Genetic Relationships of Soft Rot Bacteria Isolated from Konjac in China by Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP) and 16S rDNA Gene Sequences

Twenty-three isolates of soft rot bacteria from konjac corms were examined for their diversity using 16S rDNAs and AFLP technology. Both methods clustered two groups, dependent on their biotype characterization of Pectobacterium carotovora subsp. carotovora (P.c.c) and Pectobacterium chrysanthemi (P.ch), respectively. Of all isolates, 17 (73.9%) belonged to P. ch, indicated as the main pathogenic bacteria of konjac producing areas in China. The genetic variation among isolates from the same biotype was also rich, not consistent with the distances of the geographic sources.

3株生防菌对猕猴桃软腐病的作用

为探究生防菌对猕猴桃软腐病的作用,选用前期获得的3株生防菌(贝莱斯芽孢杆菌P2-1、耐盐芽孢杆菌PL7和多黏芽孢杆菌NL4)进行室内抑菌试验、猕猴桃软腐病接种和自然发病防治试验,并研究了3株生防菌对猕猴桃果实病程相关基因表达的影响。试验结果表明,菌株P2-1、PL7和NL4对猕猴桃软腐病菌(Botryosphaeria dothidea)菌丝生长的抑制率分别为83.49%、74.82%和49.33%,P2-1的抑制效果最好,PL7次之,NL4最差;3株生防菌对接种猕猴桃软腐病均具有抑制作用,其中以P2-1的效果最好,PL7次之,NL4最差;3株生防菌均能显著降低猕猴桃软腐病自然发病率,其中以P2-1处理的发病率最低;3株生防菌处理均对猕猴桃果实品质无影响;3株生防菌处理猕猴桃果实后,果实中基因PR1、PR5和SOD的表达显著上调。研究结果可为菌株P2-1、PL7和NL4开发为防治猕猴桃软腐病的生物制剂提供参考。

Cu^(2+)对软腐细菌(Erwinia carotovora subsp.carotovora Dye)致病因子的影响

在体外测定中,cu^(2+)浓度高于1.25ppm 时,所有的 StEcc-12菌体(10~6CFU/ml)均被杀死。在以聚半乳糖醛酸为唯一碳源的培养基中,Cu^(2+)浓度高于0.31ppm 时,该细菌不能生长。但较低浓度的 Cu^(2+)能使细菌胞外果胶裂解酶(PL)、果胶水解酶(PG)和蛋白酶的单位活性提高。在细菌胞外酶粗提液中加入2.54ppmCu^(2+)可以大大提高PL 的活性。用50ppm 硫酸铜处理接过菌的薯块可使其中活菌减少2个数量级,但残留下来的细菌仍能迅速繁殖,并导致薯块腐烂。硫酸铜渗透薯块后使各部位的组织含 Cu^(2+)量有不同程度的提高,而以皮孔组织最显著。Cu^(2+)的杀菌作用是减轻软腐病发生的主要原因。

双城洋葱软腐病原的分离鉴定

以双城洋葱种植地贮存期感病洋葱为试材,采用组织分离、柯赫法则、形态、生理生化和分子鉴定方法,对病原菌进行了分离鉴定,并研究了病原菌致病谱,以期为洋葱种植与贮存中软腐病的防治提供参考依据。结果表明:洋葱软腐病原是一株细菌YC1,寄主较广,还可引起芹菜、马铃薯、白菜、胡萝卜和青椒腐烂。该菌株为G^(-)杆菌,可利用葡萄糖、果糖、海藻糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、柠檬酸盐和丙二酸盐,不能分解淀粉和纤维素,氧化酶、吲哚、H_(2)S和V.P反应阴性,M.R、接触酶、石蕊牛奶、硝酸盐还原和明胶液化阳性。16S rDNA、gyrB和rpoD基因序列系统进化分析显示与Burkholderia gladioli亲缘关系最近。综合形态、生理生化特性以及16S rDNA、gyrB和rpoD基因序列分析鉴定该病原菌为B.gladioli.

