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Particle Swarm Optimization with Directed Mutation
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作者 王杰 李红文 《Journal of Donghua University(English Edition)》 EI CAS 2016年第5期774-780,共7页
In the standard particle swarm optimization(SPSO),the big problem is that it suffers from premature convergence,that is,in complex optimization problems,it may easily get trapped in local optima.In order to mitigate p... In the standard particle swarm optimization(SPSO),the big problem is that it suffers from premature convergence,that is,in complex optimization problems,it may easily get trapped in local optima.In order to mitigate premature convergence problem,this paper presents a new algorithm,which is called particle swarm optimization(PSO) with directed mutation,or DMPSO.The main idea of this algorithm is to "let the best particle(the smallest fitness of the particle swarm) become more excellent and the worst particle(the largest fitness of the particle swarm) try to be excellent".The new algorithm is tested on a set of eight benchmark functions,and compared with those of other four PSO variants.The experimental results illustrate the effectiveness and efficiency of the DMPSO.The comparisons show that DMPSO significantly improves the performance of PSO and searching accuracy. 展开更多
关键词 swarm fitness benchmark illustrate premature mutation searching mutation iteration trapped
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Direct detection of rpoB and katG gene mutations of Mycobacterium tuberculosis in clinical samples
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作者 Sunil Pandey Ashima Lamichhane +4 位作者 Anu Byanjankar Ansuma Kharel Chandrakala Rai Sunil Prasad Lekhak Menuka Karki 《Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine》 SCIE CAS 2017年第8期698-701,共4页
To study the rpoB and katG gene mutation rate and its markers.MethodsCross-sectional study methods were used to study Tuberculosis. A total of 45 sputum samples were collected from Annapurna Neurological Institute and... To study the rpoB and katG gene mutation rate and its markers.MethodsCross-sectional study methods were used to study Tuberculosis. A total of 45 sputum samples were collected from Annapurna Neurological Institute and Allied sciences. Then, acid fast bacilli staining were performed. Positive and negative samples were carried for conventional polymerase chain reaction identification and electrophoresis.ResultsOut of 45 samples, 3 were acid fast bacilli positive and the