动物园禽源奇异变形杆菌对第三代头孢菌素的耐药分子机制

为研究观赏禽类中分离的奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)对第三代头孢菌素的耐药机制,于2019年从河南省某动物园禽类养殖区绿孔雀(Pavo muticus)、红绿金刚鹦鹉(Ara chloroptera)、火鸡(Meleagris gallopavo)、帽子鸡(polish chicken)和非洲鸵鸟(Struthio camelus)5种观赏禽类中分离17株奇异变形杆菌,经药物敏感性试验、blaCTX-M基因检测、全基因组测序、PFGE和RT-qPCR等探明受试菌对第三代头孢菌素的耐药机制。结果发现:共有6株受试菌对第三代头孢菌素耐药,除1株(6D)携带超广谱β-内酰胺酶blaCTX-M-14和1株(106A)携带AmpC酶blaACT-16外,其余4株经PFGE检测证实为同一克隆型,且细菌体内双组分信号转导系统CpxAR、BaeSR和EnvZ/OmpR的表达量显著高于敏感菌,主要通过抑制耐药菌细胞膜上OmpC和OmpF的表达减少药物吸收,同时促进OmpW表达加速药物外排,从而减少菌体内药物浓度,进而导致其对第三代头孢菌素类耐药。研究表明,动物园禽类养殖区的奇异变形杆菌对第三代头孢菌素的耐药机制复杂多样,散播机制主要为染色体介导的克隆传播,应引起重视。

白芍总苷对共培养诱生的破骨细胞的作用及机制

目的：研究白芍总苷（ TGP）对佐剂关节炎（ AIA）大鼠滑膜成纤维细胞和单核细胞共培养诱生破骨细胞分化的干预作用及机制。方法分离AIA大鼠滑膜成纤维细胞和外周血单核细胞,共培养诱生破骨细胞；分别加入5、50、500、5000 mg·L-1和50 g·L-1的TGP,检测细胞增殖、TRAP活性和骨吸收功能；ELISA法检测上清中IL-1、TNF-α、M-CSF、RANKL的水平；实时定量 PCR测定细胞 ERK、JNK 和 p38的表达。结果 TGP 50～5000 mg·L-1可浓度依赖性地抑制破骨细胞的增殖能力、TRAP活性和骨吸收面积；降低上清中IL-1、TNF-α、M-CSF、RANKL的水平；不同程度抑制破骨细胞ERK、JNK和 p38的表达。结论一定剂量的 TGP可抑制类风湿关节炎破骨细胞的分化和活性,其作用与抑制滑膜成纤维细胞过度分泌细胞因子,进而阻止MAPKs信号途径的活化有关。

自噬在脑缺血性损伤中的作用

自噬是一种细胞内成分自我降解的过程,包括自噬的诱导、自噬体膜的形成、自噬体的形成、自噬体与溶酶体的融合以及内容物的降解。自噬若适度激活,则促进细胞存活;若过度激活,则可加重细胞损伤,甚至导致细胞裂解和促进细胞死亡。该文主要从自噬的形成过程及分子机制、脑缺血后自噬的诱发因素、自噬参与脑缺血的信号转导通路及自噬在脑缺血损伤中的作用进行综述,为进一步研究自噬与脑缺血性损伤及其药物调控提供参考。

Ras的结构和功能及其参与的信号传导

从ｒａｓ基因发现以来，因为它和癌症的相关性，引起了人们对其基因和蛋白研究的普遍关注．通过这些研究不仅知道了ｒａｓ基因的癌变作用机制，而且对Ｒａｓ蛋白与磷酸化途径的关系有了一个比较清晰的了解．同时关于Ｒａｓ蛋白所参与的信号传导途径的研究使得对细胞内的整个信息通路的开关和调节有了更进一步的认识。Ｒａｓ蛋白参与的信号传导途径还和其他的通路有相关性，如Ｇ蛋白的β、γ亚基二聚体可以激活Ｒａｓ途径．因此对Ｒａｓ途径的研究不仅可以了解Ｒａｓ自身的调节途径，而且对细胞内整体的信息传导的研究是十分必要的．

