Characterization of Agro-diversity by Seed Storage Protein Electrophoresis:Focus on Rice Germplasm from Uttarakhand Himalaya,India

The characteristics of 48 rice varieties from Uttarakhand Himalaya,India were detected by morphological and biochemical markers.The grains of the selected rice varieties varied in their morphological(grain length,grain width and grain weight)and biochemical characters(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE).Based on the presence of 70,65,60,57,37-39,22-23,13 and 10 kDa protein bands in the 48 rice varieties,seven types of profiles were identified.An unweighted pair group average method with arithmetic mean(UPGMA)dendrogram based on cluster analysis of genetic similarity of the protein bands showed two distinct groups with 1%-78%similarity coefficients.The presence of characteristic bands in selected varieties is a useful parameter for identification of rice germplasm.

SDS-PAGE-薄层扫描联用法测定3种不同来源的乳铁蛋白

目的:建立快速、简便测定鲜牛奶、转基因牛奶和人乳中乳铁蛋白的方法。方法:在对样品脱脂和去除酪蛋白时,水洗乳脂、酪蛋白以提高乳铁蛋白的回收率。通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分离乳清蛋白,薄层扫描法定量。对电泳和薄层扫描的条件进行优化,电泳使用1.0mm×10齿的试样格、分离胶质量浓度12g/mL、分离电压100V、上样量5μL、染色3h、脱色2h;薄层扫描采取锯齿、双波长、透射的扫描方式,Y步长和摆幅宽分别为0.1mm和8mm。结果:可以分离不同来源乳中的乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白;乳铁蛋白加标回收率分别为104.53%、108.37%,同板精密度RSD值为3.1003%和1.8151%,在100～2000μg/mL范围内呈线性关系,相关系数为0.9988和0.9990。结论:此方法可以用于3种乳中乳铁蛋白的测定。

二硫苏糖醇和β-巯基乙醇在SDS-PAGE电泳过程中的扩散效应

目的:二硫苏糖醇(DTT)和β-巯基乙醇(2-ME)是十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术中最常用的2种还原剂。文中旨在观察这2种还原剂在SDS-PAGE电泳过程中的扩散效应及建立规避扩散效应的方法。方法:将含有还原剂的蛋白样品和未还原蛋白样品间隔上样进行电泳,通过观察未还原样品的电泳条带来判断是否受到邻近泳道还原剂的扩散影响。结果:还原剂DTT或2-ME可扩散到邻近泳道,使未还原蛋白样品发生部分还原,扩散效应的强弱与还原剂的含量成正相关。结论:SDS-PAGE电泳过程中DTT和2-ME均存在扩散效应,在同一块凝胶上同时分离还原蛋白和未还原蛋白时,至少应该在2个泳道间设置一空白泳道,以规避扩散效应。

植物乳杆菌在不同盐质量浓度下生长至对数期中期全蛋白SDS-PAGE分析

以耐盐植物乳杆菌FS5-5为研究对象,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术构建了菌株在Na Cl质量浓度分别为0、3、6、9 g/100 m L的培养基中生长至对数期中期的全蛋白表达图谱。通过比较分析,选取了6个差异蛋白质条带,并采用液相色谱-质谱/质谱联用对差异蛋白质条带进行质谱分析。结果表明:1号样品条带鉴定得到6种蛋白;2号样品条带鉴定得到11种蛋白;3号样品条带鉴定得到9种蛋白;4号样品条带鉴定得到4种蛋白;5号样品条带鉴定得到15种蛋白;6号样品条带鉴定得到15种蛋白。去除相同的蛋白,共有45种蛋白得到鉴定。这些蛋白大致可以分为4类:与蛋白质合成有关的蛋白25种;与代谢相关的蛋白10种;与核苷酸合成有关的蛋白8种;未知功能蛋白2种。可能由于这些蛋白的表达发生变化,才导致菌体中蛋白质合成、能量代谢、DNA复制能够正常进行,最终使植物乳杆菌FS5-5能够更好地在盐环境下生存下去。

