铜绿假单胞菌脓毒症大鼠肝组织中TLR4/SIGIRR的表达与静脉血中IL-6和IL-12水平的变化

目的探讨铜绿假单胞菌(P-seudomonas aeruginosa,PA)脓毒症肝组织中单免疫球蛋白白细胞介素-1受体相关蛋白(Single immunoglobin IL-1 receptor related protein,SIGIRR)表达对TLR4的表达及IL-6、IL-12合成的影响。方法将60只SD级大鼠随机分为两组,对照组10只不做处理,试验组50只再细分为5组,分别在腹腔内注射PA,构建PA脓毒症模型;对照组、试验组分别于注射PA 1 h、2 h、4 h、8 h、12 h后无菌取肝脏,下腔静脉无菌抽血。采用实时荧光定量PCR仪检测肝组织中TLR4、SIGIRR的mRNA相对含量;采用双抗夹心ELISA法检测大鼠血清中IL-6、IL-12浓度。结果试验组TLR4表达均大于对照组(P<0.05),但试验组各组间TLR4表达差异无统计学意义(P>0.05);1 h组、2 h组、4 h组IL-6、IL-12水平均低于对照组(P<0.05),8h组、12 h组IL-6、IL-12水平均高于对照组(P<0.05),组间差异比较具有统计学意义(P<0.05)。结论 SIGIRR的上调表达可抑制大鼠血清IL-6、IL-12的产生,但对TLR4表达无影响,提示SIGIRR对TLR4信号通路的负调节作用不是通过直接抑制TLR4表达实现的。

核转录因子NF-κB调节人肾小管上皮细胞SIGIRR表达机制的研究

目的探讨人肾小管上皮细胞(HKC)内核转录因子NF-κB(NF-κB)反馈调控单免疫球蛋白白介素1受体相关蛋白(SIGIRR)表达的分子机制。方法分子克隆法构建pLNCX2-G418-SIGIRR过表达载体,经PT67细胞包装后感染HKC细胞,构建SIGIRR过表达细胞和对照细胞。使用IL-1β诱导,Western blot验证过表达SIGIRR可抑制NF-κB活化。使用NF-κB阻断剂和干涉NF-κB活性后,免疫荧光法验证活化的NF-κB可调控SIGIRR表达。在线工具预测SIGIRR启动子区存在NF-κB结合位点。分子克隆法从人基因组DNA内获取含有结合位点的SIGIRR启动子序列,连接至荧光素酶载体pGL3-Luc,构建pGL3-Luc-SIGIRR,并突变结合位点。使用荧光素酶报告基因实验和染色质免疫沉淀技术(ChIP)共同验证活化的NF-κB可结合在SIGIRR启动子区调控SIGIRR基因的表达。结果构建的pLNCX2-G418-SIGIRR逆转录病毒载体经酶切、测序验证后对比SIGIRR基因编码序列完全一致,重组体和对照载体经病毒包装后转入HKC细胞后成功构建HKC/SIGIRR实验组和HKC/Co对照组细胞系,在mRNA和蛋白水平的SIGIRR表达差异有统计学意义(P<0.05,P<0.001)。过表达SIGIRR细胞组相比对照组细胞可以减少IL-1β诱导的NF-κB的活化(P<0.001),抑制NF-κB活化和干涉NF-κB表达后,SIGIRR的表达出现下调。提取人基因组DNA后,分子克隆法获得SIGIRR目的启动子序列连接至载体,成功构建pGL3-Luc-SIGIRR荧光素酶载体并定点突变载体,经酶切和测序验证与目的序列完全一致。通过荧光素酶报告基因实验和CHIP实验证实NF-κB可结合SIGIRR启动子区域,调控SIGIRR表达。结论HKC细胞中SIGIRR可以影响NF-κB的活化,活化的NF-κB可以结合到SIGIRR的启动子区域,调控SIGIRR的基因表达变化,形成一个反馈体系,控制NF-κB的过度活化。

