Progress and prediction of multicomponent quantification in complex systems with practical LC-UV methods

Complex systems exist widely,including medicines from natural products,functional foods,and biological samples.The biological activity of complex systems is often the result of the synergistic effect of multiple components.In the quality evaluation of complex samples,multicomponent quantitative analysis(MCQA)is usually needed.To overcome the difficulty in obtaining standard products,scholars have proposed achieving MCQA through the“single standard to determine multiple components(SSDMC)”approach.This method has been used in the determination of multicomponent content in natural source drugs and the analysis of impurities in chemical drugs and has been included in the Chinese Pharmacopoeia.Depending on a convenient(ultra)high-performance liquid chromatography method,how can the repeatability and robustness of the MCQA method be improved?How can the chromatography conditions be optimized to improve the number of quantitative components?How can computer software technology be introduced to improve the efficiency of multicomponent analysis(MCA)?These are the key problems that remain to be solved in practical MCQA.First,this review article summarizes the calculation methods of relative correction factors in the SSDMC approach in the past five years,as well as the method robustness and accuracy evaluation.Second,it also summarizes methods to improve peak capacity and quantitative accuracy in MCA,including column selection and twodimensional chromatographic analysis technology.Finally,computer software technologies for predicting chromatographic conditions and analytical parameters are introduced,which provides an idea for intelligent method development in MCA.This paper aims to provide methodological ideas for the improvement of complex system analysis,especially MCQA.

Simultaneous Determination of Seven Components in Gamboge and Its Processed Products Using a Single Reference Standard

Objective To establish a quality control method for simultaneous determination of multiple components in gamboge. Methods A single reference standard for the determination of multiple components （SSDMC） with HPLC was proposed. Seven major components of gamboge including gambogenic acid （S）, β-morellic acid （C1）, 2R-30-hydroxygambogic acid （C2）, isogambogenic acid （C3）, gambogellic acid （C4）, 2R-gambogic acid （C5）, and 2S-gambogic acid （C6） were simultaneously analyzed using gambogenic acid as reference standard. The credibility and feasibility of SSDMC method were validated with respect to linearity, limits of detection and quantification, precision, stability, repeatability, accuracy, ruggedness, and robustness. The relative conversion factors （RCFs） of S and C1-6 were calculated. Twelve batches of gamboge including crude and processed products were successfully analyzed by applying the SSDMC and traditional external standard （ES） methods. Results The SSDMC method was credible and feasible. The RCFs of S and C1-6 were 1.000, 0.913, 0.864, 1.064, 0.777, 0.921, and 0.919, respectively. No significant difference was observed in the contents of the seven components between SSDMC and ES methods. The heat-processing technique caused a reduction in the seven components. Conclusion SSDMC is a simple, reliable, and effective method for the analysis of the complex multiple components in gamboge, and it is also a practical and economical approach.

Simultaneous Determination of Four Anthraquinones in Polygoni Multiflori Radix with Single Reference Standard by High Performance Liquid Chromatography

Objective: To establish a rapid, accurate and reliable analytical method for the simultaneous determination of four major anthraquinones in Polygoni Multiflori Radix(PMR) using single reference standard.Methods: The four components including emodin-8-O-β-D-(EMG), physcion-8-O-β-D-glucoside, emodin and physcion were separated on an ODS C18 column within 13 min and detected at 280 nm. Emodin was selected as the reference standard, and the response factor for each analyte with respect to emodin were calculated. Robustness were also tested including different columns, equipments, temperatures, detection wavelengths, and other chromatographic conditions which might influence stability of response factors.Results: The method was validated in terms of linearity(r^2> 0.9995), LOQs(0.820–3.05 ng/m L), LODs(0.180–0.920 ng/m L), precision,accuracy(95.8–103.6%, RSD < 2.80%) and stability. A total of 40 batches of PMR were analyzed and the results were found to have no statistically significant differences compared with those obtained using the external standard method.Conclusion: This work provided a single standard to determine multi-components method for quantitation of four anthraquinones in PMR,which could be applied in the quality control of this herbal drug.