rest were negative. Male participants were more as compare to female participants and the mutation in rpoB and katG gene was found similar i.e. 6.66% among the total samples.ConclusionsWe can conclude that genetic mutation in Mycobacterium tuberculosis can be identified directly from the clinical samples. However, we have carried this study in less sample size and to validate research on large number of sample is recommended. 展开更多
关键词 Mycobacterium tuberculosis direct detection RPOB KATG mutation Nepal
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Hepatitis C virus protease inhibitor-resistance mutations: Our experience and review 被引量:3
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作者 Shuang Wu Tatsuo Kanda +2 位作者 Shingo Nakamoto Fumio Imazeki Osamu Yokosuka 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2013年第47期8940-8948,共9页
Direct-acting antiviral agents(DAAs)for hepatitis C virus(HCV)infection are one of the major advances in its medical treatment.The HCV protease inhibitors boceprevir and telaprevir were the first approved DAAs in the ... Direct-acting antiviral agents(DAAs)for hepatitis C virus(HCV)infection are one of the major advances in its medical treatment.The HCV protease inhibitors boceprevir and telaprevir were the first approved DAAs in the United States,Europe,and Japan.When combined with peginterferon plus ribavirin,these agents increase sustained virologic response rates to70%-80%in treatment-na?ve patients and previoustreatment relapsers with chronic HCV genotype 1 infection.Without peginterferon plus ribavirin,DAA monotherapies increased DAA-resistance mutations.Several new DAAs for HCV are now in clinical development and are likely to be approved in the near future.However,it has been reported that the use of these drugs also led to the emergence of DAA-resistance mutations in certain cases.Furthermore,these mutations exhibit cross-resistance to multiple drugs.The prevalence of DAA-resistance mutations in HCV-infected patients who were not treated with DAAs is unknown,and it is as yet uncertain whether such variants are sensitive to DAAs.We performed a population sequence analysis to assess the frequency of such variants in the sera of HCV genotype 1-infected patients not treated with HCV protease inhibitors.Here,we reviewed the literature on resistance variants of HCV protease inhibitors in treatment na?ve patients with chronic HCV genotype 1,as well as our experience. 展开更多
关键词 direct-acting ANTIVIRAL agent HEPATITIS C virus PROTEASE INHIBITOR Resistance mutation Sequence analysis