蔬菜软腐病菌广谱拮抗细菌菌株筛选鉴定及防效研究

为获得广谱高效拮抗蔬菜软腐病菌的生防菌株,本研究以白菜软腐病菌Pectobacterium carotovorum BC2、圆葱软腐病菌Burkholderia gladioli YC1、娃娃菜软腐病菌Pseudomonas sp.WWC2为靶标,采用梯度稀释法及抑菌圈法从蔬菜根际土中分离筛选拮抗菌株。通过形态、生理生化和16S rDNA序列分析对菌株进行鉴定,明确生防菌株种属地位,并研究了菌株生长特性,利用牛津杯法测定生防菌株对3株软腐病菌及3株人源性病原细菌抑菌作用,采用平板对峙法测定其对8株植物病原真菌的抑菌作用,采用针刺接种法测定其对蔬菜离体叶片和田间的防效,并利用X-gal显色法测定其对白菜软腐病菌群体感应信号因子的降解活性。通过研究菌株生长特性、对白菜软腐病菌群体感应信号因子的降解活性、抑菌谱以及对白菜软腐病的田间防效。结果表明,从20个土样分离的1012个细菌中,筛选出18株拮抗菌,其中筛选出1株对3种软腐病菌YC1、BC2、WWC2均有抑菌活性的生防菌株DJ1,其抑菌圈直径分别为(10.60±0.20)mm、(6.92±0.56)mm和(3.92±0.16)mm。经鉴定菌株DJ1为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis。菌株DJ1最适生长温度为30℃,具有较好的耐盐性,能在1%-5%NaCl条件下生长,具有一定降解白菜软腐病菌群体感应信号因子的能力,能够抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和8种植物病原真菌生长,1×10^(8) CFU/mL菌液浓度对白菜、圆葱、娃娃菜软腐病离体防效分别为84.30%、60.21%和69.96%,对白菜软腐病田间防效为79.91%。因此,贝莱斯芽孢杆菌DJ1在防治蔬菜软腐病方面具有潜在应用潜能。

拮抗菌枯草芽孢杆菌1151及其所产抗菌肽对辣椒采后软腐病的控制作用

软腐病是导致辣椒采后贮运期间腐烂损失最严重的细菌性病害。为了降低辣椒因软腐病而造成的损失,该研究从腐烂辣椒中分离病原菌并筛选拮抗菌以控制该病原菌引起的软腐病。结果显示腐烂辣椒中分离的病原菌XC1为胡萝卜软腐病果胶杆菌巴西亚种(Pectobacterium carotovorum subsp.brasiliense,Pcb),Pcb XC1具有强致病能力,104 CFU/mL及以上浓度在室温条件下(25℃)3 d内能够导致辣椒100%腐烂。进一步,采用双层琼脂平板法筛选出一株拮抗菌1151,经16S rDNA鉴定为枯草芽孢杆菌。体外抑菌结果表明枯草芽孢杆菌1151菌体及所产抗菌肽均对Pcb XC1有抑制作用。辣椒体内控病结果表明枯草芽孢杆菌1151菌体及所产抗菌肽均能降低辣椒的腐烂率并减小病斑直径,其中抗菌肽处理效果更佳。抗菌肽能够减少辣椒体内99%的Pcb XC1数量。扫描电镜结果也表明抗菌肽处理后的辣椒表面软腐病症更少,无明显细胞壁降解引起的褶皱和碎片。一方面从蛋白层面,经LC-MS/MS鉴定到了BHP、SP-B和Hb 98-114共3个抗菌肽。另一方面从基因层面,经BAGEL4数据库从枯草芽孢杆菌1151基因组中鉴定到了一个细菌素基因簇,含有2个细菌素(Subtilosin A和Subtilosin Sbox)。该研究表明枯草芽孢杆菌1151能够减轻辣椒由软腐病引起的腐烂损失,其所产抗菌肽发挥了重要作用,对辣椒采后的贮藏保鲜方法具有重要参考意义。