人外周血活化淋巴细胞中Survivin蛋白表达的分子机制研究

目的:探讨活化淋巴细胞中Survivin蛋白诱导表达的信号转导通路、分子级联反应和生物效应,揭示Survivin蛋白表达调控的分子机制。方法:用PHA和rhIL-2刺激培养人外周血单个核细胞,附加JAK抑制剂—AG490的处理,以Western blot检测Survivin和相关蛋白的表达;以流式细胞术(FCM)分析细胞周期和细胞分裂增殖。结果:刺激培养的细胞按照时序先后出现的分子和细胞学反应为:Stat3和Stat5磷酸化→CyclinD3、CyclinE蛋白水平上调→细胞进入S期及Survivin蛋白起始表达→细胞有丝分裂及Survivin蛋白表达水平增加。AG490对于上述反应均呈现明显的抑制作用,但对周期抑制蛋白P21和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平没有影响。结论:Survivin蛋白的表达依赖JAK-Stat信号转导通路的早期活化,通过上调CyclinD3和CyclinE周期蛋白水平,启动细胞周期的运行,诱导Survivin蛋白的周期时相依赖性表达,参与细胞有丝分裂与增殖。

BMP-7/Smads/TGF-β_1信号转导通路与肾间质纤维化

肾间质纤维化导致多种肾脏疾病发展至终末期肾衰竭,TGF-β1/Smads信号通路是肾脏纤维化重要的转导通路。骨形态发生蛋白7(BMP-7)不仅影响TGF-β1/Smads通路的信号转导,还与TGF-β1存在互逆作用,可多方面抵消TGF-β1的促肾纤维化作用。现就BMP-7/Smads/TGF-β1信号转导通路与肾间质纤维化的关系进行综述。

抗Mtb免疫信号通路环鸟苷酸-腺苷酸合成酶-干扰素基因刺激蛋白的研究进展

Mtb作为一种胞内寄生菌，细胞内如何识别其产物并启动固有免疫反应对Mtb的控制具有重要意义。干扰素基因刺激蛋白（stimulatorofinterferongenes，STING）是天然免疫反应信号通路中重要的衔接分子，Mtb感染过程中STING-TANK结合激酶1（TANK—bindingkinase1，TBK-1）一干扰素调节因子3（interferonregula—toryfactor3，IRF-3）信号通路在介导I型干扰素表达及诱导吞噬细胞自噬过程中发挥重要作用。最近的研究表明，环鸟苷酸一腺苷酸合成酶（cyclicGMP-AMPsynthase，cGAS）参与Mtb诱导的天然免疫反应，Mtb通过早期分泌抗原靶蛋白-6系统1（ESAT-6systeml，ESX-1）分泌系统介导的细菌DNA释放，从而激活cGAS-STING通路。笔者将对该信号通路在Mtb感染过程中发挥作用的机制及相关研究进行综述，以期增强我们对结核病的病理过程和机体免疫机制的理解，为更好地开拓新的抗结核药物提供新的思路。

IL-27在肺纤维化进程中的作用及机制研究

肺纤维化是一种难治性、高致病率的肺间质性疾病,中位期生存时间短,肺移植是肺纤维化终末期的唯一治疗途径。目前肺纤维化的病因及机制不是十分清楚。白细胞介素27(IL-27)是新近发现的一种细胞因子,由抗原呈递细胞产生,具有抗炎和促炎的双重调节机制。相关研究发现,IL-27在抗感染、肿瘤及自身免疫性疾病治疗等方面发挥着积极的保护作用。国内外有关IL-27在肺纤维化进程中作用的研究报道较少。该文从IL-27的生物学作用方面对肺纤维进程中的作用及机制进行综述,以期为临床提供有用参考。

Wnt和COX-2信号通路在胃癌中的研究现况

研究发现在胃癌高发地区,肠型胃癌的发病比例明显高于非高发地区。Wnt信号通路在细胞发育、增殖、分化、黏附、迁移中起重要作用,同时在胃癌发生、发展过程中起关键角色。近来研究表明在COX-2/PGE2相关的炎症微环境中Wnt信号被激活,并导致胃癌的发生发展,尤其在肠型胃癌。同时Wnt信号通路的激活可促使胃上皮细胞异常增殖,从而使COX-2和Mpges-1表达,促使PGE2增加而导致肿瘤的发生。两者之间可能在胃癌中存在协同作用。研究两者在胃癌中的关系,将为胃癌的诊断、治疗、预后评价提供帮助。

