LncRNA SNHG1在同型半胱氨酸致足细胞焦亡中的作用

目的探讨lncRNA SNHG1在同型半胱氨酸诱导足细胞焦亡中的作用。方法选取Cbs^(+/-)小鼠随机分成2组,设置正常饮食组(ND)和高蛋氨酸饮食组(HMD),Western blot检测Caspase-1、Cleaved Caspase-1和NLRP3的蛋白表达水平。体外培养小鼠肾小球足细胞,设置对照组(Control,0μmol/L Hcy)和同型半胱氨酸干预组(Hcy,80μmol/L Hcy);足细胞转染慢病毒后设置lncSNHG1过表达阴性对照组(OE-NC)和lncSNHG1过表达组(OE-SNHG1);lncSNHG1过表达阴性对照+同型半胱氨酸干预组(OE-NC+Hcy)和lncSNHG1过表达+同型半胱氨酸干预组(OE-SNHG1+Hcy),干预细胞48 h后,实时荧光定量PCR检测Hcy干预的足细胞中lncSNHG1表达水平;Western blot和免疫荧光技术检测足细胞中焦亡相关蛋白Caspase-1、Cleaved Caspase-1、NLRP3及GSDMD和GSDMD-N表达水平;ELISA检测足细胞中焦亡介导的炎症相关因子IL-1β和IL-18含量。结果(1)动物实验中:与正常饮食组(ND)相比,高蛋氨酸饮食组(HMD)中焦亡相关蛋白Caspase-1、Cleaved Caspase-1和NLRP3及GSDMD、GSDMD-N表达水平增高;(2)细胞实验中:与对照组(Control)相比,同型半胱氨酸干预组(Hcy)中焦亡相关蛋白Caspase-1、Cleaved Caspase-1和NLRP3及GSDMD、GSDMD-N表达水平增高,焦亡介导炎症因子IL-1β和IL-18含量增高;(3)细胞实验中:与对照组(Control)相比,同型半胱氨酸干预组(Hcy)中lncSNHG1表达水平增高;足细胞转染lncSNHG1慢病毒后,与Control组及OE-NC组相比,OE-SNHG1组lncSNHG1表达水平增高;(4)细胞实验中:与OE-NC+Hcy组相比,OE-SNHG1+Hcy组中焦亡相关蛋白Caspase-1、Cleaved Caspase-1和NLRP3及GSDMD、GSDMD-N表达水平增高,焦亡介导炎症因子IL-1β和IL-18含量增高。结论lncRNA SNHG1在Hcy诱导的足细胞焦亡过程中起到促进作用。

Myod1通过调节lncRNA SNHG15和miR-24-3p对氧糖剥夺SH-SY5Y细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨肌源性分化蛋白1(Myod1)对氧糖剥夺(OGD)诱导的SH-SY5Y细胞增殖抑制和凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测正常对照组研究对象和缺血性脑梗死组患者外周血及正常培养的SH-SY5Y细胞(对照组)和OGD细胞模型(OGD组)细胞中Myod1和长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因15(SNHG15)mRNA表达水平。分别采用si-Myod1、pcDNA3.0-Myod1、si-SNHG15、pcDNA3.0-SNHG15、si-NC、空载质粒(Vector)、miR-NC和miR-24-3p模拟物(miR-mimics)质粒转染SH-SY5Y细胞后,进行OGD处理,将SH-SY5Y细胞分为对照组、OGD组、OGD+Vector组、OGD+Myod1组、OGD+si-NC组、OGD+si-Myod1组、OGD+si-SNHG15组、OGD+si-SNHG15+Vector组、OGD+si-SNHG15+Myod1组、OGD+miR-NC组、OGD+miR-mimics组、OGD+miR-mimics+Vector组和OGD+miR-mimics+SNHG15组。采用CCK-8法检测各组细胞活性,采用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)染色法检测各组EdU阳性细胞率,采用原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测各组TUNEL阳性细胞率,采用Western blotting法检测各组细胞中裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cleaved caspase-9)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。染色质免疫共沉淀(CHIP)法评估Myod1和SNHG15之间的关联。双荧光素酶报告基因实验评估Myod1与SNHG15及SNHG15与miR-24-3p的靶向关系。结果:与正常对照组比较,缺血性脑梗死组患者外周血中Myod1和SNHG15 mRNA表达水平均升高(P<0.05)。与对照组比较,OGD组细胞中Myod1和SNHG15 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05)。与OGD组比较,48和72 h时OGD+Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率均降低(P<0.01),TUNEL阳性细胞率升高(P<0.01);OGD+si-Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率均升高(P<0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P<0.01)。Myod1可与SNHG15的启动子序列结合。SNHG15可吸附miR-24-3p,Myod1与SNHG15及SNHG15与miR-24-3p存在靶关系。敲低SNHG15后,与OGD组比较,48和72 h时OGD+si-SNHG15组细胞活性和EdU阳性细胞率均升高(P<0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P<0.01),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.01);与OGD+si-SNHG15组比较,48和72 h时OGD+si-SNHG15+Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率降低(P<0.05),TUNEL阳性细胞率升高(P<0.05),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高(P<0.05),Bcl-2的蛋白表达水平降低(P<0.05)。过表达miR-24-3p和SNHG15后,与OGD组比较,48和72 h时OGD+miR-mimics组细胞活性和EdU阳性细胞率升高(P<0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P<0.01),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.01);与OGD+miR-mimics组比较,48和72 h时OGD+miR-mimics+SNHG15组细胞活性和EdU阳性细胞率降低(P<0.05),TUNEL阳性细胞率升高(P<0.05),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:Myod1可通过与SNHG15启动子区结合进而吸附miRNA-24,促进OGD诱导的SH-SY5Y细胞的增殖抑制和细胞凋亡。