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基于改进帝王蝶算法的最大似然DOA估计 被引量:2
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作者 赵小梅 丁勇 王海涛 《广西师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第3期131-140,共10页
针对传统最大似然波达方向(maximum likelihood direction of arrival,ML-DOA)估计存在计算量大、估计精度差等问题,本文提出一种采用改进帝王蝶优化算法(improved monarch butterfly optimization algorithm,IMBO)的ML-DOA估计方法。I... 针对传统最大似然波达方向(maximum likelihood direction of arrival,ML-DOA)估计存在计算量大、估计精度差等问题,本文提出一种采用改进帝王蝶优化算法(improved monarch butterfly optimization algorithm,IMBO)的ML-DOA估计方法。IMBO算法通过精英反向学习策略对初始帝王蝶种群进行优化,得到适应度值较优的初始帝王蝶个体,进而能够改善帝王蝶种群的多样性;引入差分进化算法启发的变异操作以及自适应策略对帝王蝶个体的寻优方式进行改进,扩大了算法的搜索空间;引入了高斯-柯西变异算子,自适应调整变异步长,避免算法陷入局部最优。将IMBO应用于ML-DOA,实验表明,与传统的DOA估计算法相比,在不同信源数目、信噪比以及种群数量下,本文提出的算法收敛性能更好,均方根误差更低,运算量更小。 展开更多
关键词 波达方向 最大似然估计 帝王蝶算法 精英反向学习 自适应策略 变异算子
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定向引入N⁃糖基化位点促进芳基醇氧化酶热稳定性及底物亲和力
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作者 曹查 朱作华 +3 位作者 龚文兵 周映君 谢纯良 彭源德 《食品研究与开发》 CAS 2024年第7期165-173,共9页
芳基醇氧化酶在木质素降解过程中发挥重要作用,N-糖基化修饰影响其酶学性质。该文旨在通过研究刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)来源的芳基醇氧化酶N-糖基化,来提高其热稳定性和底物亲和力。利用毕赤酵母GS115表达系统和定点突变技术,构建表... 芳基醇氧化酶在木质素降解过程中发挥重要作用,N-糖基化修饰影响其酶学性质。该文旨在通过研究刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)来源的芳基醇氧化酶N-糖基化,来提高其热稳定性和底物亲和力。利用毕赤酵母GS115表达系统和定点突变技术,构建表达6种芳基醇氧化酶突变体蛋白,并对纯化后的野生型和突变体酶进行酶学性质和热稳定性分析。结果表明,芳基醇氧化酶N89和N249糖基化位点突变导致最适温度和70℃时酶热稳定性降低;在这个过程中,将其引入新的糖基化位点后的突变体,其最适酸碱度没有变化,最适温度以及70℃下的热稳定程度都明显优于野生型;以藜芦醇为底物时,突变体[AAO(F-X-N-X-T)]与底物亲和力最高。N-糖基化主要影响芳醇氧化酶的热稳定性,其中N89和N249位点的N-糖基化对酶的热稳定性起重要作用;引入N-糖基化位点[AAO(F-X-N-X-T)]能获得具有高活力和高稳定性的芳醇氧化酶。 展开更多
关键词 芳基醇氧化酶 N-糖基化 定点突变 重组表达 酶学性质
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用于降解邻苯二甲酸酯的红球菌来源酰胺酶RhoⅡ突变改造
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作者 黄慧芹 徐友强 +2 位作者 李微微 张成楠 李秀婷 《食品科学技术学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第4期125-134,共10页
邻苯二甲酸酯(phthalate esters,PAEs)具有生理毒性,去除毒性的关键在于侧链酯键的完全水解。红球菌源酰胺酶RhoⅡ是作用于邻苯二甲酸单酯酯键的水解酶,但不能水解PAEs。采用计算机模拟和定点突变的方法,对RhoⅡ进行改造,以实现水解PAE... 邻苯二甲酸酯(phthalate esters,PAEs)具有生理毒性,去除毒性的关键在于侧链酯键的完全水解。红球菌源酰胺酶RhoⅡ是作用于邻苯二甲酸单酯酯键的水解酶,但不能水解PAEs。采用计算机模拟和定点突变的方法,对RhoⅡ进行改造,以实现水解PAEs的目的。将RhoⅡ与邻苯二甲酸单丁酯(monobutyl phthalate,MBP)进行分子对接,结果显示,RhoⅡ以Lys200、Arg185的R基稳定MBP的羧基,MBP与RhoⅡ的两个单体均形成氢键相互作用。位点突变表明,Asp39、Lys127和Cys160构成了RhoⅡ的催化三联体,作为活性中心存在于酶的疏水凹槽内。此外,通过定点突变获得了具有水解PAEs的突变酶F44N,与原酶相比,其水解邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)、邻苯二甲酸二异丁酯(diisobutyl phthalate,DIBP)的能力显著提升,这是由于苯丙氨酸突变为天门冬酰胺后,明显削弱了酶对底物的空间位阻作用,使酶的底物结合空腔体积增大,DBP、DIBP能够与酶进行结合,实现酯键水解。结合突变前后对接结果推测,突变影响酶的底物结合空腔,导致突变酶不能有效催化邻苯二甲酸单酯。通过验证RhoⅡ的催化活性中心,突变关键位点,实现了RhoⅡ底物谱的改变,希望可以丰富催化水解PAEs的酶资源,促进相关水解酶更好的应用。 展开更多
