孕鼠叶酸缺乏对子代心脏叶酸结合蛋白1基因及WNT信号转导途径的影响

目的探讨孕鼠叶酸缺乏(FD)对子代心脏发育过程中叶酸结合蛋白1(Folbp1)基因表达及WNT信号转导途径的影响。方法成熟雌性SD大鼠36只随机分为实验组和对照组各18只,分别喂以缺乏叶酸和添加叶酸的纯合饲料。2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕13.51、7.5 d胚胎鼠及新生鼠心脏。用RT-PCR方法检测Folbp1基因及WNT信号转导途径中Wnt和-βcatenin基因mRNA表达。结果Folbp1、Wnt及-βcatenin基因mRNA在孕13.51、7.5 d胚胎心脏及新生鼠心脏中的表达量,实验组均显著低于对照组(P均<0.05)。结论FD影响Folbp1、WNT及-βcatenin基因表达,可能引起叶酸受体功能低下和WNT信号转导途径障碍,从而可能导致心脏发育中形态异常,造成心脏功能缺陷。

利用酵母双杂交系统筛选Pak4相互作用蛋白质

目的利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选信号转导分子Pak4相互作用蛋白。方法将Pak4激酶域序列克隆到酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒。质粒转化到酵母感受态AH109和Y187中验证蛋白表达。将人胎脑cDNA文库转化酵母Y187,与已转化诱饵质粒的AH109酵母进行交配实验。交配子在SD/-Leu/-Trp/-His和SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/X-α-gal平板上筛选,阳性克隆质粒酶切鉴定。结果成功构建了pGBKT7-Pak4 KD诱饵质粒,Western blot证实其在酵母菌AH109和Y187中表达,筛选了多个与Pak4相互作用的阳性转化子。结论利用酵母双杂交系统筛选出Pak4相互作用蛋白质。

寻常型银屑病皮损中Smad2、Smad3 mRNA的表达降低

目的:检测寻常型银屑病皮损中Smad2和Smad3的mRNA表达水平。方法:采用反转录-实时定量聚合酶链式反应技术对寻常型银屑病皮损与正常对照皮肤中Smad2和Smad3 mRNA的表达水平进行分析。结果:与正常对照皮肤相比,寻常型银屑病皮损Smad2和Smad3 mRNA的表达水平均显著降低。结论:寻常型银屑病皮损中Smad2和Smad3表达下调,可能通过干扰TGF-β信号向下游转导,有助于寻常型银屑病皮损角质形成细胞过度增殖状态的形成。

转化生长因子-β_1诱导人Tenon囊成纤维细胞表型转化的信号通路研究

目的探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人结膜下 Tenon 囊成纤维细胞(human subconjunctival Tenon's capsule fibroblast,HTCF)表型转化的作用及其信号转导通路。方法白内障手术中取人结膜下 Tenon 囊组织块培养成纤维细胞。用第5～9代细胞,以10μg/L TGF-β1诱导 HTCF48h,使其表型转化为肌成纤维细胞(myofibroblast,MF)。用蛋白质印迹免疫检测技术和免疫细胞化学技术鉴定细胞表型。在诱导后不同时间点(0、5、30、60、120、180min,12、24、36h),用蛋白质印迹免疫检测技术和免疫细胞化学技术测定smad2、AKT、ERK、P38蛋白表达。结果 10μg/L TGF-β1诱导 HTCF 后α-SMA 在24h 达峰值,蛋白表达在48h 最高;10μg/L TGF-β1 诱导 HTCF 后 smad2、AKT、P38表达具有时间双向性,smad2具有两个峰值。结论 TGF-β1能显著诱导 HTCF,使其表型转化为 MF,smad 信号通路参与了这一过程。(中国眼耳鼻喉科杂志,2007,7:14～16)

A2M介导Fas信号传导途径提高卵巢癌对铂类化疗的敏感性研究

目的探讨A2M基因的表达与卵巢癌患者耐药及预后的关系及其对Fas信号传导通路的影响。方法利用癌症基因图集(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中铂类敏感和耐药的卵巢癌患者的基因表达谱,分析A2M基因在铂类敏感和耐药患者中的表达差异。利用已构建的带有绿色荧光标记的卵巢癌SKOV3敏感细胞(SKOV3-GFP)和顺铂耐药细胞(SKOV3-GFP/DDPⅡ)进行裸鼠皮下种植,成瘤后分次予以顺铂体内干预,以实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,q RT-PCR)技术检测不同次数顺铂干预后的肿瘤组织中A2M m RNA与Fas信号传导通路上重要节点基因的表达水平。用双变量线性回归分析A2M m RNA与所检测基因的表达量的相关性。结果相对于铂类敏感病例,A2M m RNA在铂类耐药患者中的表达下降(P<0.05),A2M m RNA的表达与耐药相关(P=0.02),与卵巢癌患者总生存期、化疗间隔生存期和无疾病进展生存期高度相关(P均<0.001),其表达量越高,患者生存期越长。A2M m RNA以及细胞凋亡相关的Fas信号传导通路上重要节点基因Fas、FADD、caspase10、caspase9和caspase3随顺铂注射次数的增加,在耐药的移植瘤组织中相对低表达(P<0.001);而其下游与DNA修复相关的基因PARP1随顺铂注射次数的增加,在耐药的移植瘤组织中相对高表达(P<0.05)。A2M m RNA的表达与Fas信号传导通路上节点基因的表达存在线性相关(P<0.05)。结论 A2M可能是卵巢癌顺铂耐药的潜在信号分子,它可能维持肿瘤细胞对铂类药物的敏感性。其在耐药细胞中的低表达可能通过某种机制抑制下游的Fas信号传导通路,使其传导失调,最终引起PARP1的表达上调,促进DNA修复,抑制细胞凋亡,诱发卵巢癌细胞对顺铂的耐药。