An innovative method used for the identification of N-glycans on soybean allergenβ-conglycinins

β-Conglycinin is one of the major allergens existed in soybean.N-Glycans attached to theβ-conglycinin influenced the immunoreactivity and antigen presenting efficiency ofβ-conglycinin.In this study,we described a new method used to release and collect the N-glycans fromβ-conglycinin,and the N-glycans existed in linear epitopes ofβ-conglycinin were identified.Glycopeptides hydrolyzed fromβ-conglycinin were purified by cotton hydrophilic chromatography.Trifluoromethylsulfonic acid was then used to release glycans from glycopeptides,and new glycopeptides containing one single N-acety1-D-glucosamine(G1 cNAc)moiety were then utilized for mass spectrometry.Five glycosylation sites(Asn-199,Asn-455,Asn-215,Asn-489 and Asn-326)and 22 kinds of glycopeptides were identified.It is noteworthy that the peptide VVN^(#)ATSNL(where^(#)represents for the glycosylation site)was analyzed to be both glycopeptide and linear epitope.Our results provided a new method for the N-glycoform analysis of food allergens,and laid a foundation for understanding the relationship between glyco sylation and food allergy.

Isolation of bacteria from fermented food and grass carp intestine and their efficiencies in improving nutrient value of soybean meal in solid state fermentation

Background: Soybean meal is an excellent and cost-effective protein source; however, its usage is limited in the piglet due to the presence of anti-nutritional factors and the antigens glycinin and β-conglycinin. The objective of the current study was to screen and select for bacteria that can be efficiently adopted to ferment soybean meal in order to solve this problem.Results: Bacteria were isolated from fermented soy foods and the grass carp intestine, and strains selected for high protease, cellulase and amylase activities. The isolated bacteria were characterized as Bacillus cereus, Bacillus subtilis and Bacilus amyloliquefacien, respectively. Fermentation with food-derived Isolate-2 and fish-derived F-9 increased crude protein content by 5.32% and 8.27%, respectively; improved the amino acid profile by increasing certain essential amino acids, broke down larger soy protein to 35 k Da and under, eliminated antigenicity against glycinin and β-conglycinin, and removed raffinose and stachyose in the soybean meal following a 24-h fermentation.Conclusions: Our results suggest these two B. amyloliquefaciens bacteria can efficiently solid state ferment soybean meal and ultimately produce a more utilizable food source for growing healthy piglets.

湿法糖基化改性大豆分离蛋白在低致敏千页豆腐中的应用

为寻求高效的糖基化改性条件和良好的应用途径,本文以葡萄糖、木糖两种单糖为糖基供体,探究反应时间、反应温度、蛋白与糖比例、蛋白浓度对大豆分离蛋白湿法糖基化反应的影响,分析大豆分离蛋白-葡萄糖复合物(SPI-葡萄糖)、大豆分离蛋白-木糖复合物(SPI-木糖)致敏性的变化,并将SPI-葡萄糖、SPI-木糖应用于低致敏千页豆腐生产。结果表明,木糖相较于葡萄糖更易与大豆分离蛋白发生糖基化反应,但也更容易有类黑素产生。在蛋白浓度为25 mg/mL时,糖基化反应程度最高,并且糖基化反应程度与反应温度、反应时间、糖添加量呈正相关。SDS-PAGE和傅里叶变换红外光谱分析结果表明糖基化改性使大豆分离蛋白和糖分子发生了共价结合,SPI的自由氨基减少。糖基化反应程度越高,SPI致敏性越低,SPI-木糖接枝物致敏性降低程度最高可达50%,以其为原料经谷氨酰胺转氨酶(TG酶)交联所制作的千页豆腐有良好的弹性和咀嚼性。

大豆过敏原的检测方法研究进展

大豆是八大食物过敏原之一,如何快速、准确、低成本地检测大豆过敏原已成为科研、食品工业以及医药卫生等行业关注的焦点。大豆中的主要过敏原是大豆球蛋白、β-conglycinin、Gly m Bd 60K、Gly m Bd 30K和Gly mBd 28K。其中,大豆过敏原的主要检测方法有电泳法、免疫学方法、PCR法、色谱法、质谱法以及生物芯片技术。本文通过对大豆中主要过敏原的检测方法进行综述,旨在为不同食物中大豆过敏原的检测提供方向,以保障大豆过敏患者安全。

大豆中主要抗原蛋白的研究进展

文中结合作者多年来的研究成果,对大豆中主要抗原蛋白的识别技术、已识别抗原的相关性质、大豆抗原蛋白对不同种属动物的抗营养作用及其相关机制、降低大豆抗原蛋白免疫原性的主要处理方法等进行了综述,并对该领域未来的发展方向和工作重点进行了探讨和展望。

烤鳗酱油中大豆、小麦过敏原的ELISA检测

烤鳗酱油的最初生产原料中包括了被许多国家和地区认定为过敏物的大豆和小麦,研究应用ELISA法对烤鳗酱油样品进行了大豆、小麦过敏原的测定。结果表明,对于大豆过敏原:绝大部分烤鳗酱油样品中检测不到,少数样品中其含量很低;对于小麦过敏原:绝大部分烤鳗酱油样品中的含量很低,少数样品检测不到。极微量的过敏原就可引起严重的过敏反应,因此应加强烤鳗酱油中过敏原的管理。