骨髓炎颗粒HPLC指纹图谱及一测多评法测定7种成分含量

目的建立骨髓炎颗粒的HPLC指纹图谱及一测多评法(QAMS)测定骨髓炎颗粒中绿原酸、连翘酯苷、芦丁、黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷、党参炔苷等7种主要成分的含量。方法采用Diamonsil-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,4μm),以乙腈-0.1%的磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL·mL^(-1),柱温为30℃,检测波长为280 nm,建立骨髓炎颗粒HPLC指纹图谱与测定绿原酸、连翘酯苷、芦丁、黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷、党参炔苷等7种主要成分含量。结果10批样品共标定了26个共有峰,指认了7个峰,相似度均大于0.995。以黄芩苷为内参物,分别建立绿原酸、芦丁、连翘酯苷、黄芩素、汉黄芩苷、党参炔苷的相对校正因子分别为2.3131、4.1377、2.1300、0.7248、1.9161、8.1718;其校正因子在不同色谱条件下的RSD均小于2%。该6种成分含量用外标法进行测定,与QAMS法比较成分含量结果无明显差异。结论建立的HPLC指纹图谱及7种成分QAMS法,科学合理、简便易行,可用于骨髓炎颗粒中有效成分含量的测定,为深入研究其质量标准奠定基础。

A feasible,economical,and accurate analytical method for simultaneous determination of six alkaloid markers in Aconiti Lateralis Radix Praeparata from different manufacturing sources and processing ways

Aconiti Lateralis Radix Praeparata(Fuzi) is a commonly used traditional Chinese medicine in clinic for its potency in restoring yang and rescuing from collapse. Aconiti alkaloids, mainly including monoester-diterpenoidaconitines(MDAs) and diester-diterpenoidaconitines(DDAs), are considered to act as both bioactive and toxic constituents. In the present study, a feasible, economical, and accurate HPLC method for simultaneous determination of six alkaloid markers using the Single Standard for Determination of Multi-Components(SSDMC) method was developed and fully validated. Benzoylmesaconine was used as the unique reference standard. This method was proven as accurate(recovery varying between 97.5%-101.8%, RSD < 3%), precise(RSD 0.63%-2.05%), and linear(R > 0.999 9) over the concentration ranges, and subsequently applied to quantitative evaluation of 62 batches of samples, among which 45 batches were from good manufacturing practice(GMP) facilities and 17 batches from the drug market. The contents were then analyzed by principal component analysis(PCA) and homogeneity test. The present study provided valuable information for improving the quality standard of Aconiti Lateralis Radix Praeparata. The developed method also has the potential in analysis of other Aconitum species, such as Aconitum carmichaelii(prepared parent root) and Aconitum kusnezoffii(prepared root).

“一测多评”法与外标法测定三黄片中4种黄芩黄酮类成分

目的采用"一测多评"法(QAMS)与外标法(ESM)同步测定三黄片(大黄、盐酸小檗碱及黄芩浸膏)中的4种黄芩黄酮类成分含有量并进行比较,以验证"一测多评"法在三黄片中应用的可行性。方法以黄芩苷为内参物,采用XtimateTMC18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为1 mL/min,柱温30℃,检测波长274 nm。结果 2种方法测得的含有量无显著性差异,RSD<5%。结论 "一测多评"法可用于三黄片中4种黄芩黄酮类成分的质量评价。

中药材一测多评中相对校正因子的规律性文献调查和分析

目的：探寻相对校正因子（RCF）在中药材一测多评中应用的规律性。方法：以中国知网（CNKI）文献数据库为来源,采用文献检索方法收集大量有关中药材一测多评的文献,提取文献中通过一测多评法（QAMS）所得含量的计算值与外标法所得含量的实测值,并通过SPSS 19.0软件计算其计算值与实测值间相对标准偏差的百分值（RSD,%）,绘制散点图分析RSD与RCF的相关性。结果：RCF值在〉0.62-1.53区间分布较多,占全部数据的76.7%,且在此区间时,计算值与实测值的相似度较大,而RSD〈3.0%的数据占此区间全部数据的88.8%,可信度较好。与此同时,计算值与实测值的相似程度还受到其他待测成分与内参物之间母核结构和理化性质差异的影响,母核结构相似时,计算值与实测值的相似度较大;母核结构差异大时,计算值与实测值的相似度较小;而母核结构相似、理化性质差异大时,计算值与实测值的相似度也较小。结论：QAMS法中RCF会影响中药材待测成分含量测定结果的可信度,有必要建立中药材多成分QAMS法测定中RCF、RSD等相关参数数据库。