LncRNA SNHG11通过抑制miR-184/CARM1信号轴促进卵巢癌生长

目的探讨长链非编码RNA核仁小分子RNA宿主基因11(LncRNA SNHG11)靶向调控miR-184/CARM1信号轴对卵巢癌细胞的影响及其机制。方法实时荧光定量PCR检测卵巢癌组织与细胞中LncRNA SNHG11表达及卵巢癌细胞miR-184表达。将卵巢癌SKOV3细胞分为si-NC组、si-SNHG11组、si-SNHG11+anti-NC组、si-SNHG11+anti-miR-184组、miR-NC组、miR-184 mimics组、miR-184 mimics+pcDNA组、miR-184 mimics+CARM1组,分别检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及CARM1、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达,裸鼠成瘤实验检测各组细胞在动物体内成瘤能力,双荧光素酶报告基因实验检验miR-184与LncRNA SNHG11、CARM1的靶向关系。结果LncRNA SNHG11在卵巢癌组织与细胞中表达升高,miR-184在卵巢癌细胞中表达降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-SNHG11组SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭能力下降,瘤体质量与体积减小,N-cadherin表达降低,细胞凋亡率与E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);与si-SNHG11+anti-NC组比较,si-SNHG11+anti-miR-184组SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭细胞能力升高,瘤体质量与体积增大,N-cadherin蛋白表达升高,细胞凋亡率与E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-184 mimics组SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭能力下降,瘤体质量与体积减小,N-cadherin蛋白表达降低,细胞凋亡率与E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);与miR-184 mimics+pcDNA组比较,miR-184mimics+CARM1组SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭能力升高,瘤体质量与体积增大,N-cadherin蛋白表达升高,细胞凋亡率与E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05);LncRNA SNHG11靶向调控miR-184/CARM1信号轴。结论LncRNA SNHG11通过调节miR-184/CARM1信号轴,促进卵巢癌生长。

lncRNA SNHG1靶向miR-145-5p/PDCD4轴对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)核内小RNA宿主基因1(SNHG1)靶向miR-145-5p/程序性细胞死亡因子4(PDCD4)轴对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法将H9c2细胞分为对照组(NC组)、H/R组、si-NC组、si-SNHG1组、mimic NC组、miR-145-5p mimic组、si-SNHG1+inhibitor NC组、si-SNHG1+miR-145-5p inhibitor组。除NC组外,其他组H9c2细胞均需转染对应物质后构建H/R模型。实时定量PCR(qRT-PCR)检测H9c2细胞中SNHG1、miR-145-5p表达;CCK-8法、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡;试剂盒检测H9c2细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量;Western blotting检测H9c2细胞中PDCD4、caspase 3、Bcl-2、Bax蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证SNHG1与miR-145-5p、miR-145-5p与PDCD4的关系。结果沉默SNHG1或过表达miR-145-5p可促进H/R诱导的H9c2细胞中miR-145-5p表达和细胞增殖,抑制PDCD4蛋白表达、细胞凋亡和氧化应激。miR-145-5p inhibitor减弱了沉默SNHG1对H/R诱导的H9c2细胞中miR-145-5p表达和细胞增殖的促进作用,以及对PDCD4蛋白表达、细胞凋亡、氧化应激的抑制作用。SNHG1靶向调控miR-145-5p/PDCD4轴。结论沉默SNHG1可能通过调控miR-145-5p/PDCD4轴抑制H/R诱导的H9c2细胞凋亡。