双抗体夹心ELISA法测定食物中大豆过敏原蛋白成分

通过建立双抗体夹心ELISA法测定食物中大豆过敏原蛋白成分,为进出口食品中大豆过敏原成分检测和食物过敏性疾病的预防提供技术基础。提取大豆总蛋白,免疫小鼠制备抗大豆总蛋白的多克隆抗体,用该抗体做包被抗体,并用生物素标记该多抗作为捕捉抗体,从而建立双多抗体夹心ELISA法;检测该方法的灵敏度,同时检测10种食品中是否含有大豆过敏原蛋白成分。SDS-PAGE电泳结果显示大豆过敏原总蛋白在120、60、35、30、28、18ku处条带明显;免疫印迹显示,这些条带与制备的高效价抗大豆蛋白的多抗具有明显的阳性反应。检测食品中大豆过敏原蛋白成分双抗体夹心ELISA法最低检出限为～100ng/mL,标准曲线在100ng/mL～12.8μg/mL范围内线性良好;10种进口食品检测结果与食物过敏原标签标注内容相符。

超高压对风味蛋白酶酶解大豆分离蛋白中P34免疫活性的影响

研究超高压对风味蛋白酶处理大豆分离蛋白(soybean protein isolate,SPI)中致敏原P34免疫活性的影响。并对脱敏后的SPI功能特性进行了研究。结果表明:超高压处理对风味蛋白酶消除SPI中致敏原P34具有促进作用,将消除P34致敏性的酶解时间由120 min缩短到了60 min。超高压联合风味蛋白酶酶解脱敏的SPI溶解性、黏度、保水性、吸油性、乳化性和乳化稳定性、起泡性和泡沫稳定性都比单纯酶酶解的SPI明显提高。

大豆过敏原与低过敏原种质创新

食物过敏是一个全世界关注的公共卫生问题。如何降低大豆过敏原含量,保证大豆食品安全,已成为日益关注的问题。大豆种子过敏原包括种子储藏蛋白、结构蛋白和防御相关蛋白,其中7S球蛋白组分中的Gly m Bd 28K,Gly m Bd 30K及β-伴球蛋白的Gly m Bd 60K是3种主要的过敏原。目前通过对过敏原的理化性质、过敏原性和基因结构的认识,运用传统育种及基因工程技术等方法,在减少大豆的过敏原性方面已取得一定的进展。文章对大豆过敏原的类型及特性、3种主要过敏原的理化性质、基因结构以及低过敏原种质创新等方面的研究报道进行了综述。

大豆过敏原免疫学检测方法研究进展

作为一种重要的粮食作物,大豆应用广泛并在人类和动物营养方面起着至关重要的作用,但大豆中也含有多种过敏原,能够诱发超敏反应,导致机体损伤。随着人们对食品过敏问题的日益重视,各种针对大豆过敏原的快速、准确的检测方法得到了发展,其中免疫学方法具有灵敏性高、特异性强的特点,能够对过敏原进行定性、定量检测而成为研究热点。本文综述了针对大豆过敏原的免疫学检测方法,并对今后的研究方向进行了初步探讨。

酶水解对大豆致敏蛋白P34免疫活性的影响及酶解产物理化性质研究

采用不同来源的7种蛋白酶对大豆蛋白进行酶解,利用SDS-PAGE和水解度研究酶解去除P34的效果,通过Western Blot法测定酶解后大豆致敏蛋白P34免疫活性的变化。结果表明,经不同来源的蛋白酶处理后,大豆蛋白中致敏蛋白P34的含量都有不同程度降低,风味蛋白酶和碱性蛋白酶对P34的作用效果最强,可将P34完全去除。在最优的酶解条件下,两种大豆蛋白酶解物溶解性、保水性、乳化性、乳化稳定性和起泡性明显提高,而粘性、吸油性和泡沫稳定性降低。

大豆蛋白过敏原结构与功能的研究进展

大豆是优质的植物蛋白资源,但同时也是八大食物过敏原之一。大豆蛋白中Gly m Bd 28K,Gly m Bd 30K(P34)和β-伴大豆球蛋白的α亚基Gly m Bd 60K被普遍认为是大豆中的主要致敏原。本文综述了大豆蛋白主要过敏原的结构、功能及其过敏原表位的研究进展。

超高压处理对大豆蛋白致敏原P34免疫活性的影响研究

利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western-Blot和ELISA法研究了超高压处理不同压力及保压时间对大豆蛋白致敏原P34免疫活性的影响。结果表明:超高压处理能够降低大豆分离蛋白中大豆蛋白致敏原P34的致敏性。蛋白浓度为5%的大豆分离蛋白溶液的最佳处理条件为压强600MPa、处理时间20min,该条件下大豆蛋白致敏原P34的致敏性降低了21.69%。