一测多评法测定小儿咳喘灵颗粒中6种绿原酸类成分的含量

目的:建立小儿咳喘灵颗粒中6种主要活性成分的一测多评含量测定方法。方法:以绿原酸为内标物,采用高效液相色谱方法,建立其与新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸5种成分的相对校正因子,并用该校正因子进行计算,实现一测多评;同时采用外标法对6种成分进行含量测定,通过比较两种方法的结果,验证该方法的准确性。结果:建立的校正因子重复性较好,采用校正因子计算的含量值与外标法实测值偏差较好,相对误差<5%。结论:采用一测多评法测定小儿咳喘灵颗粒中6种绿原酸类成分可行。

一测多评法测定小活络丸中9种乌头类生物碱的含量

目的:建立一测多评法同时测定小活络丸中9种乌头类生物碱含量。方法:采用高效液相色谱四级杆飞行时间串联质谱(HPLC-QTOF-MS)法,采用Agilent ZORBAX Extend-C_(18)RRHT(2.1 mm×50 mm,1.8μm)色谱柱;流速为0.21 ml·min^(-1);柱温为30℃;以甲醇为流动相A,以水(含0.1%甲酸和2.5 mmol·L^(-1)醋酸铵溶液)为流动相B,梯度洗脱。以乌头碱为内参物,测定次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、乌头原碱、次乌头原碱、新乌头原碱对于其的相对校正因子,并对相对校正因子进行重现性考察。利用相对校正因子计算其他8种生物碱成分的含量,同时利用外标法测定这9种成分,比较两种测定方法的差异,验证一测多评法的准确性和可行性。结果:在线性范围内,次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、乌头原碱、次乌头原碱、新乌头原碱对乌头碱的相对校正因于分别为1.736、1.979、1.0471、0.9242、1.2901、1.3078、1.2859、1.0948,建立了QAMS法测定小活络丸中9种生物碱的含量,其测定值与计算值无显著差异。结论:本文方法可用于小活络丸中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、乌头原碱、次乌头原碱、新乌头原碱的含量测定。

HPLC双标多测法测定银黄口服液中7个成分的含量

目的建立高效液相色谱(HPLC)双标多测法,测定银黄口服液中7个成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3,4-O-二咖啡酰奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸、黄芩苷)的含量。方法采用HPLC,借助DRS Origin软件,以绿原酸(峰2)和黄芩苷(峰7)为双标化合物,采用双标线性校正法进行色谱峰定性;以双标化合物中的绿原酸为参照物,用相对校正因子法对其他6种成分进行定量。同时,分别采用相对校正因子法和外标法对20批不同企业生产的银黄口服液样品中上述7个成分进行含量测定。结果使用DRS Origin软件可准确定性色谱峰。新绿原酸、隐绿原酸、3,4-O-二咖啡酰奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸和黄芩苷对绿原酸的相对校正因子分别为0.9606,09612,1.0243,1.2603,1.2394,1.0872,使用该相对校正因子计算的含量和外标法结果的绝对偏差均小于0.1 mg/ml,且建立的方法符合方法学验证要求,平均回收率分别为98.62%,102.58%,100.41%,104.76%,103.17%,102.95%,97.39%(n=6),RSD分别为1.93%,1.08%,1.10%,0.74%,0.92%,0.78%,1.13%。结论双标多测法作为一种新的替代对照品方法,可用于银黄口服液中7个成分的质量评价,方法可行、准确且经济实用,值得应用和推广。

基于一测多评法的丹参酮提取物质量控制

目的:建立丹参酮提取物中二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA 4种丹参酮类成分的一测多评法,探讨一测多评法在丹参酮提取物质量控制中的应用。方法:采用高效液相色谱法,以丹参酮IIA为内标物,计算二氢丹参酮I、隐丹参酮和丹参酮I相对于丹参酮IIA的相对校正因子和相对保留时间,利用相对校正因子计算丹参酮提取物中4种丹参酮类成分的含量,实现一测多评;同时采用外标法测定4种丹参酮类成分的含量,并比较二者差异,评价一测多评法在丹参酮提取物质量控制应用中的准确性和科学性。结果:二氢丹参酮I、隐丹参酮和丹参酮I相对于丹参酮IIA的相对校正因子分别为1.55、1.12和1.28;各成分的相对校正因子和相对保留时间在不同实验条件下的系统耐用性良好;一测多评法计算结果与外标法测定结果无显著差异。结论:以丹参酮IIA为内标物,建立的丹参酮提取物中4种丹参酮类成分的一测多评方法简便、准确、可靠,可用于丹参酮提取物的多成分质量控制。