SDS-PAGE法检测动物肌肉蛋白质加热终点温度的研究

为了探索检测动物组织蛋白质热变性程度的方法,分别对猪、牛、羊、鸡、鱼五种新鲜动物肌肉组织进行不同温度的热处理(新鲜未加热、50、60、70、80、90、100℃),对处理后的样品提取蛋白质进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。结果显示,同种动物组织经不同温度热处理,所得电泳图谱具有较大差异,电泳条带的数量随温度的升高逐渐减少,猪、牛、羊三种动物肌肉组织加热到80℃后,电泳图谱不再变化,达到加热终点温度;鸡和鱼的肌肉组织加热到70℃后,电泳图谱不再变化,达到加热终点温度。不同种动物组织经相同温度热处理所得电泳图谱显示:猪、牛、羊三种动物组织蛋白质的电泳图谱相似,与鸡和鱼组织蛋白质的电泳图谱差异显著。

银杏种子糖蛋白的SDS-PAGE分离及N-糖链的质谱分析

利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离了银杏种子中的糖蛋白组分,进一步用氨水催化释放N-糖链,并采用电喷雾离子质谱(ESI-MS)及在线液相色谱-质谱联用(LC-UV-MS/MS^2)等技术对胶条上释放的N-糖链进行了定性定量分析.结果表明,从银杏种子中分离得到11种糖蛋白,共检测到11条N-糖链,包括高甘露糖型(4. 88%)和复杂型(95. 12%) 2种类型,其中分子量为21000,36000和50000的糖蛋白所释放的核心α-1,3-岩藻糖和β-1,2-木糖修饰的N-糖链所占比率较高,分别为68. 23%,64. 37%和75. 09%.本研究对进一步研究银杏糖蛋白功能具有重要意义.

SDS-PAGE测定大蒜功能性蛋白的相对分子质量

建立用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)测定大蒜功能性蛋白的组成及相对分子质量(M r)。通过电泳考察大蒜冻干粉中的蛋白组分,对标准蛋白进行直线回归分析,确定大蒜冻干粉中功能性蛋白的相对分子质量。此法供试品的处理方便、用量少,分离胶(交联度为10.0%,丙烯酰胺总浓度为3.0%)中能较清晰显示相对分子质量低的蛋白条带,是一种测定相对分子质量低蛋白较好的方法。

大豆根瘤内生菌全细胞可溶性蛋白SDS-PAGE电泳图谱分析

以大豆根瘤内生细菌为试验材料,分别采用单次点样、重复点样、不同上样量对其进行全细胞可溶性蛋白质十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)图谱分析,根据标准蛋白质各条带相对迁移率估算待测蛋白质亚基的分子量范围,结合16S rDNA测序结果区分大豆根瘤内生菌间亲缘关系,便于后续研究。结果表明:单次点样,不同菌株间蛋白质条带有差异,说明彼此间亲缘关系不同。经16S rDNA序列分析,菌株44最相似属种为Bacillus horikoshii、菌株52最相似属种为Sinorhizobium fredii、菌株70最相似属种为Ochrobactrum intermed;重复点样,菌株7与53的蛋白质图谱相同,经16S rDNA测序分析,两者最相似属种均为Bacillus subtilis,且最相似菌株均为HRA69,说明两者属于同一种内生菌。菌株123与125蛋白质图谱相近,经16S rDNA测序比对,两者最相似属种均为Bacillus cereus;电泳结果显示,对同一菌株不同上样量不影响蛋白质图谱,16S rDNA测序结果表明同一菌株最相似属种始终不变,即不影响亲缘关系。

空肠弯曲菌外膜蛋白SDS-PAGE应用于流行病学调查的研究

用SDS-PAGE分析不同来源41株空肠弯曲菌外膜蛋白特征,根据外膜蛋白图谱蛋白带带到组合情况及主带迁移率可将其各分为7个和9个类型.对人源和鸡等动物源菌株外膜蛋白类型的比较,提示鸡等动物是儿童空肠弯曲菌感染的传染源。对腹泻患儿和健康携带者菌株外膜蛋白类型的比较,提示空肠弯曲菌的致病性可能与其外膜蛋白特征有关.用此方法,作者分析了一起幼儿园空肠弯曲菌感染的流行病学关系,结果表明该感染呈散发多源性;人-人传播对空肠弯曲菌感染具有意义.