LncRNA SNHG17通过miR-384靶向AEG1对非小细胞肺癌细胞生物学行为的调控作用

目的:研究长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因17(lncRNA SNHG17)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞生物学行为的影响,并阐明其作用机制。方法:培养人NSCLC A549细胞和H1299细胞,细胞按照分组要求分别转染pcDNA3.1-NC、SNHG17过表达质粒(pcDNA3.1-SNHG17)、si-NC、SNHG17小干扰RNA(si-SNHG17)、mimics NC、微小RNA-384模拟物(miR-384mimics)、inhibitor NC、miR-384抑制剂(miR-384 inhibitor)、pcDNA3.1-星形细胞上调基因1(AEG1)和si-AEG1。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测A549细胞和H1299细胞及各组转染后细胞中lncRNA SNHG17、miR-384和AEG1 mRNA表达水平;ENCORI和TargetScan数据库预测lncRNA SNHG17与miR-384、miR-384与AEG1 mRNA之间的靶向结合作用。A549细胞分为si-NC组、si-SNHG17组、inhibitor NC组、miR-384 inhibitor组、si-NC+inhibitor NC组、si-SNHG17+inhibitor NC组、si-SNHG17+miR-384 inhibitor组、si-AEG1组、inhibitor NC+si-NC组、miR-384inhibitor+si-NC组和miR-384 inhibitor+si-AEG1组。H1299细胞分为pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-SNHG17组、mimics NC组、miR-384 mimics组、pcDNA3.1-NC+mimics NC组、pcDNA3.1-SNHG17+mimics NC组、pcDNA3.1-SNHG17+miR-384 mimics组、pcDNA3.1-AEG1组、mimics NC+pcDNA3.1-NC组、miR-384 mimics+pcDNA3.1-NC组和miR-384 mimics+pcDNA3.1-AEG1组。采用CCK-8法检测各组细胞活力,Transwell法检测各组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数,Western blotting法检测各组细胞中AEG1蛋白表达水平。结果果:H1299细胞中lncRNA SNHG17表达水平明显低于A549细胞(P<0.01)。在A549细胞中,与si-NC组比较,si-SNHG17组细胞中SNHG17表达水平明显降低(P<0.01),细胞活力、迁移细胞数和侵袭细胞数明显降低(P<0.01);在H1299细胞中,与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-SNHG17组细胞中SNHG17表达水平明显升高(P<0.01),细胞活力、迁移细胞数和侵袭细胞数明显升高(P<0.01)。在A549细胞中,与si-NC组比较,si-SNHG17组细胞中miR-384表达水平明显升高(P<0.01),AEG1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01);在H1299细胞中,与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-SNHG17组细胞中miR-384表达水平明显降低(P<0.01),AEG1 mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。ENCORI数据库预测SNHG17与miR-384有2个结合位点。在A549细胞中,与si-NC+inhibitor NC组比较,si-SNHG17+inhibitor NC组细胞中AEG1蛋白表达水平和细胞活力明显降低(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.01);与si-SNHG17+inhibitor NC组比较,si-SNHG17+miR-384inhibitor组细胞中AEG1蛋白表达水平和细胞活力明显升高(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加(P<0.01)。在H1299细胞中,与pcDNA3.1-NC+mimics NC组比较,pcDNA3.1-SNHG17+mimics NC组细胞中AEG1蛋白表达水平和细胞活力明显升高(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加(P<0.01);与pcDNA3.1-SNHG17+mimics NC组比较,pcDNA3.1-SNHG17+miR-384 mimics组细胞中AEG1蛋白表达水平和细胞活力明显降低(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.01)。在A549细胞中,与si-NC组比较,si-AEG1组细胞中AEG1蛋白表达水平和细胞活力明显降低(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.01);在H1299细胞中,与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-AEG1组细胞中AEG1蛋白表达水平和细胞活力明显升高(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加(P<0.01)。ENCORI数据库预测miR-384与AEG1有1个结合位点。在A549细胞中,与inhibitor NC+si-NC组比较,miR-384inhibitor+si-NC组细胞中细胞活力明显升高(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加(P<0.01);与miR-384 inhibitor+si-NC组比较,miR-384 inhibitor+si-AEG1组细胞中细胞活力明显降低(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.01)。在H1299细胞中,与mimics NC+pcDNA3.1-NC组比较,miR-384 mimics+pcDNA3.1-NC组细胞中细胞活力明显降低(P<0.01)、迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.01);与miR-384 mimics+pcDNA3.1-NC组比较,miR-384mimics+pcDNA3.1-AEG1组细胞中细胞活力明显升高(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加(P<0.01)。结论:lncRNA SNHG17通过miR-384靶向AEG1调控NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭。

LncRNA SNHG1通过miR-377-3p/AKT2轴对宫颈癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(lncRNA SNHG1)对宫颈癌(CC)细胞增殖、凋亡和迁移的调控机制。方法体外培养人CC细胞系SiHa、Hela、CaSki和人正常宫颈上皮细胞HUCEC,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中SNHG1、微小RNA-377-3p(miR-377-3p)和丝氨酸/苏氨酸激酶2(AKT2)mRNA的表达水平。将SNHG1小分子干扰RNA(si-SNHG1)转染Hela细胞构建SNHG1敲低细胞,并在SNHG1敲低细胞系中下调miR-377-3p表达进行验证。实验分为对照组(NC组)、si-NC组、si-SNHG1组、si-SNHG1+miR-377-3p inhibitor阴性对照组(inhibitor-NC)、si-SNHG1+miR-377-3p inhibitor组。转染48 h后,RT-qPCR检测转染效果;Western Blot检测细胞AKT2蛋白表达水平;MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;划痕愈合实验检测细胞迁移能力。双荧光素酶报告基因检测和RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)分析Hela细胞中SNHG1、miR-377-3p和AKT2的调控作用。裸鼠异种移植瘤实验、免疫组织化学染色探究敲低SNHG1对CC细胞体内生长的影响。结果与HUCEC细胞相比,不同CC细胞系中SNHG1和AKT2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),miR-377-3p表达水平显著降低(P<0.05);敲低SNHG1表达可显著上调miR-377-3p的表达水平,下调AKT2的mRNA和蛋白水平,降低Hela细胞的增殖活性、迁移与侵袭能力,并诱导细胞凋亡(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测和RIP实验证实SNHG1可靶向负调控miR-377-3p的表达,AKT2是miR-377-3p的靶标。裸鼠异种移植瘤实验结果显示,敲低SNHG1可显著抑制体内移植瘤生长(P<0.05);下调miR-377-3p可显著减弱敲低SNHG1对Hela细胞增殖、迁移和侵袭能力并可抑制体内移植瘤生长(P<0.05)。结论SNHG1可能通过海绵miR-377-3p调节AKT2表达,参与CC进展。

