扰素信号通路
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重组人Siglec-1蛋白的制备及基于超滤亲和-液质联用技术天然配体的筛选
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作者 曹娟 杨忠杰 +2 位作者 郑奕 杨雷 李森森 《药物评价研究》 CAS 北大核心 2024年第7期1556-1562,共7页
目的构建唾液酸免疫球蛋白凝集素1(Siglec-1)原核表达载体,表达纯化Siglec-1重组蛋白,构建超滤亲和-液质联用技术(UF-LC-MS)筛选Siglec-1蛋白天然配体。方法利用DNA重组技术构建Siglec-1重组蛋白原核表达载体,转化到BL21(DE3)感受态细... 目的构建唾液酸免疫球蛋白凝集素1(Siglec-1)原核表达载体,表达纯化Siglec-1重组蛋白,构建超滤亲和-液质联用技术(UF-LC-MS)筛选Siglec-1蛋白天然配体。方法利用DNA重组技术构建Siglec-1重组蛋白原核表达载体,转化到BL21(DE3)感受态细胞中表达Siglec-1重组蛋白,通过Ni柱亲和色谱柱进行蛋白纯化,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分析Siglec-1重组蛋白纯度。建立UF-LC-MS技术研究金银花、甘草、迷迭香、菊苣中6个主要组分绿原酸、迷迭香酸、阿魏酸、甘草酸、甘草次酸、菊苣酸对Siglec-1蛋白的亲和力,通过比较样品组和蛋白变性组超滤液中待测物的峰面积,计算各待测物特异结合率。结果经双酶切及测序鉴定证明,重组表达质粒pET-22b-Siglec-1-His构建正确;纯化的人Siglec-1重组蛋白质量分数达90%以上;建立了UF-LC-MS筛选体系,筛选出甘草次酸可与Siglec-1蛋白特异性结合。结论成功表达了高纯度、高产量的人Siglec-1重组蛋白,筛选出甘草次酸可与Siglec-1蛋白特异性结合。 展开更多
关键词 唾液酸免疫球蛋白凝集素1 重组蛋白 超滤亲和-液质联用 甘草次酸 天然配体
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氧化型低密度脂蛋白对RAW264.7细胞Siglec-1表达及分泌细胞因子的影响 被引量:2
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作者 熊怡淞 朱烨 +3 位作者 陆慧琦 李畅 韩志君 仲人前 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期51-55,共5页
目的通过氧化型低密度脂蛋白(oxidized low—density lipoprotein,ox-LDL)活化巨噬细胞系对Siglec-1(sialic acid—binding immunoglobulin-like lectin 1,唾液酸黏附素)表达及细胞因子分泌的影响探讨对动脉粥样硬化(atheroscler... 目的通过氧化型低密度脂蛋白(oxidized low—density lipoprotein,ox-LDL)活化巨噬细胞系对Siglec-1(sialic acid—binding immunoglobulin-like lectin 1,唾液酸黏附素)表达及细胞因子分泌的影响探讨对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发病的可能作用。方法制备ox—LDL,并用不同浓度ox-LDL刺激小鼠巨噬细胞株RAW264.7,48h后收集细胞和上清,分别用流式细胞仪和RT—PCR检测不同浓度ox-LDL刺激后细胞表面Siglec-1蛋白和基因表达水平,并测定培养上清液中巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和IL-8的浓度。结果与对照组相比,ox—LDL能刺激RAW264.7细胞表面Siglec-1蛋白和mRNA表达升高(P〈0.01),培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的表达升高(P〈0.01),并呈浓度依赖性。结论ox—LDL可呈剂量依赖性刺激RAW264.7巨噬细胞诱导Siglec-1表达及分泌炎性细胞因子增加,在动脉粥样硬化的发生发展中可能起一定作用。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 氧化型低密度脂蛋白 siglec-1 RAW264.7
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Siglec-1小干扰慢病毒载体的构建和干扰效率验证
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作者 熊怡淞 李畅 +1 位作者 孙懿 仲人前 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期730-733,共4页