关键词 酰胺水解酶 邻苯二甲酸单酯 分子对接 催化三联体 定点突变
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乳腺癌核仁磷蛋白乙酰化及其修饰位点突变体的构建和表达
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作者 郝经伟 潘婷 +6 位作者 李月 朱文斌 段文博 刘立琨 岳丽玲 刘云龙 高秀丽 《解剖学报》 CAS CSCD 2024年第2期196-202,共7页
目的明确女性乳腺癌中核仁磷蛋白(NPM)乙酰化修饰水平,并通过修饰位点突变体的构建探讨其功能。方法蛋白质修饰组学方法检测对比人乳腺癌组织及癌旁正常组织(各3例)NPM乙酰化水平及乙酰化位点;基因定点突变PCR构建NPM乙酰化突变体,限制... 目的明确女性乳腺癌中核仁磷蛋白(NPM)乙酰化修饰水平,并通过修饰位点突变体的构建探讨其功能。方法蛋白质修饰组学方法检测对比人乳腺癌组织及癌旁正常组织(各3例)NPM乙酰化水平及乙酰化位点;基因定点突变PCR构建NPM乙酰化突变体,限制性内切酶(DpnI)消化及大肠埃希菌转化获得特异性突变体重组质粒;双酶切与测序验证各突变体序列准确性;瞬时转染及RT-PCR方法检测各突变体过表达效果。Western blotting验证NPM乙酰化水平,蛋白质定量组学及生物信息学分析NPM乙酰化功能。结果乳腺癌组织样本中NPM第27及第32位赖氨酸乙酰化水平分别为癌旁正常组织的2.76及2.22倍;构建的NPM乙酰化位点突变体与野生型NPM分子量一致且出现预期突变位点;转染NPM各突变体的BT-549细胞相应NPM mRNA表达水平明显升高。随着野生型NPM表达水平增加,蛋白乙酰化水平增加,27位赖氨酸发生负向突变后,修饰水平下降。NPM乙酰化可使BT-549细胞中101种蛋白表达水平发生明显变化,上述蛋白在细胞大分子生物合成,以DNA为模板的转录过程,RNA生物合成以及RNA代谢过程中富集。结论乳腺癌NPM呈高乙酰化水平并可能在细胞大分子生物合成,转录过程,RNA生物合成以及RNA代谢过程中发挥关键功能。 展开更多
关键词 乳腺癌 核仁磷蛋白乙酰化 定点突变 蛋白质组学
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枯草芽孢杆菌YvdSR蛋白转运Na^(+)关键残基的研究
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作者 张凌霄 张正来 +1 位作者 郑秀桃 姜巨全 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期56-64,共9页
对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis strain 168)双组分基因YvdSR表达的双组分蛋白YvdSR进行功能鉴定,得出YvdSR具有转运Na^(+)/Li^(+)功能,为探究YvdSR离子转运机制,分别对两种组分作同源序列比对,从每种组分中筛选出完全保守的酸性氨... 对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis strain 168)双组分基因YvdSR表达的双组分蛋白YvdSR进行功能鉴定,得出YvdSR具有转运Na^(+)/Li^(+)功能,为探究YvdSR离子转运机制,分别对两种组分作同源序列比对,从每种组分中筛选出完全保守的酸性氨基酸残基并进行氨基酸残基定点突变。结果表明,YvdS和YvdR共有的E13在同源物中完全保守且突变为丙氨酸后均失去Na^(+)(Li^(+))/H^(+)逆向转运活性,说明两种组分的E13均是蛋白质行使功能不可或缺的,YvdS的E13A经回复突变后可恢复高水平Na^(+)(Li^(+))/H^(+)逆向转运活性,YvdR的E13A经回复突变后仍失去Na^(+)(Li^(+))/H^(+)逆向转运活性,表明YvdS和YvdR在Na^(+)(Li^(+))/H^(+)逆向转运中行使不同功能。 展开更多
关键词 Na^(+)/H^(+)逆向转运 YvdSR 膜蛋白 定点突变
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基于优化暂态零序方向与改进首半波的综合决策选线方法
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作者 王冰清 李蔚凡 林超 《自动化应用》 2024年第2期65-68,71,共5页
针对现有小电流接地选线判据适应性较差、选线精度较低的问题,提出了基于优化暂态零序方向与改进首半波的综合决策选线方法,通过带通数字滤波器的设计及暂态首半波特性分析,综合利用首半波短窗、首半波长窗以及带通滤波数据窗内极性满... 针对现有小电流接地选线判据适应性较差、选线精度较低的问题,提出了基于优化暂态零序方向与改进首半波的综合决策选线方法,通过带通数字滤波器的设计及暂态首半波特性分析,综合利用首半波短窗、首半波长窗以及带通滤波数据窗内极性满足特性的采样点统计,确定各自相关系数,形成综合选线判据。基于该综合决策选线方法开发了对应的选线保护装置,并进行了RTDS动模测试及真型试验。结果表明,该选线方法能适应各种系统运行方式及故障条件,验证了其有效性和可靠性。 展开更多
关键词 暂态 突变量 带通滤波 零序方向 首半波 数据窗