老年急性胰腺炎继发脓毒症外周血单免疫球蛋白白细胞介素-1受体相关蛋白表达及意义

目的探究老年急性胰腺炎(SAP)继发脓毒症外周血单免疫球蛋白白细胞介素-1受体相关蛋白(SIGIRR)表达及意义。方法选择2019年9月-2021年9月丽水市人民医院急诊科收治的老年SAP继发脓毒症患者50例为研究组,另随机选择同期老年SAP未继发脓毒症患者50例为对照组。收集患者临床资料,采用酶联免疫吸附法检测外周血SIGIRR、TOLL样受体(TLR)2、TLR4和白细胞介素受体-1R(IL-1R)水平。结果研究组入院时床边急性胰腺炎严重指数(BISAP)高于对照组(P<0.05);研究组血清SIGIRR、TLR2、TLR4和IL-1R水平高于对照组(P<0.05),多因素Logistic回归分析结果显示BISAP、SIGIRR、TLR2、TLR4和IL-1R均为SAP继发脓毒症危险因素(P<0.05);受试者工作特征(ROC)曲线显示,血清SIGIRR、TLR2、TLR4和IL-1R水平预测继发脓毒症曲线下面积均>0.7,均具有统计学意义(P<0.05)。结论SIGIRR与TLRs及IL-1R协同参加老年SAP患者继发脓毒症发病过程,其水平对于预测脓毒症发生有一定临床意义。

右美托咪定通过调控SIGIRR/NF-κB信号对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的影响

目的探究右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肺损伤(ALI)的影响及其作用机制。方法实验分为正常对照组(Control)、DEX对照组(DEX)、LPS诱导大鼠急性肺损伤组(LPS)以及LPS+DEX处理组(LPS+DEX)。待造模成功后24 h检测各组大鼠肺组织湿/干质量比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)IL-1β、TNF-α和IL-6含量;HE染色观察肺组织病理学改变;免疫组化和Western blot检测SIGIRR和NF-κB表达。结果与Control组相比,LPS组肺组织W/D以及BALF中IL-1β、IL-6和TNF-α含量均增加(P<0.01),肺组织出现明显的ALI病理损伤,且SIGIRR表达降低(P<0.01),NF-κB磷酸化活化增强(P<0.01);与LPS组相比,LPS+DEX组肺组织W/D以及BALF中IL-1β、IL-6和TNF-α含量均降低(P<0.05或P<0.01);肺组织病理性损伤明显减轻,且SIGIRR表达增加,NF-κB磷酸化活化降低(P<0.01)。结论右美托咪定可能通过降低SIGIRR降解,抑制NF-κB活化,降低炎症反应,从而减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤。

SIGIRR对脂多糖诱导的人气道上皮细胞株炎症反应的抑制作用

目的观察单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白（SIGIRR）对内毒素-脂多糖（LPS）诱导的人气道上皮细胞株H292炎症反应的影响。方法以人气道上皮细胞株H292为研究对象，实验分为两组：A组（实验组，SIGIRR过表达组）；B组（对照组，空载体转染组）。将含有SIGIRRcDNA全长的真核表达载体瞬时转染H292细胞24h后，使SIGIRR在H292细胞中过表达，并设立空载体转染组作为对照组；分别采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot法检测SIGIRR表达。于基因转染24h后给予LPS刺激H292细胞，分别于加入脂多糖（LPS）后3、6、12、24h各时间点，Western blot法检测转染前后核因子-κB（NF-κB）转录活性的改变，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测转染前后炎性因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β录活性明显升高；而实验组转染SIGIRR表达载体后NF-KB转录活性下降。ELISA实验结果表明，过表达SIGIRR的H292细胞在接受LPS刺激后其炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白表达水平明显低于对照组。结论SIGiRR过表达可减轻H292细胞对LPS诱导的炎性反应，抑制H292细胞株产生TNF-α、IL-1β和IL-6等炎性因子。