缺血再灌注致心律失常大鼠模型Ca2＋／CaM／CaMKⅡ信号通路的研究

[目的]探讨缺血再灌注致心律失常大鼠模型心肌组织Ca2＋/CaM/CaM KⅡ信号通路的变化。[方法]选取健康SPF级SD大鼠48只，雌雄各半，以单盲法随机分为四组（ n＝12）；空白组不做任何处理，假手术组仅进行开胸手术和动脉套线，无结扎，模型组以左冠状动脉前降支结扎法制备缺血再灌注致心律失常模型，不做任何处理，干预组在制备缺血再灌注致心律失常模型前肌注 CaMKⅡ抑制剂KN-93（100μmol/kg），四组取大鼠心脏组织，以免疫印迹法检测CaM、CaM KⅡ及P-CaM KⅡ的蛋白表达水平；同时分离大鼠心肌细胞，以激光共聚焦显微镜检测Ca2＋荧光强度。结果模型组大鼠的心律失常评分显著高于空白组和假手术组（ P ＜0．05），干预组心律失常评分显著下降（ P＜0．05）；模型组大鼠心肌组织的 CaM、P-CaMKⅡ/CaMKⅡ表达水平及Ca2＋荧光强度均显著高于空白组和假手术组（ P＜0．05），干预组各指标均明显下调（ P ＜0．05）。[结果]Ca2＋/CaM/CaM KⅡ信号通路可被认为是介导缺血再灌注致大鼠心律失常发病机制的重要环节之一。

枸杞子含药血清对兔视网膜色素上皮细胞光损伤凋亡线粒体信号传导途径的影响

目的:研究兔视网膜色素(RPE)上皮细胞光损伤以及枸杞子含药血清干预防治后细胞中参与凋亡的蛋白分子表达量的变化,探讨枸杞子含药血清对兔视网膜色素上皮细胞光损伤保护可能的信号传导途径,为临床应用枸杞子治疗年龄相关性黄斑变性等视网膜光损伤性疾病提供理论依据。方法:体外培养兔RPE细胞,用三基色冷光灯模拟自然光源,选取(2500±500)Lux作为基础光照强度,照射4h建立光损伤模型。制备含不同效量的枸杞子含药血清,光照前1h孵育体外培养的兔RPE细胞后进行光照实验,设置四个实验分组:A组:空白对照组;B组:光损伤模型组;C组:低剂量组;D组:高剂量组。通过透射电子显微镜进行兔RPE细胞超微结构的观察及拍片;采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测兔RPE细胞内细胞色素C(Cyt-C)、caspase-9及caspase-3蛋白的表达量。结果:与空白对照组相比,光损模型组细胞内的Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达水平明显上调(P<0.05);枸杞子含药血清能有效的抑制细胞内Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表达,与光损模型组比较,差异有统计学意义(均P<0.05),其中高浓度组可显著抑制细胞内Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表达,与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:枸杞子对RPE细胞具有一定的保护作用,这一保护作用可能是通过线粒体信号传导途径来实现的。

骨髓间充质干细胞在牵张成骨中迁移调控机制的研究进展

牵张成骨是组织工程技术中的重要类型之一。该技术自推广以来,逐渐成为临床上治疗骨缺损、骨不连的有效方法。就目前发展形势看,临床工作者尚未明确牵张成骨作用机制。骨髓间充质干细胞是牵张成骨中不可缺少的部分,牵张成骨再生以牵张应力下局部骨髓间充质干细胞迁移至骨截断区为前提。在此基础上,本文对骨髓间充质干细胞迁移机制在骨牵张过程中的作用进行探讨,为牵张成骨的广泛应用提供理论依据。