长链非编码RNA SNHG1靶向miR-340-5p/CCND1轴调控食管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:分析长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(LncRNA SNHG1)靶向miR-340-5p/细胞周期蛋白1(CCND1)轴调控食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法:体外培养人食管上皮细胞、食管癌细胞KYSE-30、TE-1、NEC、Eca109,qRT-PCR法测定细胞中LncRNA SNHG1、miR-340-5p、CCND1 mRNA水平。将对数期NEC细胞分为对照组、sh NC1组、sh LncRNA SNHG1组、sh NC2组、sh CCND1组、sh LncRNA SNHG1+miR-340-5p inhibitor组、sh CCND1+miR-340-5p inhibitor组。CCK-8法测定细胞增殖能力,Transwell小室法测定细胞侵袭、迁移能力,Western blot法检测CCND1、Ki-67、MMP-2蛋白表达,双荧光素酶验证miR-340-5p与LncRNA SNHG1、CCND1的靶向关系,通过裸鼠瘤内注射转染试剂进行体内试验。结果:与人食管上皮细胞相比,食管癌细胞KYSE-30、TE-1、NEC、Eca109中LncRNA SNHG1、CCND1 mRNA表达升高,miR-340-5p表达降低(P<0.05),其中NEC细胞变化最显著,所以使用NEC作为下续研究菌株。与对照组、sh NC组相比,sh LncRNA SNHG1组NEC细胞LncRNA SNHG1、OD_(450)、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2降低(P<0.05);与对照组、sh NC组相比,sh CCND1组CCND1 mRNA与蛋白表达、OD_(450)、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2表达降低(P<0.05)。miR-340-5p与LncRNA SNHG1、CCND1均靶向结合,与sh LncRNA SNHG1组相比,sh LncRNA SNHG1+miR-340-5p inhibitor组OD_(450)、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2蛋白表达升高(P<0.05);与sh CCND1组相比,sh CCND1+miR-340-5p inhibitor组OD_(450)、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2蛋白表达升高(P<0.05);裸鼠移植瘤实验进行了体内验证。结论:LncRNA SNHG1沉默可能通过调控miR-340-5p/CCND1表达抑制食管癌NEC细胞增殖、侵袭与迁移,裸鼠体内也验证了这一结果。

LncRNA SNHG16通过miR-106b-5p/PHF1轴调节结直肠癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因16(SNHG16)通过miR-106b-5p/聚梳组蛋白家族指蛋白1(PHF1)轴对结直肠癌(CRC)细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CRC组织、相邻正常组织及体外培养的CRC细胞系(LoVo、Caco-2、HCT116和SW480)和正常人结肠上皮细胞(CCD 841 CON)中SNHG16、miR-106b-5p、PHF1表达。将SW480细胞随机分组为对照组、si-NC组、si-SNHG16组、si-SNHG16+inhibitor-NC组、si-SNHG16+miR-106b-5p inhibitor组、si-PHF1组、miR-NC组、miR-106b-5p组、miR-106b-5p+pcDNA组、miR-106b-5p+pcDNA-PHF1组。采用qRT-PCR检测各组SW480细胞中SNHG16、miR-106b-5p和PHF1的表达水平。MTT法、流式细胞术和Transwell法分别检测SW480细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验验证SNHG16、miR-106b-5p和PHF1之间的相互作用。Western blot检测PHF1的蛋白水平。结果SNHG16和PHF1在CRC组织和细胞中高表达,miR-106b-5p低表达(P<0.05)。选择SNHG16表达最高的SW480细胞进行转染实验。SNHG16的下调降低了SW480细胞的增殖、迁移、侵袭,促进了SW480细胞的凋亡(P<0.05)。miR-106b-5p可与SNHG16相互作用,其抑制剂恢复沉默SNHG16对SW480细胞进展的抑制作用(P<0.05)。PHF1是miR-106b-5p的靶点,沉默PHF1可抑制SW480细胞的进展(P<0.05)。PHF1过表达恢复了miR-106b-5p对SW480细胞进展的抑制作用(P<0.05)。SNHG16通过下调miR-106b-5p促进SW480细胞中PHF1的表达(P<0.05)。结论LncRNA SNHG16通过靶向调控miR-106b-5p/PHF1轴促进CRC细胞的增殖、迁移和侵袭并抑制凋亡。