一测多评法同时测定白芷配方颗粒中6种成分的含量

目的 建立一测多评法同时测定白芷配方颗粒中6种香豆素类成分的含量。方法 采用UPLC法,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.8 μm),以乙腈-0.1%乙酸为流动相,梯度洗脱,检测波长为300 nm,流速为0.35 mL·min^(-1),柱温为35℃。以欧前胡素为内参物,建立其与水合氧化前胡素、白当归素、佛手柑内酯、珊瑚菜素、异欧前胡素的相对校正因子,考察其耐用性,计算6种成分含量,并与外标法的含量测定结果比较。结果 在各自线性范围内,水合氧化前胡素、白当归素、佛手柑内酯、珊瑚菜素、异欧前胡素的相对校正因子分别为1.22、1.52、0.79、3.20、1.05;在不同实验条件下相对校正因子耐用性良好,14批白芷配方颗粒的一测多评法与外标法测定结果无显著差异。结论 建立的一测多评法准确可行,可为白芷配方颗粒多指标成分质量评价提供参考。

绿梅花中4种成分双标多测法的建立

目的 建立双标多测法同时测定绿梅花中绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷4种成分含量,更经济高效地控制和评价绿梅花质量。方法 采用高效液相色谱法,流动相以含0.1%甲酸的乙腈溶液为A相,0.1%甲酸溶液为B相,流速1.0 mL·min^(–1),检测波长355 nm,柱温25℃。以DRSOrigin软件筛选出绿原酸和金丝桃苷为参照物,采用双标线性校正法预测色谱峰的保留时间,以相对校正因子法测定各成分含量。结果 双标线性校正法预测不同成分保留时间的预测结果准确且优于相对保留时间法;相对校正因子法计算的含量与外标法的结果相对误差均<1%,无明显差异。10批绿梅花中绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷的含量分别为46.18~69.68,3.91~8.00,1.76~3.11,3.21~5.56 mg·g^(-1)。结论 建立的双标多测法预测待测成分保留时间的结果准确,色谱柱的适用范围广,节省对照品,经济高效;同时也可准确测定各成分含量,为绿梅花多成分质量控制和评价提供新的思路和方法。

关于《中国药典》2020年版穿心莲药材和饮片质量标准的修订建议

针对《中国药典》2015年版中穿心莲药材和饮片标准存在的问题和局限性,对其质量标准进行改进和完善,为《中国药典》2020年版穿心莲药材和饮片质量标准的修订提出建议。采用硅胶G薄层板,三氯甲烷-甲苯-甲醇(8∶1∶1)为展开剂,10%硫酸乙醇溶液为显色剂,建立以穿心莲内酯和穿心莲对照药材为对照的薄层鉴别方法。该法重现性好,专属性强,灵敏度高,与原标准的薄层鉴别项比较,该法展开效果好,斑点清晰。结合前期研究,建立以穿心莲内酯为内参物,同步测定穿心莲内酯(S)、新穿心莲内酯(A)、14-去氧穿心莲内酯(B)和脱水穿心莲内酯(C)等4种二萜内酯含量的一测多评法(QAMS),确定相对校正因子分别为fS/A=1.12,fS/B=0.79,fS/C=0.63,相对保留时间分别为tA/S=1.95,tB/S=2.18,tC/S=2.25。根据46批药材和38批饮片中4种二萜内酯的测定结果,规定药材中4种二萜内酯总量不得少于1.5%,饮片中4种二萜内酯总量不得少于1.2%。与原标准的含量测定项比较,QAMS不仅可以降低检测成本,提高工作效率,而且可以更加全面而又客观的评价穿心莲药材和饮片的质量。二萜内酯是穿心莲公认的有效成分且在叶中的含量远高于茎,然而,当前市售饮片几乎均为茎,质量普遍较差,难以保障药效。因此,在饮片的检查项中新增含叶量,并规定不得少于25%。

相对校正因子在中药多指标测定中的应用研究进展

中药标准物质品种和质量的相对滞后,已成为中药标准制定与提高的制约因素,为解决这一问题,不断涌现出新的测定方法。重点介绍与相对校正因子相关的一测多评法、替代对照品法、内标多控法及系统内标法等多指标定量方法;阐述了相对校正因子计算方法相关内容和技术要求,并对其在中药多指标质量控制中的应用情况进行论述。