植物乳杆菌LAB2对辣椒软腐病的控制作用及辣椒贮藏品质的影响

细菌性软腐病是辣椒采后主要病害之一,该研究旨在探究拮抗乳酸菌控制辣椒软腐病的应用潜力。胡萝卜软腐病果胶杆菌CBJ3(Pcc CBJ3)致病性分析表明25℃(≥3 lg CFU/mL)和4℃(8 lg CFU/mL)贮藏下,均可致辣椒软腐率达100%,致腐性极强。从辣椒上筛选出一株对Pcc CBJ3有强抑菌活性的拮抗菌LAB2,经16S rDNA鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。L.plantarum LAB2所产细菌素以及无细胞发酵液(cell-free fermentation supernatant,CFS)对Pcc CBJ3均有体外抑菌活性。通过基因组草图序列在数据库比对鉴定到了4个细菌素:plantaricin_E、plantaricin_F、plantaricin_N和plantaricin_J。体内控病试验表明L.plantarum LAB2所产细菌素和CFS对辣椒软腐病均有控制效果,且CFS控病能力更强,显著降低了软腐病发病率和病斑直径(P<0.05)。扫描电镜显示,CFS处理可维持辣椒表皮结构的完好性。微生物计数结果表明,CFS处理可显著降低辣椒上的病原菌数量(P<0.05)。进一步研究结果显示,CFS处理可显著延缓辣椒贮藏期的硬度下降、失水、可溶性固形物含量流失、丙二醛的积累(P<0.05)。该研究为辣椒采后贮藏保鲜生物防治技术应用提供参考。

珠芽黄魔芋软腐病病原菌分离与鉴定

为了对引种驯化的珠芽黄魔芋软腐病病害进行有效防控,采集陕西省镇巴县有软腐病发病症状的珠芽黄魔芋叶柄进行病原细菌分离纯化、致病性检测、分离菌株的菌落形态特征观察、生理生化特征及16S rDNA序列比对分析。试验结果表明,从软腐病症状的珠芽黄魔芋叶柄中分离获得了不同形态的15株细菌,致病性试验发现其中的ZYH1菌株可使珠芽黄魔芋、花魔芋、胡萝卜和白菜离体组织表现出软腐症状,并导致珠芽黄魔芋和花魔芋植株发病。分离的ZYH1菌株单菌落圆形突起,乳黄色,边沿光滑整齐,杆状菌体,16S rDNA序列分析结果表明,该菌株与已报道的胡萝卜软腐果胶杆菌(%Pectobacterium carotovorum)%亲缘关系最近,相似度为99.6%。这是陕南地区首次报道由胡萝卜软腐果胶杆菌引起的珠芽黄魔芋软腐病害,该研究结果有助于为引种驯化的珠芽黄魔芋软腐病害防治提供理论依据。

大白菜软腐菌种群组成及优势菌致病型的研究

对黑龙江省成熟大白菜〔Brassica pekinensis(Lour.)Rupr.〕生产田采集的软腐病菌进行分离、纯化,并根据形态学特征分析了大白菜软腐病菌的种群组成。结果表明,引起黑龙江省秋季大白菜软腐病的主要致病菌是胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜软腐亚种〔Erwinia carotovora(Jones)Bergey et al.subsp.carotovora〕(Ecc);利用20个Ecc菌株的混合菌对来源于不同生态型及不同地区的大白菜品种进行接种,筛选出5个鉴别寄主,以此将20个Ecc菌株划分为5个致病力类型,其中V型为优势致病菌,其分布广且致病力强。

魔芋软腐病病原菌的鉴定及生物学特性初步研究

对魔芋软腐病病原菌的致病性测定、形态特征和生理生化特性的研究结果表明：魔芋软腐病由胡萝卜软腐欧氏杆菌（ Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ ｐｖ．ｃａｒａｔｏｖｏｒａ） 引起，病原菌的生长最适温度为２５ ～３０ ℃，最适酸碱度为ｐＨ６．０～６ ．５，最适碳源为乳糖，最适氮源为酵母汁。