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Mutated elements of a complex promoter (Amh) can help to demonstrate the role of certain elements in controlling differential gene expression 被引量:1
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作者 David W. Dresser 《American Journal of Molecular Biology》 2012年第4期351-358,共8页
Amh is a single copy gene which is expressed in different ways during mammalian development. Several potential promoter elements have been identified using physiological experimentation and on the basis of interspecif... Amh is a single copy gene which is expressed in different ways during mammalian development. Several potential promoter elements have been identified using physiological experimentation and on the basis of interspecific sequence comparison. The role of putative promoter elements in controlling gene expression has been investigated by many workers over the last two decades and here by individually mutating each element. Expression was measured in vitro in cells of Sertoli descent by flowcytometry using EGFP as a reporter gene. Three lines of murine cells were used;pre- and post-pubertal Sertoli and granulosa cells. Differences between the three lines of cells, support the view that differentiation in this in vitro model system is likely to be at the level of available transcription factors at given points in development. 展开更多
关键词 Anti-Mullerian HORMONE SDM Site directed mutation Murine SMAT-1 TM4 SERTOLI CELL Lines KK1 GRANULOSA CELL Line
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吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶突变体的构建和酶学性质表征 被引量:1
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作者 张颖 王佳莹 +3 位作者 王红静 刘钏 檀建新 石楠 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期63-71,共9页
根据茂源链霉菌谷氨酰胺转氨酶点突变的结果,用重叠延伸PCR法构建了3个吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶突变体Tyr81ValGly82Asn、Tyr133Phe、Tyr360Ala,在巴斯德毕赤酵母GS115中表达并对其酶学特性进行了表征。结果表明,野生型和3个突变体的... 根据茂源链霉菌谷氨酰胺转氨酶点突变的结果,用重叠延伸PCR法构建了3个吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶突变体Tyr81ValGly82Asn、Tyr133Phe、Tyr360Ala,在巴斯德毕赤酵母GS115中表达并对其酶学特性进行了表征。结果表明,野生型和3个突变体的最适温度为40℃,最适pH 7;除了甘油外,其他有机试剂都降低了TGase的酶活力;与野生型相比,突变体Tyr81ValGly82Asn、Tyr133Phe和Tyr360Ala的比活力分别提高了9%、85%和30%;3个突变体与野生型相比,K_(m)、K_(cat)和K_(cat)/K_(m)值有所升高,表明突变可能降低了TGase与底物的亲和力,却加速了其催化效率。上述结果为通过点突变提高吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶酶活力提供了试验依据和途径。 展开更多
关键词 谷氨酰胺转氨酶 定点突变 巴斯德毕赤酵母 吸水链霉菌 酶学性质
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面向递增累积型缺陷的灰盒模糊测试变异优化 被引量:1
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作者 杨克 贺也平 +3 位作者 马恒太 董柯 谢异 蔡春芳 《软件学报》 EI CSCD 北大核心 2023年第5期2286-2299,共14页