三黄片一测多评的方法学研究

目的:探索三黄片多组分色谱峰定位方法,同时建立其多组分一测多评的含量测定方法。方法:以三黄片为研究对象,在不同色谱柱和色谱仪器上,研究保留时间法、双标法以及对照提取物法对盐酸小檗碱、黄芩苷、大黄素、大黄酚4种待测成分色谱峰定位的准确性。同时,建立一测多评法测定三黄片中4种主要有效成分含量的分析方法。结果:用保留时间法或双标法峰定位时,其待测成分峰相对保留时间与理论相对保留时间差在不同色谱柱上RSD均大于5%,而对照提取物法峰定位时,在不同条件下均可快速准确定位样品中待测成分色谱峰。进而采用一测多评法测定三黄片中4种主要有效成分的含量,结果 3批不同厂家生产的三黄片中4种主要有效成分一测多评法测定值与外标法测定值间无显著差异,相对误差均小于5%。结论:对照提取物法在不同色谱仪器和色谱柱上均能快速准确定位样品中待测成分色谱峰,准确性好。故本试验采用对照提取物法进行色谱峰定位,一测多评法测定三黄片中盐酸小檗碱、黄芩苷、大黄素、大黄酚4种有效成分含量,此方法准确、可行。

中药标准物质替代测定法技术指导原则

中药标准物质替代测定法是符合中药特点的多指标质量控制的一种有效模式。为了指导该法的建立,统一并规范该法的研究及在国家药品标准中的应用,并证明采用的方法是否适合于相应的检测要求,探讨并提出本技术指导原则。本指导原则从该法的定义与分类、定量的原理与方法、色谱峰的定位与确认、技术要求四个方面进行论述。当中药指纹图谱(特征图谱)鉴别项或多指标含量测定项采用中药标准物质替代测定法时,按照本原则进行方法学验证研究。

双标多测法Ⅰ-双标线性校正技术用于色谱峰的定性

目的:建立一种新的替代对照品模式的多指标含量测定技术——双标多测法,并应用于大黄及其制剂中5种蒽醌的分析。方法:在5台不同的高效液相色谱仪和14根不同品牌和型号的C18色谱柱上,测定大黄中5种游离蒽醌的峰面积和保留时间,再进行数据分析。定量方面,以芦荟大黄素为参照物,测得与大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的相对校正因子。定性方面,以芦荟大黄素和大黄素甲醚2个成分,使用双标线性校正法预测保留时间。结果:定量方面,相对校正因子可耐受柱温、流速和流动相比例在一定范围内的变动。定性方面,14根色谱柱的验证结果表明,双标线性校正法的预测效果明显优于相对保留时间法。结论:双标多测法在中药多指标含量测定方面有较好的实用价值和应用前景。

一测多评法测定黄连须中的5种生物碱

目的采用一测多评法同时测定黄连须中5种生物碱(盐酸小檗碱、盐酸药根碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱和盐酸巴马汀)的含量。方法以盐酸小檗碱为内参物,采用HPLC法测定其与盐酸药根碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀的相对校正因子,利用该相对校正因子计算其他4种生物碱的含量;同时利用外标法测定5种生物碱的含量,比较两种测定方法的差异,验证一测多评法的可行性和准确性。结果在线性范围内,盐酸小檗碱与盐酸药根碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀的相对校正因子分别为1.128、1.008、1.070、1.025,在不同实验条件下,相对校正因子的重复性良好,5种生物碱成分含量的计算值与实测值间无显著性差异。结论一测多评法同时测定黄连须中5种生物碱的含量是可行的、准确的。

中药整体质量控制标准体系构建的思路与方法

基于中药标准"以我为主,引领国际"的研究目标,阐述了中药质量标准体系构建的科学方法。作者所在实验室多年从事中药质量标准的研究,通过对国内外标准构建方法与思路的学习与实践,提出科学与实用为基本原则,"深入研究,浅出标准"为指导思想,符合中医理论的中药整体质量控制标准体系构建理念。中药标准体系构建主要包括基础研究与标准建立两部分工作,其中深入的基础研究是需要溯本求源,需要全面的药效物质基础及作用机制的深入探讨;同时也对如何浅出科学实用的质量标准,提出了相关建议,包括对照物质,对照图谱以及新的定量分析方法的应用等。