魔芋软腐病病原菌鉴定及部分生物学特性研究

用 3种不同的方法进行了魔芋软腐病菌的分离 ,以所分离到的细菌对魔芋进行致病性试验 ,能引起魔芋软腐病。

入境马蹄莲细菌性软腐病菌的分离鉴定

目的在参展青岛世界园艺博览会的荷兰进口马蹄莲植株上,发现叶片有明显褐色软腐症状,为明确引起马蹄莲软腐病的病原,对叶片进行病菌的分离鉴定。方法采用组织分离法,从荷兰入境马蹄莲植株的病变叶片中分离纯化到2株致病性细菌菌株(MTL1、MTL2),对该菌株进行鉴定和生物学特性研究。结果形态及培养特征、生理生化特性的研究结果表明该菌株在NA培养基上能形成白色圆形单菌落,薄而平滑、边缘整齐,光滑不透明,KB培养基上划线培养后可产生明显的绿色的荧光。显微镜下菌体呈杆状,具多根极生鞭毛,革兰氏阴性菌。结论经形态鉴定、培养特征、生理生化及16S r DNA序列分析和致病性测定实验,确认引起马蹄莲细菌性软腐病的病原为边缘假单胞菌(Pseudomonas marginalis)。

健康魔芋根表土壤优势细菌鉴定及其抗病促生作用

为探索健康魔芋根表土壤优势细菌有无抗病促生作用,采用菌落形态特征观察及16SrRNA基因序列分析确定优势细菌B18和B17的分类地位;通过皿内拮抗和甜瓜种子发芽试验研究优势细菌对魔芋软腐病菌的拮抗和促种子萌发活性;采用盆栽试验研究优势细菌对魔芋软腐病的防病促生作用。结果表明：（1）经鉴定,2株优势细菌B18和B17分别为放射型根瘤菌（Rhizobium radiobacter）和苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）,其无细胞发酵滤液对4种软腐病菌均有皿内拮抗作用,同时具有较强的促生活性。其中,放射型根瘤菌104倍、苏云金芽孢杆菌10倍无细胞发酵滤液稀释液对甜瓜种子萌发和幼苗生长的促进效果最好。（2）放射型根瘤菌、苏云金芽孢杆菌菌悬液分别单接或与软腐病菌混接对盆栽魔芋软腐病的相对防效为17.0%~60.0%。（3）2株优势细菌分别单接或与软腐病菌混接能显著提高盆栽魔芋叶片光合作用,促进枝长和地径增加,亦能提高盆栽魔芋球茎鲜质量和根茎数量。由此可知,放射型根瘤菌、苏云金芽孢杆菌具有一定的促生、抗魔芋软腐病能力;通过作物健株与病株根际微生物区系比较确定健株优势微生物,可快速筛选具有实际效果的防病促生菌。

丹尼斯凤梨细菌性软腐病拮抗细菌的筛选及鉴定

从丹尼斯凤梨根际土壤中筛选到687株菌株,其中菌株A2对丹尼斯凤梨细菌性软腐病具有高效拮抗作用,进行形态观察,生理生化特性测定及16S rDNA序列分析,将菌株A2鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。将菌株A2的抑菌作用与几种杀菌剂的抑菌作用相对比,发现A2的抑菌作用仅次于农用链霉素。

辣椒采后软腐病拮抗细菌的分离及生防效果

为了降低辣椒采后由软腐病引起的腐烂损失,本文从辣椒植株内分离筛选拮抗菌,结果得到3株对辣椒软腐病菌有较强抑制作用的内生细菌,其中PP-32菌株的抑菌活性最强,在平板上培养3 d后抑菌圈直径最大37 mm,培养7 d后对辣椒软腐病菌的抑制率达56.7%,该菌株初步鉴定为芽孢杆菌,其拮抗作用有一定的广谱性。该菌株的发酵液(1.0×109cfu/mL)对辣椒软腐病菌生长有较强的抑制作用,但其无菌滤液没有抑制作用。该菌株在辣椒果实上对软腐病的拮抗效果大于72.2%,辣椒果实在25℃下贮藏18 d后该菌株的生防效果仍有17.3%。因此,PP-32菌株可以作为一种生防菌应用于辣椒采后软腐病防治。