驴真皮中主要蛋白的组成及其相互作用的研究

目的:分析阿胶主要原料驴真皮中的主要构成蛋白,研究其相互作用,揭示其分子构成,为阐明阿胶作用机制的研究提供实验依据。方法:分别使用TriPure试剂和通过1%聚丙烯酰胺(SDS)煮沸驴的真皮,提取驴皮中总蛋白质,再使用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质,割胶提取蛋白质,使用毛细管色谱进一步分析蛋白组分。结果:发现驴真皮中主要蛋白质不仅含有胶原蛋白α1(Ⅰ)型、α2(Ⅰ)型,而且还含有血清白蛋白,其中,用TriPure试剂提取蛋白质的总蛋白中,血清白蛋白的含量超过25%;用1%SDS煮沸的总蛋白中,血清白蛋白的含量约20%,并且发现在凝胶电泳带中有2条明显的分子质量为20万左右的蛋白质,割胶提取该蛋白质经过毛细管色谱分析,发现是胶原蛋白与血清白蛋白结合的产物。结论:血清白蛋白是驴真皮中的主要蛋白组分,驴血清白蛋白有可能对于阿胶补血的功能起到比普遍认为胶原蛋白更为重要的作用。

新聚丙烯酰胺凝胶电泳快速检测大豆脂氧酶缺失方法

通过对传统SDS-PAGE电泳技术中样品前处理及制胶技术的改进,开发出了一种能够清晰鉴别Lox-1与Lox-2同工酶的SDS-PAGE电泳快速检测新技术。利用新改进的方法,在289个CS8000(♀)×FJ307(♂)F2杂交后代中,选拔出Lox-1,-2,-3同工酶完全缺失的个体27株,以及Lox-1,-3和Lox-2,-3缺失中间材料若干株。证明新改进方法可以缩短杂交后代脂氧酶缺失个体筛选进程,提高筛选精度,降低筛选成本。

金钱白花蛇可溶性蛋白凝胶电泳图谱的研究

对金钱白花蛇进行几种凝胶电泳研究 ,根据聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)谱带的位置和数目进行品种鉴别 ;用改进的十二烷基硫酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)测定其主要蛋白质成分分子量 ;用等电聚焦电泳(IFE)测定其主要蛋白质成分的等电点 (PI)。清晰的电泳谱带及相应数据为商品蛇真伪鉴别提供了科学依据。

酒度、总酸、pH值以及饮用温度对干红葡萄酒涩味的影响

利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析唾液蛋白与模拟酒反应后蛋白减少比例,并将其表示为涩味强度;同时,以酒度、总酸、p H值以及饮用温度为考察因素,利用二次正交旋转组合设计分析各因子对涩味强度的影响。结果表明:p H值对涩度影响最大,其次是酸度和温度,酒度影响最小;其中p H值和酸度互作效应对涩味的影响显著。

腰果蛋白的提取工艺条件优化

以腰果为原料,分析腰果仁的主要成分,比较研究不同提取方法对蛋白质提取率的影响;以料液比、提取液pH值、提取温度、提取时间为单因素,运用单因素和正交试验设计,优化腰果蛋白提取的最佳工艺条件。结果表明:腰果仁中粗脂肪含量最高,达44.13%,其他组分含量为:碳水化合物22.91%、蛋白质19.41%、水分3.07%、灰分2.45%;研究发现碱提法提取效果最佳,并确定其最佳工艺条件为料液比1∶40(g/mL)、提取液pH 9、提取温度35℃、提取时间1.5 h,此条件下获得的腰果蛋白提取率可达79.0%,腰果蛋白质的纯度为86.62%。腰果蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明:腰果蛋白主要含有22、26.2 kD的亚基,其次是14.1、16 kD,少量亚基为67.5、88 kD。

牛羊乳酪蛋白制备及电泳分析比较

采采用新鲜和复原的牛羊乳为原料,等电点沉淀,通过洗涤、干燥等步骤分别制得牛乳和羊乳酪蛋白,用凯氏定氮法对其进行定量检测,应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析比较牛羊乳酪蛋白组分差异。结果表明:牛乳酪蛋白得率为86.75%,羊乳酪蛋白得率为90.55%,高含量的酪蛋白主要集中在电泳图谱的中分子量组,可分为αs1-CN、αs2-CN、β-CN和κ-CN,牛羊乳αs2-CN分子量羊乳大于牛乳,牛乳α-CN含量比较多,羊乳β-CN含量比较多,鲜乳与复原乳全蛋白主要组分在电泳图谱中除酪蛋白差别外,上端的高分子量组清蛋白区羊乳IgG重链的分子量比牛乳小。应用蛋白质电泳分析技术可以区分羊乳和牛乳的蛋白质组分,等电点沉淀法制备酪蛋白的方法简单,易于操作。

