蛇毒抗高凝状态酶对人肝癌细胞及肝细胞作用的研究

目的:研究蛇毒抗高凝状态酶(antihy-percoagulabilitystateenzyme,AHCSE)对人肝癌细胞BEL-7404(简称7404细胞)、SMMC-7721细胞(简称7721细胞)和正常肝细胞LO2(简称LO2细胞)的作用以及探讨其可能的作用机制。方法:应用光学显微镜、透射电镜、MTT法、TUNEL和FCM等方法观察7404细胞、7721细胞和LO2细胞经过AHCSE处理后,细胞形态学和生物化学等方面的变化。结果:7404细胞和7721细胞经过AHCSE处理后,可见悬浮细胞较多,细胞分裂相减少;培养液内细胞碎片明显增多,胞质内部分线粒体空泡化,成簇,胞膜下多见,胞质中髓鞘样结构形成。AHCSE剂量为0·5μg/mL时对7404细胞和7721细胞具有很强的抑制作用,P值分别为0·000和0·025,但对LO2细胞无影响,P=1·000;当剂量增至75μg/mL,AHCSE对7404细胞和7721细胞抑制率上升不明显,P值分别为0·095和0·115,但是出现对LO2细胞的抑制作用,P=0·049。AHCSE作用致7404细胞和7721细胞发生凋亡具有明显的统计学意义,P值均为0·000,凋亡率随AHCSE浓度和作用时间的增加而增加,P值均为0·000。结论:AHCSE对7404细胞、7721细胞具有很强的抑制作用,对LO2细胞影响较小,AHCSE对肝癌细胞作用安全有效,除直接杀伤作用外,诱导肿瘤细胞凋亡是其作用机制之一。

双价抗蛇毒IgY灌胃对眼镜蛇、蝰蛇伤小鼠的保护作用

目的:比较双价抗蛇毒鸡卵黄抗体(IgY)经腹腔注射或灌胃对蝰蛇、眼镜蛇伤小鼠保护作用的差异,为其口服制剂的应用奠定理论基础。方法:2种单一抗原按顺序依次交替注入单只鸡体内,水稀释法制备双价抗蛇毒IgY;间接ELISA法观察双价抗蛇毒IgY在体外及其灌胃后小鼠血浆中的效价,通过胃排空试验确定灌胃给药的最佳时间,在此基础上,比较双价抗蛇毒IgY腹腔注射或灌胃对蛇伤小鼠的保护作用。结果:初次免疫后28d至第42d,以水稀释法提取的双价抗蛇毒IgY对眼镜蛇毒及蝰蛇毒的效价分别为1:12800和1:6400。不同浓度的双价抗蛇毒IgY灌胃2.5-3.5h,小鼠的胃排空率均达68.9%以上,血浆中抗体浓度亦相应达高峰。该抗体腹腔注射或提前灌胃均能极显著延长眼镜蛇和蝰蛇毒中毒小鼠的存活时间(P<0.01),同等剂量的双价抗蛇毒IgY提高眼镜蛇伤小鼠存活率优于蝰蛇伤,而灌胃有效剂量约为腹腔注射的10倍。结论:双价抗蛇毒IgY经2种给药途径(注射、口服)均能有效保护动物免受眼镜蛇毒和蝰蛇毒的攻击。

抗蝰蛇毒IgY灌胃对蝰蛇伤小鼠保护作用的研究

目的探讨抗蝰蛇蛇毒鸡卵黄抗体(immunoglobulin yolk,IgY)经腹腔注射或灌胃对蝰蛇伤小鼠保护作用,为其口服制剂的应用奠定理论基础。方法用蝰蛇原毒单一抗原免疫母鸡,收集第12天以后的鸡蛋,用水稀释法提取抗蝰蛇毒IgY;间接法ELISA检测IgY的效价和灌胃小鼠体内IgY的吸收时间;以胃排空率实验确定蛇伤前灌胃IgY的最佳时间,以腹腔注射和不同浓度IgY灌胃实验分别检验IgY对蝰蛇伤小鼠的保护作用。结果初次免疫后第12天开始收集抗体,水稀释法提取的IgY效价为1∶6400;不同浓度IgY灌胃后,2.5～3.5h胃排空率均达61.8%以上,血浆中抗体效价亦相应达高峰;腹腔注射和IgY灌胃实验对蛇伤小鼠的保护作用明显,小鼠的存活时间与阴性IgY组小鼠相比差异显著(P<0.05);同等效应下,灌胃IgY的有效剂量大约为腹腔注射的10～15倍。结论抗蝰蛇蛇毒IgY经腹腔注射和灌胃实验均能有效保护蝰蛇伤小鼠。