风信子软腐病病原的鉴定和杀菌剂试验

在上海生长的风信子发生软腐病的球茎中分离了菌株EP,对纯化的菌株EP进行传统方法鉴定;并进行16SrDNA序列同源性分析,结果表明EP与Erwinia carotovorasubsp.carotovora同源性达到97%,确定风信子软腐病病原为Erwinia carotovora subsp.carotovora。风信子软腐病病菌在不同杀菌剂浓度下的生长试验表明,杀毒矾抑菌效果最好,有效浓度0.64×10-6g/mL时细菌停止生长,其次为吗啉胍乙铜和农用链霉素可溶性粉剂,有效浓度分别为2×10-4g/mL和5.76×10-4g/mL时,细菌停止生长。

春羽细菌性软腐病病原鉴定

春、夏雨水季节,在中山市横栏镇等地花本场发现春羽(Philodendron selloum)小苗叶片发生软腐症状,株发病率达70%～80%,损失严重。经分离培养、致病性测定、形态学观察、生理生化测定以及16S rDNA序列分析,将该病的病原菌鉴定为菊欧氏杆菌(Erwinia chrysanthemi),此病在国内首次报道;室内药剂筛选显示硫酸链霉素可作为有效防治农药。

二氧化氯对香蕉枯萎病菌和细菌性软腐病菌的消毒效果研究

研究不同浓度二氧化氯(Cl O2)对土壤和水体中香蕉枯萎病菌小型分生孢子和水体中香蕉细菌性软腐病菌的杀灭效果,为控制香蕉枯萎病和软腐病的传播提供依据。通过统计分析消毒前后镰刀菌孢子和细菌的数量发现:3 mg/L以上Cl O2可将待测镰刀菌孢子100%杀灭;20 mg/L的Cl O2淹土不能100%杀死土样中的镰刀菌孢子;800 mg/L以上Cl O2浇灌粉蕉根系周边的土壤可有效减少镰刀菌数量,高于1 500 mg/L Cl O2消毒液可将土壤中镰刀菌100%杀灭。二氧化氯消毒显著降低土壤中细菌的数量,显著增加土壤真菌的数量,并明显减少土壤细菌和真菌的种类。5 mg/L的Cl O2可将水体中香蕉细菌性软腐病菌100%杀灭。研究结果表明,高于5 mg/L的Cl O2进行水体消毒可有效预防枯萎病和软腐病通过水源传播,对发病蕉穴土壤的消毒可以使用1 500 mg/L以上的Cl O2处理以达到清除病原的目的。

蝴蝶兰细菌性软腐病绿色防治药剂筛选试验

细菌性软腐病是蝴蝶兰生产中重要的病害,常造成严重损失。为有效控制该病害的发生危害,从几种低毒杀菌剂中筛选绿色高效防治药剂。室内生物活性测定结果表明,王铜(氧氯化铜)对病原菌的最小抑制浓度为500 μg/m L;离体叶片法测定结果表明,氧氯化铜有效成分为125、250、500 μg/m L时,防治效果为73.85%、89.47%和100%;盆栽试验结果表明,当采用先施药再接种病原菌的方法时,500 μg/m L氧氯化铜药后3、6、9 d防治效果分别为89.92%、83.62%和75.89%。因此,氧氯化铜可作为蝴蝶兰软腐病的绿色防治药剂。

魔芋软腐病菌致病条件与侵染途径研究

对魔芋软腐病菌的致病条件、侵染途径等方面进行了研究。结果表明,魔芋软腐病菌主要通过伤口侵染魔芋,当球茎顶芽及顶芽周围组织受损后,极易被软腐病菌感染,其发病率高达90%以上。其最适发病条件为温度25～30℃,湿度90%～95%,且在相同温度下湿度越大,其发病率越高。