目的构建小干扰唾液酸黏附素(sialic acid—binding immunoglobulin—like lectin1,Siglec-1)的慢病毒载体,并体外筛选出具有干扰效果的病毒载体。方法利用软件设计3条Siglec-1siRNA片段,并克隆到慢病毒pGCSIL—GFP质粒载体,再与p... 目的构建小干扰唾液酸黏附素(sialic acid—binding immunoglobulin—like lectin1,Siglec-1)的慢病毒载体,并体外筛选出具有干扰效果的病毒载体。方法利用软件设计3条Siglec-1siRNA片段,并克隆到慢病毒pGCSIL—GFP质粒载体,再与pHelper1.0载体和pHelper2.0载体共转染293T细胞,培养48h后,收集并浓缩富含慢病毒颗粒的细胞上清液。逐孔稀释法测定慢病毒滴度并转导原代培养的骨髓巨噬细胞(BMM),流式细胞术和实时荧光定量PCR筛选具有干扰效果的病毒载体。结果成功构建3个vshRNA质粒载体和一个阴性对照质粒载体,并经测序验证序列正确。包装的慢病毒滴度介于1×10^8-1×10^9TU/ml之间,适合体外转导及体内试验。体外转导BMM筛选出Lv-1能靶向抑制Siglec-1表达。结论成功构建并筛选出具有体外干扰效果的小干扰Siglec-1慢病毒载体,为体内应用该病毒载体进行基因敲除实验奠定了基础。 展开更多
关键词 siglec-1 小干扰RNA 慢病毒
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自身免疫甲状腺炎患者外周血单个核细胞高表达Siglec-1并与炎症反应指标相关 被引量:7
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作者 吴莹 郭庆玲 +8 位作者 龚珣 孙威 张文谦 赵桐 杨阳 范晨玲 李咏泽 滕卫平 单忠艳 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期99-104,共6页
目的观察唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素1(Siglec-1)在自身免疫甲状腺炎(autoimmune thyroiditis, AIT)患者外周血单个核细胞(PBMC)的表达水平,分析其与AIT炎症反应指标的相关性;并进一步在培养的PBMC原代细胞中探讨Siglec-1激活对调节... 目的观察唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素1(Siglec-1)在自身免疫甲状腺炎(autoimmune thyroiditis, AIT)患者外周血单个核细胞(PBMC)的表达水平,分析其与AIT炎症反应指标的相关性;并进一步在培养的PBMC原代细胞中探讨Siglec-1激活对调节辅助性T细胞分化、促进炎症反应的作用。方法收集30例甲状腺功能正常的AIT患者、30例年龄及性别匹配的健康对照者的外周全血和血清,ELISA检测血清可溶性Siglec-1(sSiglec-1)水平,RT-PCR、WB检测各组PBMC中Siglec-1的水平,流式细胞术检测各组CD14+单核细胞中Siglec-1水平及Th1细胞比例(%)、Th17细胞比例(%);体外培养AIT患者和正常对照组PBMC,单独应用脂多糖(LPS)或与不同浓度的碘化钠共同刺激72 h,流式细胞术检测各组CD14+单核细胞中Siglec-1水平及Th1细胞比例(%)、Th17细胞比例(%)变化。结果AIT患者血清sSiglec-1、PBMC中Siglec-1 mRNA及蛋白表达水平均显著高于正常对照组(P<0.01);CD14+单核细胞上Siglec-1水平显著高于正常对照组(P<0.01);Th1细胞比例(%)、Th17细胞比例(%)显著高于正常对照组(P<0.01)。原代培养PBMC 72 h,5×10^-5 mmol/L至1×10^-2 mmol/L浓度的碘化钠上调正常人及AIT患者PBMC中Siglec-1表达(P<0.01)。AIT患者Th1细胞比例(%)和Th17细胞比例(%)升高(P<0.01),并呈浓度依赖性,正常对照中无显著性差异(P>0.05)。结论Siglec-1在PBMC和单核细胞中的表达有可能作为AIT的生物标记;碘可能通过激活AIT患者Siglec-1并影响Th1细胞和Th17细胞分化来调节AIT的免疫炎症反应。 展开更多
关键词 自身免疫甲状腺炎 siglec-1 外周血单个核细胞
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Siglec-1在巨噬细胞吞噬脂质及分泌趋化因子中的作用 被引量:2
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作者 熊怡淞 李畅 +1 位作者 孙懿 仲人前 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期691-696,共6页
