3株紫花苜蓿根瘤菌sinR基因的克隆、序列测定及系统发育分析

为从与紫花苜蓿共生的3株不同根瘤菌（CCBAU 30085、USDA 1002和CCBAU QH180）中扩增参与根瘤菌群体感应调控的转录激活蛋白基因（sinR基因）并比较它们的不同，根据文献[1]，设计了一对引物，通过PCR扩增，将扩增产物克隆到pGEM-T-easy载体上，转化大肠杆菌DH5α，经蓝白斑和氨苄青霉素筛选得到阳性转化子，用通用引物测序后将序列与已报道的sinR基因（GenBank登录号为AL591788）进行了同源性比较和系统发育分析，本试验成功克隆到了sinR基因，经同源性及系统发育分析后，结果表明，CCBAU30085、USDA1002和CCBAUQH180这3株菌的sinR基因序列相似性高达99％；它们与已知的Sinorhizobium meliloti 1021中的sinR基因序列相似性到达99．7％-100％，与具有相同功能的豌豆根瘤菌及埃氏菜豆根瘤菌中的raiR基因之间的相似性低于45％，这说明与紫花苜蓿共生的根瘤菌虽然经历了长期的进化，但其sinR基因在长期的进化过程中，却是一个非常保守的基因。