长链非编码RNA SNHG1促进肺癌细胞增殖

近年来,大量证据表明长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)在肿瘤发生发展中发挥重要的作用。本研究通过生物信息学预测发现,核仁小分子RNA宿主基因1(small nucleolar RNA host gene 1,SNHG1)无蛋白质编码功能,且主要定位于细胞质。qRT-PCR结果显示,SNHG1在肺癌细胞中的表达量显著高于正常肺上皮细胞。在肺癌细胞NCI-H1299中,敲低SNHG1发现,该细胞增殖能力明显下降;在正常肺上皮细胞BEAS-2B中,过表达SNHG1可显著促进该细胞的增殖能力。深入研究发现,SNHG1可上调CDK4和下调p27kip1在蛋白质水平的表达,而对其mRNA水平表达量无影响。此外,在肺癌临床组织中也发现SNHG1高表达,且高表达的SNHG1与肺癌瘤体大小、TNM分期和远端转移正相关,而与患者年龄及吸烟史无关。综上所述,SNHG1在肺癌中高表达,通过上调CDK4和下调p27kip1推进肺癌进程。

lncRNA SNHG1结合miR-145促进胃癌细胞增殖的机制研究

目的探讨小核仁RNA宿主基因1(SNHG1)作为竞争性内源RNA(ceRNA)竞争性结合微小RNA-145(miR-145),从而促进胃癌细胞生长的机制。方法利用Kaplan-Meier Plotter网站分析SNHG1与胃癌生存期的相关性;生物信息分析和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SNHG1在胃癌及癌旁组织中的表达及SNHG1与miR-145表达的关系;CCK8实验检测过表达及敲低SNHG1对胃癌细胞生长情况的影响;荧光素酶报告基因实验检测SNHG1与miR-145的结合情况;分别及同时上调SNHG1、miR-145后采用免疫印迹法检测β-连环蛋白(CTNNB1)、骨髓瘤病毒原癌基因(MYC)蛋白表达的变化。结果在胃癌患者中,SNHG1表达水平低者较高者总生存期延长(P=0.015)。胃癌组织SNHG1表达明显升高(P<0.05)。过表达SNHG1可以促进胃癌细胞增殖,敲低SNHG1可抑制细胞增殖;荧光素酶报告基因实验结果显示,SNHG1和miR-145能有效结合;体外实验表明,miR-145下调CTNNB1、MYC蛋白表达,SNHG1促进CTNNB1、MYC蛋白表达,且SNHG1能抑制miR-145下调CTNNB1和MYC蛋白。结论SNHG1在胃癌组织中高表达,且通过结合miR-145上调CTNNB1、MYC蛋白表达,促进胃癌细胞生长,是参与胃癌生物学行为的机制之一。

LncRNA SNHG1通过吸附miR-199a-3p促进肾透明细胞癌细胞迁移和侵袭

目的探讨LncRNA SNHG1对肾透明细胞癌细胞侵袭及转移能力的影响,并探索潜在机制。方法利用划痕实验和Transwell实验检测SNHG1对肾透明细胞癌细胞迁移和侵袭能力的影响,利用双荧光素酶报告基因实验检测SNHG1是否可结合miR-199a-3p,利用实时荧光定量PCR检测SNHG1与miR-199a-3p表达的关系。结果抑制SNHG1的表达后,细胞迁移和侵袭能力均升高(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果显示SNHG1能够吸附miR-199a-3p(P<0.01)。实时荧光定量PCR实验结果显示抑制SNHG1的表达可促进miR-199a-3p的表达(P<0.01)。结论 SNHG1可通过吸附miR-199a-3p促进肾透明细胞癌细胞迁移和侵袭。

长链非编码RNA ZFAS1和SNHG5在鼻咽癌组织中的表达及对预后的影响分析

目的探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)锌指蛋白反义链1(zinc?nger antisense 1,ZFAS1和核仁小RNA宿主基因5(small nucleolar RNA host gene 5,SNHG5)在鼻咽癌组织中的表达及对预后的影响。方法选择2013年6月至2015年6月本院收治的109例鼻咽癌患者为研究对象,所有患者均行鼻咽活检且经病理检查证实为鼻咽癌。采用实时定量PCR和荧光定量PCR检测并比较鼻咽癌组织、癌旁组织以及不同临床病理特征、不同预后患者ZFAS1和SNHG5的相对表达量。结果鼻咽癌组织中ZFAS1的相对表达量显著高于癌旁组织(P <0.05),而SNHG5的相对表达量显著低于癌旁组织(P <0.05)。不同性别、年龄患者ZFAS1和SNHG5的相对表达量比较均无显著差异(P_均> 0.05)。TNM分期Ⅲ～Ⅳ期患者ZFAS1的相对表达量显著高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P <0.05),有淋巴结转移患者ZFAS1的相对表达量显著高于无淋巴结转移患者(P <0.05);TNM分期Ⅲ～Ⅳ期患者SNHG5的相对表达量显著低于Ⅰ～Ⅱ期患者(P <0.05),有淋巴结转移患者SNHG5的相对表达量显著低于无淋巴结转移患者(P <0.05)。107例患者完成随访,随访率为98.17%。随访3年,死亡19例,存活90例。死亡患者ZFAS1的相对表达量显著高于存活患者(P <0.05),且SNHG5的相对表达量显著低于存活患者(P <0.05)。结论在鼻咽癌组织中,lncRNA ZFAS1表达上调,且预后越差,其表达水平越高;lncRNA SNHG5表达下调,且预后越差,其表达水平越低。lncRNA ZFAS1和SNHG5在评估鼻咽癌预后方面具有重要的研究意义。