目的 研究ox-LDL刺激对体外培养小鼠巨噬细胞株RA-W264.7和原代小鼠骨髓巨噬细胞Siglec-1表达的影响,及M-CSF促进巨噬细胞Siglec-1高表达或小干扰RNA(si-RNP,)靶向抑制Siglec-1表达特点,并观察巨噬细胞吞噬脂质和分泌趋化因子的变化,... 目的 研究ox-LDL刺激对体外培养小鼠巨噬细胞株RA-W264.7和原代小鼠骨髓巨噬细胞Siglec-1表达的影响,及M-CSF促进巨噬细胞Siglec-1高表达或小干扰RNA(si-RNP,)靶向抑制Siglec-1表达特点,并观察巨噬细胞吞噬脂质和分泌趋化因子的变化,以探讨Siglec-1在巨噬细胞参与AS中的作用.方法 用铜氧化法制备ox-LDL,根据预实验结果,选取ox-LDL 100μg/ml作为刺激物,在含巨噬细胞溶液中加入不同类型si-RNA或不同浓度M-CSF后,分为6组[正常对照组(仅加巨噬细胞)、ox-LDL 100μg/ml组、ox-LDL 100 μg/ml+Si-RNA 25092 ng/ml组、ox-LDL 100μg/ml+si-RNA 36182 ng/ml组、ox-LDL 100 μg/ml+M-CSF 5 ng/ml组和ox-LDL 100μg/ml+M-CSF 10 ng/ml 组].分别用si-RNA转染巨噬细胞抑制Siglec-1表达,M-CSF刺激促进巨噬细胞Siglec-1表达,并用荧光定量PCR检测Siglec-1抑制或表达增强效果.再用ox-LDL刺激48 h收集细胞和培养上清液,ELISA测定培养上清液中MIP-1 alpha、MCP-1和IL-8的浓度(每组3复孔),以观察巨噬细胞活化情况;油红0染色观察Siglec-1抑制或表达增强后对巨噬细胞吞噬脂质颗粒的影响(每组3复孔).结果 巨噬细胞经si-RNA转染后,用荧光显微镜观察,si-RNA能有效转染巨噬细胞,转染效率约90%;荧光定量PCR检测si-RNA的结果显示,当si-RNA 2509和si-RNA,3618在最佳转染浓度(40 pmol/L)时,对Siglec-1抑制率分别为0.54±0.11和0.52±0.16;比正常对照组(1.00±0.24)高(t值分别为5.227、4.992,P均〈0.01).M-CSF 10.g/ml刺激48 h后Siglec-1 mRNA表达增加约4倍(4.16±1.25比1.00±0.24,t=7.448,P〈0.01).si-RNA 3618干扰Siglec-1后,MCP-1、MIP-1alpha和NIP-23个巨噬细胞趋化因子的分泌分别为(359.28±47.80)pg/ml、(33.76±14.28)ng/ml、(7.87±1.55)ng/ml,比单纯加ox-LDL 100μg/ml组明显降低[分别为(577.89±35.95)pg/ml、(69.17±11.82)ng/ml、(12.28±1.19)ng/ml,P分别〈0.001、0.05、0.01];而加M-CSF 10 ng/ml组可明显促进巨噬细胞趋化因子分泌[分别为(672.89±43.80)pg/ml、(101.31±24.17)ng/ml、(14.81±0.54)ng/ml],比单纯加ox-LDL 100μg/ml组明显升高(P均〈0.05).同时,单纯加ox-LDL100μg/ml组可见部分细胞吞噬ox-LDL,胞内出现红色颗粒,巨噬细胞转变为泡沫细胞,M-CSF10 ng/ml和5 ng/ml组可见大量红色脂肪颗粒充满巨噬细胞胞浆,导致大量泡沫细胞形成,而si-RNA 2509和Si-RNA3618组巨噬细胞内红色脂肪颗粒比单纯加ox-LDL 100μg/ml组少,且泡沫细胞形成少.结论 Siglec-1有可能作为潜在脂质吞噬受体,参与巨噬细胞吞噬脂质演变成泡沫细胞,并激活巨噬细胞,分泌MIP-1 alpha、MCP-1和IL-8等趋化因子,诱导更多巨噬细胞和淋巴细胞的活化,从而参与粥样斑块中的炎症反应.靶向抑制Siglec-1可降低巨噬细胞脂质吞噬和分泌趋化因子能力,也有可能成为潜在治疗或延缓AS发展的新靶点. 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 氧化型低密度脂蛋白 唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素-1 巨噬细胞 吞噬 趋化因子
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缺氧下调血小板表面Siglec-9聚糖配体导致血小板功能异常活化 被引量:2
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作者 摄渊婷 曾东风 +2 位作者 刘红梅 吴妮婷 贾乙 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期541-548,共8页
目的探讨血小板表面Siglec-9聚糖配体表达水平在缺氧条件下的变化及其对血小板活化功能的影响。方法鉴定血小板表面表达的Siglec-9/E聚糖配体,并加入唾液酸酶处理血小板,分为对照组和唾液酸酶组;对24只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠和血小板... 目的探讨血小板表面Siglec-9聚糖配体表达水平在缺氧条件下的变化及其对血小板活化功能的影响。方法鉴定血小板表面表达的Siglec-9/E聚糖配体,并加入唾液酸酶处理血小板,分为对照组和唾液酸酶组;对24只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠和血小板进行缺氧处理,分为对照3 d组、缺氧3 d组、对照7 d组和缺氧7 d组(n=6);将健康志愿者全血分离提取血小板放置于缺氧箱,分为对照组、缺氧48 h组、唾液酸神经节甘脂(Ganglioside GT1b,GT1b)组和奥司他韦组(n=3)。