大量访问越界、内存耗尽、性能故障等缺陷是输入中有效数据的规模过大,超过临界值引起的.而现有灰盒模糊测试技术中的数据依赖识别和变异优化技术大都针对固定规模输入数据格式,对规模递增输入数据的构造效率不高.为此,针对这类累积型... 大量访问越界、内存耗尽、性能故障等缺陷是输入中有效数据的规模过大,超过临界值引起的.而现有灰盒模糊测试技术中的数据依赖识别和变异优化技术大都针对固定规模输入数据格式,对规模递增输入数据的构造效率不高.为此,针对这类累积型缺陷模糊测试对应的状态特征值最优化问题,提出一种对特征值依赖的输入数据的格式判别和差分变异方法.根据引发特征值最值更新的有效变异的位置分布和发现频次特征,判别待发现缺陷状态优化是否依赖于输入中相关数据规模的增长,将引发最值更新的有效变异内容应用于规模递增输入数据生成,提升该类累积型缺陷的复现和定向测试效率.依据该思想,实现了模糊测试工具Jigsaw,在测评实验数据集上的实验结果表明提出的判别方法能够高效地区分特征值依赖的输入数据组织形式,且提出的差分变异方法显著提升了需要大量输入才能触发累积型缺陷的复现效率. 展开更多
关键词 定向测试 最优化 累积型缺陷 规模递增 格式判别 差分变异
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Bacillus stearothermophilus NO2环糊精葡萄糖基转移酶Leu277突变提高α-环糊精产量 被引量:1
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作者 孔德民 左方圆 +1 位作者 吴敬 王蕾 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第15期1-7,共7页
环糊精葡萄糖基转移酶(cyclodextrin glucosyltransferase,CGTase)能够以淀粉为底物发生环化反应生成环糊精,包括α-环糊精(α-cyclodextrin,α-CD)、β-环糊精及γ-环糊精,其中α-环糊精产量低且易降解。该研究选择Bacillus stearother... 环糊精葡萄糖基转移酶(cyclodextrin glucosyltransferase,CGTase)能够以淀粉为底物发生环化反应生成环糊精,包括α-环糊精(α-cyclodextrin,α-CD)、β-环糊精及γ-环糊精,其中α-环糊精产量低且易降解。该研究选择Bacillus stearothermophilus NO2来源的CGTase,考察其突变体E142P、L277M、L277F、E142P/L277M、E142P/L277F、L277M/N353A及L277F/N353A以可溶性淀粉为底物生产α-CD的能力。与野生型相比,最优突变体为E142P/L277M,α-环糊精产量提高1.7 g/L,且在产物中占比提高14.3%。分子动力学(molecular dynamics,MD)模拟结果表明,E142P/L277M突变体中2个突变位点相互影响较小。此外,L277M/N353A催化效果较差,MD结果表明该突变体整体结构变化较大且溶剂可及表面积增大,不利于转糖苷反应的发生。该研究为CGTase的分子改造提高环化反应活性以及CGTase在α-环糊精工业化生产中提升产量提供了新思路。 展开更多
关键词 环糊精葡萄糖基转移酶 可溶性淀粉 Α-环糊精 定点突变 环化反应
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半理性设计提高甲酸脱氢酶(Cb FDH)活力及热稳定性 被引量:1
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作者 倪晗朦 胡孟凯 +4 位作者 张恒维 张显 潘学玮 饶志明 周楠迪 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1-8,共8页
甲酸脱氢酶(formate dehydrogenase,FDH)是NADH循环再生的最佳酶之一,广泛应用于食品、医药和化工等行业。但是野生型甲酸脱氢酶普遍存在酶活低、催化效率差等缺点,导致产品转化率较低,影响产品的工业化生产。为了获得具有更佳催化性能... 甲酸脱氢酶(formate dehydrogenase,FDH)是NADH循环再生的最佳酶之一,广泛应用于食品、医药和化工等行业。但是野生型甲酸脱氢酶普遍存在酶活低、催化效率差等缺点,导致产品转化率较低,影响产品的工业化生产。为了获得具有更佳催化性能的甲酸脱氢酶,作者以博伊丁假丝酵母(Candida boidinii)来源的甲酸脱氢酶为模板,利用HOTSPOT WIZARD v3.1进行三维结构模拟预测,构建了P68G、Q197K两个突变体,比酶活较野生型分别提高了11%和33%。这是由于P68G氨基酸残基侧链的苯环被氢取代,减少了甲酸盐底物进入口袋的空间位阻;而Q197K侧链酰胺基突变为胺丁基增强了酶的柔性。然而这两个突变点对甲酸脱氢酶的热稳定性产生了负面影响,因此在I239位引入半胱氨酸突变与C262构成二硫键以提高其热稳定性,最终获得一株热稳定性显著提高,比酶活较野生型提高31%、较I239C提高45%的突变株Cb FDH Q197K/I239C。通过半理性预测蛋白质结构提高了甲酸脱氢酶的活力和热稳定性,为高效构建性能稳定、还原力强的甲酸脱氢酶提供了理论基础。 展开更多
关键词 甲酸脱氢酶 半理性设计 博伊丁假丝酵母 定点突变 辅酶循环
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活性口袋关键色氨酸对几丁质酶Chi304催化性质的研究