长链非编码RNA SNHG1对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的探讨长链非编码RNA核仁小RNA宿主基因1(lnc RNA SNHG1)对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法纳入2019-2021年在宁夏医科大学总医院烧伤整形外科接受手术治疗的22例增生性瘢痕患者,收集其增生性瘢痕组织与瘢痕旁正常皮肤组织(瘢痕旁3 cm以内),从中分离培养成纤维细胞。采用q RT-PCR从组织和细胞水平检测SNHG1m RNA和mi R-382-3p相对表达水平。将增生性瘢痕成纤维细胞随机分为对照组、SNHG1阴性对照组(转染慢病毒空载体)、模拟物对照组(转染对照模拟物)、SNHG1阴性对照+模拟物对照组(转染慢病毒空载体和对照模拟物)、SNHG1过表达组(转染过表达慢病毒)、mi R-382-3p过表达组(转染mi R-382-3p模拟物)、SNHG1过表达+模拟物对照组(转染过表达慢病毒和对照模拟物)与SNHG1过表达+mi R-382-3p过表达组(转染过表达慢病毒和mi R-382-3p模拟物),采用q RT-PCR检测各组SNHG1、PCNA、p27 m RNA和mi R-382-3p的相对表达水平;CCK-8法检测各组细胞增殖能力;Ed U染色法检测各组细胞增殖水平;Western blotting检测各组p27和PCNA蛋白表达水平。结果与正常皮肤组织及其成纤维细胞相比,SNHG1 m RNA在增生性瘢痕组织(3.21±2.65 vs.1.14±0.61,P<0.001)及其成纤维细胞中呈高表达(0.91±0.08 vs.0.54±0.08,P<0.01),而mi R-382-3p表达下调(组织:0.53±0.34 vs.1.15±0.61,P<0.001;细胞:0.84±0.09 vs.1.01±0.004,P<0.05)。与SNHG1阴性对照组相比,SNHG1过表达组细胞增殖能力增强(0.23±0.03 vs.0.16±0.01,P<0.001),Ed U阳性细胞百分比明显增高(30.01%±5.70%vs.7.13%±4.40%,P<0.001),PCNA m RNA和蛋白相对表达水平增高(m RNA:2.97±0.33 vs.0.98±0.25,P<0.01;蛋白:2.20±0.09 vs.0.88±0.20,P<0.05),p27 m RNA和蛋白相对表达水平降低(m RNA:0.30±0.03 vs.1.42±0.15,P<0.001;蛋白:0.47±0.11 vs.1.13±0.19,P<0.05),mi R-382-3p相对表达水平降低(0.05±0.01vs.1.03±0.12,P<0.001);与SNHG1过表达+模拟物对照组相比,SNHG1过表达+mi R-382-3p过表达组细胞增殖能力减弱(0.15±0.02 vs.0.26±0.01,P<0.001),Ed U阳性细胞百分比下降(5.97%±0.33%vs.11.70%±0.87%,P<0.001),PCNA m RNA和蛋白相对表达水平降低(m RNA:0.64±0.09 vs.3.33±0.38,P<0.001;蛋白:1.70±0.36 vs.2.34±0.16,P<0.05),p27 m RNA和蛋白相对表达水平升高(m RNA:1.01±0.44 vs.0.09±0.04,P<0.05;蛋白:1.38±0.31 vs.0.50±0.09,P<0.05)。结论 SNHG1在增生性瘢痕中呈高表达,可负向调控mi R-382-3p的表达,进而促进增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,有望成为治疗增生性瘢痕的新靶点。

SNHG17通过调节miR-23b-3p和ZHX1对胶质母细胞瘤恶性表型的调控作用研究

目的研究小核仁RNA宿主基因17(SNHG17)通过miR-23b-3p和锌指结构同源框蛋白1(ZHX1)调控胶质母细胞瘤(GBM)的恶性表型的作用。方法选取2020年1月至2022年10月广西壮族自治区脑科医院神经外科诊断为GBM的33例患者的手术标本,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术检测GBM样本和癌旁正常组织中的SNHG17、miR-23b-3p和ZHX1的表达,通过Pearson相关分析评估SNHG17,miR-23b-3p及ZHX1之间的表达相关性。使用GBM细胞系A172和DK-MG作为细胞模型,利用细胞转染技术将细胞分为si-NC组(转染空白抑制剂)、si-SNHG17组(转染si-SNHG17#2)、si-SNHG17+miR-23b-3p inhibitor组(转染si-SNHG17#2+miR-23b-3p inhibitor),采用CCK-8和EdU法检测GBM细胞的增殖能力,使用Transwell实验评估GBM细胞的迁移和侵袭能力。使用qRT-PCR技术及Western blot实验检测SNHG17和miR-23b-3p的相互调节及两者对ZHX1的调控作用。结果GBM组织中的SNHG17和ZHX1表达水平高于癌旁正常组织,miR-23b-3p表达水平低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。在GBM组织中,SNHG17与miR-23b-3p的表达呈负相关(r=-0.711,P<0.05),而与ZHX1的表达呈正相关(r=0.648,P<0.05);miR-23b-3p和ZHX1的表达呈负相关(r=-0.637,P<0.05)。si-SNHG17组中miR-23b-3p表达高于si-NC组,GBM细胞的增殖、迁移、侵袭能力及ZHX1的表达水平均低于si-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。si-SNHG17+miR-23b-3p inhibitor组中miR-23b-3p表达低于si-SNHG17组,GBM细胞的增殖、迁移、侵袭能力及ZHX1的表达水平高于si-SNHG17组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SNHG17通过调节miR-23b-3p/ZHX1轴促进GBM细胞的增殖、迁移和侵袭进程,提示SNHG17可能是GBM的一个潜在的治疗靶点。