采用流式细胞术检测血小板上Siglec-9/E配体、神经氨酸酶1(Neuraminidase-1)等表达,以及二磷酸腺苷(ADP)、胶原和凝血酶刺激后血小板活化标记物CD62p的表达水平;利用髓系细胞条件性6只6~8周龄雄性Siglec-E基因敲除小鼠(Lyz2-cre:Siglec-E^(flox/flox))血小板验证Siglec-E对血小板活化的抑制作用。结果相对分子质量约为130×10^(3)的Siglec-9/E配体在血小板表面广泛表达且具有唾液酸末端的聚糖结构;与对照7 d组相比,缺氧7 d组小鼠外周血血小板上该配体表达显著降低18.03%(P<0.05),CD62p表达在ADP、胶原和凝血酶刺激下显著增高(P<0.01),缺氧48 h组培养的血小板上该聚糖配体出现了相同改变(P<0.01);与野生型比较,敲基因小鼠血小板在ADP、胶原和凝血酶刺激下CD62p水平显著增高(P<0.01);Siglec-9/E特异性配体GT1b处理能够逆转缺氧导致的血小板异常活化(P<0.05);神经氨酸酶抑制剂能够阻断缺氧导致的Siglec-9配体表达降低(P<0.05)。结论缺氧激活NEU1降低Siglec-9/E聚糖配体表达,减弱了Siglec-9/E途径抑制血小板活化的能力,导致血小板功能异常活化。 展开更多
关键词 缺氧 血小板 siglec-9 聚糖配体 神经氨酸酶-1
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人源化抗Siglec-9抗体Fab片段的制备及鉴定 被引量:1
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作者 褚萨萨 尤娜 +3 位作者 张馨 杨志国 朱进 汪茂荣 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期877-881,共5页
目的:构建人源化抗Siglec-9抗体Fab段原核表达质粒,表达、纯化此抗体以及特性分析,并初步探讨此抗体的生物学功能。方法:利用聚合酶链式反应(PCR)分别获得抗体轻链和重链的可变区及恒定区,经重叠延伸PCR连接,酶切后与原核表达载体p ETDU... 目的:构建人源化抗Siglec-9抗体Fab段原核表达质粒,表达、纯化此抗体以及特性分析,并初步探讨此抗体的生物学功能。方法:利用聚合酶链式反应(PCR)分别获得抗体轻链和重链的可变区及恒定区,经重叠延伸PCR连接,酶切后与原核表达载体p ETDUET-1重组,转入表达感受态Escherichia coli BL21中,通过蛋白纯化系统AKTA和His-trap Lambda Fab纯化。使用SDS-PAGE、ELISA以及Western blot鉴定和分析。采用实时荧光定量PCR初步检测抗Siglec-9抗体Fab段对炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8的mRNA表达量的影响。结果:成功获得抗体轻链和重链,构建人源化抗Siglec-9抗体Fab段原核表达系统,经SDS-PAGE、Western blot、ELISA检测证实抗Siglec-9抗体Fab段与Siglec-9抗原特异性结合。抗Siglec-9抗体Fab段可抑制炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8的mRNA表达量。结论:人源化抗Siglec-9抗体Fab段进行了原核系统表达、纯化和鉴定,并初步验证可抑制炎性细胞因子的mRNA表达量,为进一步研究该抗体的生物学特性及应用奠定基础。 展开更多
关键词 siglec-9 FAB片段 siglec-9抗体 THP-1细胞 炎性细胞因子
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唾液酸黏附素在相关疾病中的表达及意义 被引量:1
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作者 仲人前 熊怡淞 《诊断学理论与实践》 2012年第4期332-335,共4页
唾液酸黏附素(Siglec-1或称CD169)是Siglecs家族的成员之一,属于免疫球蛋白超家族类黏附分子,其主要表达于组织的巨噬细胞上,是巨噬细胞激活的重要标志。近年来,不断有研究表明Siglec-1可表达在激活的外周血单核细胞上,如在系统性红... 唾液酸黏附素(Siglec-1或称CD169)是Siglecs家族的成员之一,属于免疫球蛋白超家族类黏附分子,其主要表达于组织的巨噬细胞上,是巨噬细胞激活的重要标志。近年来,不断有研究表明Siglec-1可表达在激活的外周血单核细胞上,如在系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)、冠心病、系统性硬化(SSc)、人类免疫缺陷病毒(HIV)感染等疾病患者的外周血中其表达均增高.基参与了激活T淋巴细胞等过程.并可作为反映疾病严重程度和活动度的指标,并可用于病情评估和治疗监测。 展开更多
关键词 siglec-1 自身免疫性疾病 炎症 检测
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