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作者 田晓倩 卢海强 +2 位作者 伍宁丰 田健 关菲菲 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期76-82,共7页
几丁质酶中存在结合口袋及水解活性位点,关键氨基酸与底物几丁质的结合可调控酶的水解活性。以嗜热几丁质酶Chi304为研究材料,采用同源建模分析其高级结构,发现在其底物结合口袋附近存在2个色氨酸(W140与W272),将其定点突变为丙氨酸后,... 几丁质酶中存在结合口袋及水解活性位点,关键氨基酸与底物几丁质的结合可调控酶的水解活性。以嗜热几丁质酶Chi304为研究材料,采用同源建模分析其高级结构,发现在其底物结合口袋附近存在2个色氨酸(W140与W272),将其定点突变为丙氨酸后,采用高效液相色谱检测酶的水解产物,并进一步分析水解产物三乙酰壳三糖(DP_(3))与二乙酰壳二糖(DP_(2))的比例(DP_(3)/DP_(2)),用于评估突变体的效果。结果表明,突变体W140A、W272A与W140/272A水解胶体几丁质产物DP_(3)/DP_(2)分别较野生型提升23.3%、45.7%与80.0%。由此表明,W140与W272是影响酶与底物结合的关键氨基酸,将其突变为丙氨酸可提升Chi304的内切活力,降低外切活力。 展开更多
关键词 几丁质酶 定点突变 几丁寡糖 理性设计
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新城疫病毒M蛋白247位赖氨酸对其功能的影响
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作者 彭听雨 杨冰欢 +6 位作者 谭磊 孙英杰 宋翠萍 刘炜玮 廖瑛 丁铲 仇旭升 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第2期22-27,共6页
新城疫病毒(NDV)基质蛋白(M)作为病毒核糖核蛋白复合体与糖蛋白之间的桥梁,协调了病毒粒子的组装过程以驱动病毒的出芽。类似于大多数副黏病毒M蛋白,NDV的M蛋白具有核质穿梭特点,其出入核依赖于自身携带的出核信号(NES)和入核信号(NLS)... 新城疫病毒(NDV)基质蛋白(M)作为病毒核糖核蛋白复合体与糖蛋白之间的桥梁,协调了病毒粒子的组装过程以驱动病毒的出芽。类似于大多数副黏病毒M蛋白,NDV的M蛋白具有核质穿梭特点,其出入核依赖于自身携带的出核信号(NES)和入核信号(NLS)。通常NLS是一簇多数由碱性氨基酸组成的序列。经对比发现,NDV Herts/33强毒株与La Sota疫苗株M蛋白NLS氨基酸组成存在差异,即247位氨基酸存在赖氨酸(K)/精氨酸(R)替换。为了探究两种NLS对于M蛋白功能有何影响,本试验构建了p3XFLAG-Herts/33-WT-M和p3XFLAG-Herts/33-K247R重组表达真核质粒,并利用Western blot及间接免疫荧光实验检验两种信号在M蛋白入核、出核以及出芽方面的差异。结果显示,R247K突变改变了M蛋白的核质分布,使位于胞质中的M蛋白含量增高,从而提高了病毒样颗粒(VLP)的出芽效率。本研究为M蛋白在NDV出芽中的信号调节机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 新城疫病毒 基质蛋白 点突变 病毒样颗粒
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定点突变对决明Kunitz抑制剂抑制活性的影响
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作者 唐婕 黄斌翰 +2 位作者 李文杰 周嘉裕 廖海 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第12期2591-2597,共7页
【目的】决明Kunitz胰蛋白酶抑制剂1(Cassia obtusifolia Kunitz trypsin inhibitor 1,CoTI1)是一类具有β-三叶草结构的功能多肽,探究定点突变对其抑制活性的影响,对CoTI1的结构研究具有重要意义。【方法】基于CoTI1结构分析,分别将位... 【目的】决明Kunitz胰蛋白酶抑制剂1(Cassia obtusifolia Kunitz trypsin inhibitor 1,CoTI1)是一类具有β-三叶草结构的功能多肽,探究定点突变对其抑制活性的影响,对CoTI1的结构研究具有重要意义。【方法】基于CoTI1结构分析,分别将位于顶部盖子β2和β3折叠之间的Cys44,以及位于底部β-桶β9折叠内的Tyr134和Lys135这3个位点的氨基酸残基突变为丙氨酸(Ala),将各突变体进行蛋白表达之后再检测其对牛胰蛋白酶和菜青虫类胰蛋白酶的抑制作用。【结果】与野生型CoTI1相比,CoTI1^(C44D)对牛胰蛋白酶的抑制活性升高41.00%,CoTI1^(Y134D)和CoTI1^(K135D)对牛胰蛋白酶的抑制活性分别下降45.66%和36.73%;CoTI1^(C44D)、CoTI1^(Y134D)和CoTI1^(K135D)对菜青虫类胰蛋白酶的抑制活性分别下降46.94%、49.00%和38.11%。【结论】Cys44、Tyr134和Lys135参与了β-三叶草结构的形成,是稳定CoTI1的空间结构及抑制活性的重要残基,为CoTI1的结构研究奠定了重要的理论基础。 展开更多
关键词 决明 Kunitz胰蛋白酶抑制剂1 β-三叶草结构 定点突变 抑制活性
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Cys对近红外荧光蛋白PAiRFP1光谱学行为的影响研究
