抑制STAT3活化对GD2阳性乳腺癌干细胞自我更新能力的影响

目的:探讨选择性STAT3抑制剂Stattic对GD2^+乳腺癌干细胞自我更新能力的影响。方法:运用流式细胞仪从乳腺癌细胞系MDA-MB-231中分选GD2^+乳腺癌干细胞;采用CCK-8、乳腺球形成实验鉴定GD2^+乳腺癌干细胞的增殖、自我更新能力;Western-blot法检测GD2^+/GD2^-乳腺癌细胞中STAT3、pSTAT3蛋白表达;通过Stattic抑制实验,研究Stattic选择性抑制STAT3对GD2^+乳腺癌干细胞自我更新能力的影响作用。结果:接种1 000个细胞,GD2^+细胞乳腺球形成数目为(22.38±3.44)个,GD2^-细胞为(7.14±1.14)个,GD2^+细胞形成的乳腺球数目显著大于GD2^-细胞的乳腺球数目(P<0.05);GD2^+细胞形成乳腺球的大小为(148.47±41.34)μm,GD2^-细胞为(57.10±13.58)μm,2组比较差异有统计学意义(P<0.05);从第2天开始,GD2+乳腺癌干细胞增殖速度明显低于GD2^-细胞(P<0.05);p STAT3蛋白在GD2+乳腺癌细胞表达显著高于GD2^-乳腺癌细胞(P<0.05),但STAT3表达2组比较差异无统计学意义(P>0.05);选择性STAT3抑制剂Stattic干预GD2^+乳腺癌干细胞,其自我更新能力、增殖能力均显著降低(P<0.05)。结论:Stattic选择性抑制STAT3可以抑制GD2^+乳腺癌干细胞的自我更新能力。

STAT3正向调控正畸牙移动速率与牙槽骨骨量

目的探讨信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)在牙移动中的作用,为改善正畸牙槽骨塑建与重建提供证据。方法体内实验选取8周龄雄性大鼠建立正畸牙移动模型,分为对照组(牙移动)、实验组(牙移动加STAT3抑制剂stattic局部注射),于牙移动的第7天、第14天收集实验区域牙槽骨标本进行micro-CT扫描,评估骨体积分数(bone volume/tissue volume,BV/TV)、骨小梁数目(trabecular number,Tb.N)、骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)、骨小梁分离度(trabecular separation,Tb.Sp)、骨密度(bone mineral density,BMD),测量牙移动量。体外实验选取小鼠成骨前体细胞MC3T3-e1和小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7于Transwell^■培养板共培养3d,分为对照组(空白)和实验组(加入STAT3抑制剂stattic);以碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测成骨分化;抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色检测破骨分化;qRT-PCR检测成骨细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)mRNA表达。结果实验组牙槽骨骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨密度(BMD)在第14天时较对照组明显降低,Tb.Sp在第14天时明显增高;以上指标第7天时的2组间差异无统计学意义。与对照组相比,实验组牙移动量在第7天时明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);第14天时2组牙移动量差异无统计学意义(P>0.05)。体外实验ALP染色和TRAP染色显示,抑制剂同时抑制成骨和破骨分化;qRT-PCR结果显示,抑制剂抑制成骨前体细胞RANKL、OPG mRNA表达,升高RANKL/OPG mRNA比值。结论抑制STAT3的激活可导致成骨、破骨活动同时被抑制,使正畸牙移动速率减慢、牙槽骨骨质疏松。STAT3可能在调控正畸牙槽骨塑建与重建中发挥重要作用。

Stat3抑制剂Stattic抑制人舌鳞癌细胞增殖的机制研究

目的:观察Stat3小分子抑制剂Stattic对人舌鳞癌细胞的增殖抑制作用。方法:用不同浓度Stattic处理人舌鳞癌细胞SCC-4与SCC-25,采用CCK-8试剂盒检测Stattic对两株细胞增殖的影响。采用Western Blot方法检测Stat3 Ser727,Stat3 Tyr705磷酸化水平以及Rictor蛋白表达水平;凋亡调控分子Bcl-2,Mcl-1,Bax,Survivin表达水平。结果:Stattic呈浓度依赖性抑制人舌鳞癌细胞的增殖(P<0.05),经Stattic干预的人舌鳞癌细胞中Stat3 Ser727、Stat3 Tyr705磷酸化水平降低,Rictor表达降低。Stattic诱导人舌鳞癌细胞Caspase3和PARP剪切体表达上调,诱导抗凋亡蛋白Survivin表达降低,而抗凋亡蛋白Bcl-2,Mcl-1表达水平无明显变化,促凋亡蛋白Bax表达水平无明显变化。结论:Stattic对人舌鳞癌细胞增殖的抑制作用,可能与降低Stat3 Ser727和Stat3 Tyr705磷酸化水平、降低Rictor及Survivin蛋白表达有关。

信号转导与转录因子3信号通路对类风湿关节炎患者外周血调节性T细胞功能的影响以及调控机制

目的研究信号转导与转录因子3(STAT3)信号通路对RA患者外周血调节性T细胞功能的影响,探讨其与功能异常相关的调控机制。方法选择RA患者60例和健康对照(健康志愿者)组60名,采集受试者外周肝素抗凝静脉血。采用流式细胞仪检测外周血中调节性T细胞的比例,用体外淋巴细胞混合培养方法检测RA患者和健康人外周血中调节性T细胞的增殖活性及对效应性T细胞(Tresp)的抑制功能,用流式细胞仪及qRT-PCR检测调节性T细胞中磷酸化STAT3蛋白及分泌促炎因子IFN-γ、TNF-α、IL-17A的水平。再用STAT3通路抑制剂Stattic V处理RA患者调节性T细胞,观察其增殖及抑制功能的恢复及分泌促炎因子的变化。组间比较采用方差分析,两两比较采用Dunnett′s检验。结果RA患者组外周血调节性T细胞数量(6.51±0.24)%与健康对照组(2.23±0.18)%比较差异有统计学意义(t=4.22,P<0.05);RA组患者外周血调节性T细胞增殖活性及对Tresp细胞的抑制功能明显降低(t分别为4.23和4.35,均P<0.05),磷酸化STAT3表达水平显著升高(t=3.84,P<0.05),分泌促炎因子IFN-γ、TNF-α、IL-17A的水平升高(t分别为3.61、2.51和2.69,均P<0.05)。经50 μg/L Stattic V作用后,RA患者调节性T细胞对Tresp抑制率为(61±5)%,未处理组为(28±10)%,2组差异有统计学意义(P<0.05);50 μg/L StatticV作用后,促炎因子IFN-γ、TNF-α、IL-17A mRNA表达量(2-ΔΔCt)分别为(1.65±0.88、0.85±0.71、0.57±0.14),均显著低于未处理组分别为(23.32±6.71、4.85±1.53、3.10±0.62),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论RA患者调节性T细胞对Tresp细胞的负向调控功能降低,其机制与STAT3信号通路异常活化有关,抑制STAT3通路的活化有可能一定程度地恢复调节性T细胞功能。