长链非编码SNHG1/miR-145/ADAM17轴在椎间盘髓核退变中的作用及其调控机制

目的 :研究长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(SNHG1)、miR-145及解整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)在椎间盘退变(IDD)组织中的表达,探讨SNHG1调控miR-145/ADAM17轴对椎间盘髓核细胞退变的影响及机制。方法 :采用qRT-PCR、免疫印迹检测30例IDD患者经手术摘除的髓核组织SNHG1、miR-145与ADAM17的表达;双荧光素酶报告基因、RNA免疫共沉淀等确定SNHG1、miR-145与ADAM17的关系;白介素(IL)-1β诱导髓核细胞建立细胞退化模型,SNHG1 siRNA或miR-145模拟物等转染后,CCK-8、流式细胞术等检测细胞增殖、凋亡以及相关分子指标的变化。结果 :相比于对照髓核组织,IDD髓核组织中SNHG1与ADAM17表达上调,miR-145表达下调,均与Pfirrmann分级显著相关。SNHG1可通过海绵作用靶向miR-145,miR-145也可靶向ADAM17的3’-非编码区(3’-UTR)抑制ADAM17蛋白表达。SNHG1沉默逆转了IL-1β诱导的髓核细胞凋亡及基质酶(基质金属蛋白酶13、ADAMTS4)合成,上调了collagenⅡ和aggrecan表达;而SNHG1过表达增强了IL-1β诱导的上述效应。结论 :SNHG1调控miR-145/ADAM17分子轴,促进髓核细胞凋亡和细胞外基质降解,参与椎间盘退变的发展变化。

长链非编码RNA SNHG1与儿童急性髓性白血病患病风险及预后的关联分析

目的:评估长链非编码RNA小核RNA宿主基因1(long non-coding RNA small nucleolar RNA host gene 1,lnc-SNHG1)在儿童AML患者中的表达水平与儿童AML患者的临床特征和预后的关联。方法:连续纳入209例儿童AML初治患者并纳入67例进行骨髓活检且年龄、性别与入组患者相匹配的非恶性血液疾病患者作为对照,记录所有儿童AML患者的基线资料。于治疗前采集所有受试者骨髓样本,并用qRT-PCR检测骨髓单个核细胞中lnc-SNHG1的表达水平。评估患者治疗应答并持续随访和计算患者的无事件生存期(EFS)和总体生存期(OS)。结果:儿童AML患者的lnc-SNHG1表达量显著高于对照者(P<0.001),其对儿童AML患病风险预测作用的ROC曲线下面积为0.837(95%CI:0.785-0.888),并且lnc-SNHG1高表达与不良的预后危险度分级相关(P=0.004)。此外,lnc-SNHG1高表达与儿童AML患者较低的完全缓解(CR)率相关(P<0.001),进一步的多元逻辑回归分析表明,lnc-SNHG1高表达是儿童AML患者不容易达到CR的独立预测因素(P<0.001)。此外,与对照者相比,lnc-SNHG1高表达的儿童AML患者EFS时间(P<0.001)和OS时间(P<0.001)均较短。lnc-SNHG1高表达是儿童AML患者EFS时间(P=0.001)和OS时间(P=0.015)较短的独立预测因素。结论:lnc-SNHG1在儿童AML患者中高表达,并且可以作为患者不良预后的独立预测标记物。

LncRNA SNHG1在甲状腺乳头状癌中的表达及其对细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA核仁小分子RNA宿主基因(SNHG1)在甲状腺乳头状癌(PTC)组织和细胞中的表达及其对PTC细胞增殖与凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测40例行手术治疗的PTC患者的肿瘤组织和对应癌旁组织中SNHG1的表达水平,同时检测不同PTC细胞系(K1、BCPAP和TPC-1)中SNHG1的表达情况。采用si-SNHG1-2、si-SNHG1-3转染BCPAP和TPC-1细胞,另转染si-NC作为阴性对照组,MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡变化; Western blotting法检测p53通路相关蛋白的表达变化。结果与癌旁正常组织比较,PTC组织中SNHG1表达增加(2. 72±0. 97 vs. 4. 72±1. 14,P<0. 05); K1、BCPAP和TPC-1细胞中SNHG1表达水平分别为2. 82±0. 25、5. 31±0. 51和3. 92±0. 47,高于人正常甲状腺Nthy-ori3-1细胞(P<0. 05)。与si-NC组比较,si-SNHG1-2和si-SNHG1-3组的BCPAP、TPC-1细胞增殖率分别为(50. 22±4. 65)%和(58. 19±5. 46)%、(47. 18±4. 27)%和(51. 24±6. 49)%,差异均有统计学意义(P<0. 05)。si-NC组BCPAP、TPC-1细胞的G2/M期比例均低于si-SNHG1-2组和si-SNHG1-3组(P<0. 05)。si-NC组BCPAP细胞的凋亡率为(10. 71±0. 78)%,均低于si-SNHG1-2组(24. 90±1. 87)%和si-SNHG1-3组(26. 89±1. 44)%(P<0. 05)。si-NC组TPC-1细胞的凋亡率为(11. 12±1. 05)%,均低于si-SNHG1-2组(27. 21±2. 09)%和si-SNHG1-3组(29. 67±2. 14)%(P<0. 05)。沉默SNHG1表达可降低MDM2蛋白表达并增加p53和p21蛋白表达。结论 SNHG1在PTC组织和细胞中表达均上调;沉默SNHG1表达可能通过激活p53通路来抑制细胞增殖,影响细胞周期并促进凋亡。