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作者 张玉琴 张芝兰 +2 位作者 许梅 赖大坤 冯娟 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2023年第S01期275-276,共2页
PAiRFP1是一种以细菌光敏色素为模板,改造得到的光激活荧光蛋白。与其他光激活荧光蛋白相比,它最大的优势是激发、发射都在近红外区域。本论文围绕该蛋白中含有的8个半胱氨酸残基,开展了定点突变、光谱学检测等工作,发现(1)在8个单突变... PAiRFP1是一种以细菌光敏色素为模板,改造得到的光激活荧光蛋白。与其他光激活荧光蛋白相比,它最大的优势是激发、发射都在近红外区域。本论文围绕该蛋白中含有的8个半胱氨酸残基,开展了定点突变、光谱学检测等工作,发现(1)在8个单突变体中,仅有Cys-29突变改善了光激活蛋白的分子亮度,其它突变都削弱了近红外荧光;(2)伴随着环境氧化、还原条件的改变,C29S突变近红外荧光显著降低,这说明该位点的半胱氨酸残基对于维持该近红外荧光蛋白在氧化还原环境中的稳定性具有重要作用,相关机理尚待深入研究。 展开更多
关键词 细菌光敏色素 近红外荧光蛋白 定点突变
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LGALS3BP 3’UTR荧光素酶报告基因载体构建及鉴定 被引量:1
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作者 刘翠华 邓林林 +8 位作者 赵方新 红梅 武建强 张烜 李奕君 温琪 郭冉 刘奕彤 马启豪 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第5期8-14,共7页
目的构建LGALS3BP(lectin,galactoside-binding,soluble,3 binding protein,LGALS3BP)基因3’非编码区(3’-untranslated region,3’UTR)的野生型及突变型荧光素酶报告基因重组载体并进行鉴定,以备进一步研究miRNA对LGALS3BP基因的调控... 目的构建LGALS3BP(lectin,galactoside-binding,soluble,3 binding protein,LGALS3BP)基因3’非编码区(3’-untranslated region,3’UTR)的野生型及突变型荧光素酶报告基因重组载体并进行鉴定,以备进一步研究miRNA对LGALS3BP基因的调控。方法Targetscan软件预测LGALS3BP 3’UTR上的miRNA结合位点;以人肝癌细胞系SMMC-7721基因组DNA为模板,进行PCR扩增,获得野生型LGALS3BP基因3’UTR片段,经双酶切将目的片段定向插入报告基因载体pGL3-Control中,将克隆好的重组载体转化大肠埃希菌DH5α感受态细胞进行扩增,采用菌落PCR及测序监定重组子。设计位点突变型LGALS3BP 3’UTR扩增引物,以构建的野生型LGALS3BP 3’UTR重组质粒为模板,采用重叠PCR及定点突变PCR技术进行扩增分别构建单独位点及双位点突变型重组荧光素酶报告基因载体。结果野生型LGALS3BP 3’UTR重组质粒经菌落PCR鉴定,可见871 bp的目的基因片段,大小与预期相符;测序结果表明,插入序列与LGALS3BP 3’UTR序列完全一致且插入方向正确。Targetscan软件预测到LGALS3BP 3’UTR区有两个感兴趣的miRNA结合位点。突变型LGALS3BP 3’UTR重组质粒测序鉴定结果表明,单独位点及双位点突变型重组质粒中均成功引入结合位点突变。结论成功构建LGALS3BP的3’UTR野生型(pGL3-LGAL-W-3’UTR)、两个单独位点突变型(pGL3-LGAL-M1-3’UTR和pGL3-LGAL-M2-3’UTR)及双位点突变型(pGL3-LGAL-M-3’UTR)重组荧光素酶报告基因载体,为后续研究miRNA对LGALS3BP基因的调控奠定基础。 展开更多
关键词 LGALS3BP 3’UTR 报告基因载体构建 定点突变
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体外定点突变体或CRISPR/Cas9介导的敲入突变体快速筛选方法的建立
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作者 宋春林 张雨晴 +2 位作者 翟玉静 张刚 王颖 《精准医学杂志》 2023年第3期254-258,263,共6页
目的 探讨建立一种体外定点突变体或CRISPR/cas9介导的敲入突变体的快速筛选方法,以提高突变体筛选效率,降低实验成本。方法 针对构建的体外定点突变体或CRISPR/Cas9介导的敲入突变体,采用3′端第1、2和3个核苷酸分别与突变序列相匹配... 目的 探讨建立一种体外定点突变体或CRISPR/cas9介导的敲入突变体的快速筛选方法,以提高突变体筛选效率,降低实验成本。方法 针对构建的体外定点突变体或CRISPR/Cas9介导的敲入突变体,采用3′端第1、2和3个核苷酸分别与突变序列相匹配的筛选引物进行聚合酶链式反应(PCR),通过琼脂糖凝胶电泳检测是否有特异性扩增条带。结果 利用特异性突变筛选引物进行PCR在正确的突变体中有效地扩增出了DNA条带,而在未成功突变的样本中则无法扩增,琼脂糖凝胶电泳显示有DNA扩增条带,证明正确突变体筛选成功。结论本研究建立的突变体快速筛选方法能够简便快速地筛选出正确突变体,明显简化了突变体的鉴定过程,可有效降低实验成本,提高工作效率。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 诱变 定点 突变 CRISPR/Cas9 基因敲入技术 诱变力试验
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