植物乳杆菌L5降解亚硝酸盐机理的初步研究

为了研究植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)L5降解亚硝酸盐的机理,采用盐酸萘乙二胺法、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和扫描电镜分别对亚硝酸盐存在条件下L5的降解亚硝酸盐能力、蛋白的表达和菌体形态等进行了初步研究。结果表明,在正常培养条件下,发酵36 h,L5对亚硝酸盐的降解率为56.25%;在控制p H 6.8,消除酸对亚硝酸盐降解作用的条件下,发酵36 h,L5对亚硝酸盐的降解率为70.59%;在有亚硝酸盐存在的条件下,L5能分泌一种分子质量约为200 k Da的a蛋白,且分子质量为50 k Da左右的b蛋白、分子质量为40 k Da左右的c蛋白、分子质量为34 k Da左右的d蛋白的表达均上调;L5在以亚硝酸盐为唯一氮源的培养基中仍然能生长,但亚硝酸盐的存在使L5的菌体形态发生了改变。

不同热分级脱脂奶粉中乳清蛋白热变性聚合物分析

为了解不同受热程度脱脂乳粉中乳蛋白各组分以及各组分之间的变化规律,利用还原型和非还原型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对乳清蛋白氮指数(WPNI)分别为7.08、4.24、1.45的不同受热程度脱脂乳粉进行蛋白组分分析。结果表明,不同受热程度乳粉形成的大分子聚合物组成和含量差异显著,低温加热脱脂乳粉中乳清蛋白变性程度最低,形成的大分子聚合物较少而高温加热脱脂乳粉中乳清蛋白变性程度较大,形成的大分子聚合物较多。利用还原型SDS-PAGE对不同受热程度脱脂乳粉的电泳胶片中大分子聚合物进行分析可知,不同受热程度脱脂乳粉形成的聚合物组成大致相同,但含量差异显著。β-Lg和κ-酪蛋白参与了几乎所有的聚合反应。形成的大分子聚合物分子量≥200 ku。

对苯二甲酸降解酵母及其活性

通过半连续驯化,从对苯二甲酸活性污泥中分离到一株能降解对苯二甲酸(TA)的假丝酵母(Candida),命名为CP01.经两次紫外诱变后,获得了能以TA为唯一碳源的高效酵母菌CP02,诱变前后酵母全细胞蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)条带有明显差异. CP02在30℃, pH5.5～8,振荡速率150r/min的培养条件下,72h内对1400mg/L的TA降解率可达80%以上.

燕麦麸分离蛋白的酶解对其功能性质的影响

为了改善燕麦蛋白的功能性质以扩大其在食品工业中的应用,该文以燕麦麸为原料制备了燕麦麸分离蛋白(OBPI),并利用胰蛋白酶对其进行水解,得到了3种不同水解度(4.1%、6.4%、8.3%)的酶解产物。SDS-PAGE分析结果表明OBPI中的主要蛋白成分是球蛋白,其经过胰蛋白酶处理后,球蛋白酸性亚基被部分水解而碱性亚基相对保持完整。胰蛋白酶水解显著改变了OBPI的功能性质。在所考察的水解度范围内,随着水解度的升高,酶解产物的溶解性、持水性、乳化活性及起泡能力等方面均逐渐增加;但持油性、乳化及泡沫稳定性有不同程度的降低。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛇毒抗瘤蛋白的相对分子质量

目的建立改进的低分子SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛇毒抗瘤蛋白的相对分子质量 (Mr)。方法考察不同因素对电泳结果的影响 ,对Mr 标准进行直线回归分析 ,确定蛇毒抗瘤蛋白中组分的Mr。结果测得各条带的Mr 分别为 :2 35 0 0、15 4 0 0、1340 0、1130 0、930 0、80 0 0。结论此法供试品处理方便 ,用量少 ,在含 6mol/L尿素的分离胶 (交联度为 16 .5 % ,丙烯酰胺总浓度为 6 % )中能同时显示中、低Mr 的条带 ,是一种测定中、低Mr 的较好方法。