氧化苦参碱和苦参碱通过调控酪氨酸激酶-信号转导及转录激活因子信号通路对肝癌细胞SMMC-7721增殖凋亡的影响

目的观察苦参碱和氧化苦参碱对肝癌细胞SMMC-7721增殖凋亡及酪氨酸激酶（JAK）-信号转导及转录激活因子（STAT）通路的影响。方法应用苦参碱和氧化苦参碱干预肝癌细胞SMMC-7721，通过噻唑蓝（MTT）法检测对苦参碱和氧化苦参碱肝癌细胞增殖的影响，采用双荧光染色观察苦参碱和氧化苦参碱干预肝癌SMMC-7721细胞凋亡率的变化，并以反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测苦参碱和氧化苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞STAT3、STAT5 mRNA的影响。结果（1）随着苦参碱和氧化苦参碱药物浓度和作用时间增加，细胞增殖抑制率上升，苦参碱和氧化苦参碱作用各时间组的细胞增殖抑制率与作用浓度呈显著正相关（r＝0.851～0.989），苦参碱和氧化苦参碱各浓度组不同作用时间比较细胞增殖抑制率差异有统计学意义。（2）在双荧光检测中，活细胞被吖啶橙（AO）染成绿色，凋亡细胞则被溴乙锭（EB）染成橘红色。苦参碱2.5 mg/ml作用48 h组凋亡率为52.1%，氧化苦参碱2.5 mg/ml作用48 h组凋亡率为29.6%，这说明相同浓度苦参碱比氧化苦参碱作用显著（χ2＝9.100，P＝0.003）。（3）不同浓度苦参碱和氧化苦参碱作用于肝癌SMMC-7721细胞后，STAT3、STAT5 mRNA表达量均明显下降，与用药前比较差异有统计学意义。STAT3、STAT5 mRNA在对照组细胞中的表达是0.76±0.06和0.72±0.04，在苦参碱1.0 mg/ml组的表达是0.50±0.04和0.43±0.03，在苦参碱2.5 mg/ml组的表达是0.25±0.03和0.22±0.04，在氧化苦参碱1.0 mg/ml组的表达是0.64±0.03和0.60±0.06，在氧化苦参碱2.5 mg/ml组的表达是0.49±0.06和0.41±0.06。相同浓度苦参碱和氧化苦参碱比较，苦参碱对肝癌SMMC-7721细胞STAT3、STAT5 mRNA的影响更显著，差异有统计学意义。结论苦参碱和氧化苦参碱能显著抑制SMMC-7721细胞增殖、促进其凋亡，其机制可能与下调STAT3、STAT5的基因表达，抑制细胞信号转导通路有关。

髓样细胞表达的触发受体-1与炎症信号转导的研究进展

研究表明髓样细胞表达的触发受体-1（TREM-1）参与了炎性反应的级联放大过程。细菌的某些成分可以上调细胞表面TREM-1的表达，并且能和TREM-1配体协同激活TREM-1受体向下游传递信号。TREM-1被激活后会诱导前炎性因子的产生并引起相关的炎症反应。由于TREM-1是明显放大内毒素脂多糖（LPS）所引起的炎性反应的关键介质，因此对于TREM-1激活炎症信号通路的研究取得了一定的进展。然而，TREM。1在协同Toll样受体激活炎性反应的信号通路的具体机制尚未完全明晰。专注于TREM-1的信号转导，阐明与此通路相关的信号分子，如TLR、DAP-12、MAPKs、NTAL、CARD9、NLRs的作用，为进一步揭示脓毒症的发病机制并寻找新的治疗靶点。

Role of JWA in acute promye-locytic leukemia cell differentiation and apoptosis triggered by retinoic acid,12-tetradecanoylphorbol-13- acetate and arsenic trioxide

JWA, a cytoskeleton associated gene, was primarily found to be regulated by all trans-retinoic acid (ATRA), 13 cis-retinoic acid (13 cis-RA) and 12-tetradecano-ylphorbol-13-acetate (TPA). Our previous data showed that JWA might be involved in both cellular differentiation and apoptosis induced by several chemicals. In this study, we addressed the possible mechanism of JWA in the regulation of cell differentiation and apoptosis in NB4, a human acute promyelocytic leukemia cell line. CD11b/CD33 expression and cell cycle were analyzed for detecting of cell differentiation and apoptosis. Both reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blot assays were used for understanding the expressions of JWA. The results showed that under the indicated concentrations ATRA (10-6 mol/L) and As2O3 (10-6 mol/L) induced cell differentiation and apoptosis separately; while both 4HPR (10-6mol/L) and TPA (10-7 mol/L) showed dual-directional effects on NB4 cells, they not only trigger cells’