LncRNA SNHG1对软骨细胞损伤的保护作用及调节机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因1(SNHG1)对骨关节炎(OA)软骨细胞的保护作用及调节机制。方法采用qRT-PCR检测SNHG1在OA软骨组织与正常软骨组织中的表达水平。体外用IL-1β刺激ATDC5软骨细胞建立OA模型,采用qRT-PCR检测正常软骨细胞与OA软骨细胞SNHG1的表达水平;采用流式细胞仪、MTT法测定OA软骨细胞的增殖和凋亡。通过qRT-PCR、蛋白质印迹、双荧光素酶报告基因测定确定SNHG1在OA软骨细胞中的分子机制。结果SNHG1在OA软骨组织及软骨细胞中的表达水平均明显低于正常软骨组织或正常软骨细胞(P<0.01)。SNHG1过表达质粒转染后OA软骨细胞凋亡率显著降低(P<0.05),增殖活力显著升高(P<0.01),Runx2 mRNA蛋白表达水平显著降低(P<0.01),PCNA表达水平显著增加(P<0.01)。SNHG1可以作为竞争性内源性RNA与miR-186-5p结合,miR-186-5p模拟物可以减轻SNHG1过表达对OA软骨细胞增殖和凋亡的影响。结论SNHG1通过调控miR-186-5p对IL-1β诱导的软骨细胞损伤发挥保护作用,并为OA提供了潜在的治疗靶点。

SNHG1/miR-361-3p/MMP-1轴调控乳腺癌细胞迁移和侵袭的机制

目的探讨lncRNA SNHG1(核仁小分子RNA宿主基因1)对乳腺癌细胞侵袭及转移能力的影响,并探索潜在机制。方法利用划痕实验和Transwell实验检测SNHG1和miR-361-3p对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响,利用双荧光素酶报告基因实验检测SNHG1是否可结合miR-361-3p,miR-361-3p是否能够结合基质金属蛋白酶1(MMP-1),利用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印记实验检测SNHG1与miR-361-3p以及MMP-1表达的关系。结果抑制SNHG1和增加miR-361-3p的表达后,细胞迁移和侵袭能力均降低(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果显示SNHG1能够吸附miR-361-3p(P<0.01),miR-361-3p可结合MMP-1(P<0.01)。PCR结果显示SNHG1低表达使得miR-361-3p的表达增加(P<0.01),蛋白免疫印记实验结果显示抑制SNHG1的表达可降低MMP-1的表达(P<0.01)。结论SNHG1/mir-361-3p/MMP-1轴调控乳腺癌细胞迁移和侵袭。

SNHG1在胆管癌组织及细胞中的表达及意义

目的:探讨长链非编码RNA核仁小分子RNA宿主基因1(small nucleolar RNA host gene 1,SNHG1)在胆管癌组织和细胞中的表达及临床意义。方法:RT-PCR检测64例胆管癌组织及其配对的癌旁组织、胆管癌细胞(RBE和QBC939)和正常肝内胆管上皮细胞(HIBE)中SNHG1的相对表达水平。分析SNHG1与胆管癌临床病理特征的关系,COX多因素分析和Kaplan-Meier生存曲线分析SNHG1与胆管癌患者生存预后的关系。LipofectAMINE;2000将SNHG1过表达质粒(过表达组)、SNHG1敲降质粒(沉默组)和阴性对照质粒(对照组)转入RBE细胞,CCK8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期;Transwell检测细胞侵袭。结果:癌组织中SNHG1相对表达量明显高于癌旁组织(P<0.05),与HIBE细胞比较,RBE和QBC939细胞的SNHG1相对表达量较高(P均<0.05)。SNHG1与TNM分期和淋巴结转移有关(P均<0.05),而与性别、年龄、肿瘤部位和分化程度无关(P均>0.05)。COX多因素分析结果显示,TNM分期、淋巴结转移和SNHG1高表达是胆管癌患者不良生存预后的独立影响因素(P均<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,SNHG1高表达组中位生存时间(17个月)低于低表达组(42个月),差异有统计学意义(χ^(2)=6.698,P=0.003)。与对照组比较,沉默组SNHG1相对表达量,细胞增殖和侵袭活力明显降低(P均<0.05),细胞周期停滞在G1期;而过表达组上述指标明显增高(P均<0.05),细胞周期更多进入G2期。结论:SNHG1可能参与胆管癌的发生和发展,并且与生存预后有关。