大豆抗原蛋白对仔猪肠道转运通道的影响

试验研究了大豆抗原蛋白对仔猪生长性能及肠道功能的影响。试验选用21日龄(杜×长×大)仔猪12头,随机分成2个处理组:对照组(饲喂含4%酪蛋白的基础日粮)和大豆分离蛋白组(饲喂含4%伴大豆分离蛋白的基础日粮)。试验为期7 d,采血后屠宰,取十二指肠、空肠、回肠和结肠等组织样品,测定仔猪生长性能、血液生化指标、肠道损伤和肠道功能相关基因等数据。结果表明:1日粮中添加大豆分离蛋白降低了仔猪的日增重,提高了仔猪料重比和腹泻率。2大豆分离蛋白提高了仔猪十二指肠、空肠和结肠的隐窝深度,降低了十二指肠的绒毛宽度、回肠的绒毛高度和绒毛面积。3在日粮中添加大豆分离蛋白降低了十二指肠和回肠AQP 3、Villin、MMP3及空肠AQP10的基因表达水平;提高了空肠Bcl-2、CFTR、Pep T1、SGLT-1、NHE3、AQP 3、AQP 4、AQP 8和Occludin的相对表达量。因此,大豆抗原蛋白调控肠道黏膜损伤与修复和转运通道基因的表达,改变了肠道的正常组织形态,进而降低了仔猪的生长性能。

食品过敏原大豆P34蛋白基因的实时荧光PCR检测

以大豆主要过敏蛋白P34基因为靶标,采用TaqMan探针实时荧光PCR方法建立食品过敏原大豆成分的检测方法。实验表明建立的检测方法具有特异性,灵敏度高,检测限为10mg/kg。通过对市售样品的检测,该方法适用于对常见食品种类的检测,但不适用于精加工油脂等精细加工产品的检测。

超高压-限制性酶解法降低豆乳粉致敏性工艺优化

以传统湿法工艺技术制备豆乳粉为基础,对浆渣分离后的豆乳进行超高压-限制性酶解处理,降低豆乳粉致敏性。在单因素试验基础上,采用响应面分析法对超高压-限制性酶解制备低致敏性豆乳粉工艺进行优化,确定最优超高压-限制性酶解的工艺参数为超高压处理压强320.00 MPa、超高压处理时间15 min、酶解时间60 min、酶添加量0.3 U/g,此条件下致敏性降低率为88.09%,但制备的豆乳粉具有微苦味,需要进一步调配以改善口感。超高压处理与酶解具有协同效应,可显著提高豆乳粉蛋白质体外消化率、显著降低豆乳粉致敏性,对不同加工工艺豆乳粉进行蛋白质体外消化率、蛋白质分散指数、过敏原含量及蛋白电泳分析,进一步证明超高压与酶解的协同效应。

环介导等温扩增法检测食品过敏原大豆成分

目的建立食品过敏原大豆成分的环介导等温扩增(LAMP)分析方法。方法根据大豆的内源管家基因Lectin基因设计6条过敏原大豆的特异性引物(两条内引物,两条外引物和两条环引物),建立LAMP检测方法。结果环介导等温扩增法在63℃条件下,40min内可检出过敏原大豆成分,该方法能够有效对大豆成分进行快速检测,具有较强的特异性,灵敏度可达0.01%(w/w)大豆粉。结论该方法特异性强,灵敏度高,可以快速、准确检测食品中过敏原大豆成分。

大豆主要致敏蛋白生化特性的研究进展

大豆是一种优质植物蛋白原料,其种子中蛋白质含量为36%～38%,但大豆中所含的多种致敏蛋白质是限制大豆在饲料和食品中利用的关键因素。本文对大豆主要致敏原的生物化学特性进行了综述。

焦磷酸测序技术检测大豆过敏原成分GlymBd 30K基因

[目的]建立一种通过焦磷酸测序技术检测大豆过敏原成分的方法。[方法]针对大豆Glym Bd30K基因设计特异性PCR引物和焦磷酸测序引物,利用设计的特异性引物扩增各测试材料的特异基因片段并进行焦磷酸测序。[结果]该检测方法对大豆过敏原成分具有非常好的重现性和特异性,测序结果在Gen Bank中进行同源性比对分析,表明目标序列能够作为鉴定Glym Bd 30K基因很好的序列。[结论]为食品中的大豆过敏原成分快速检测提供很好的技术支撑。

大豆主要过敏原Gly m Bd 30K的抗原表位区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定

根据文献并结合生物信息学方法选取大豆主要过敏原Gly m Bd 30k的抗原表位区,采用PCR方法扩增出该抗原表位区基因片段,并通过酶切连接分别构建单体的pET表达载体(pET-sGly)和二聚体的pET表达载体(pET-dGly),重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)plysS,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE分析;同时用Ni2+离子亲和层析柱纯化表达的sGly和dGly抗原表位蛋白,用western-blotting和ELISA检测重组蛋白的免疫原性。结果表明:表达的单体sGly蛋白以可溶性表达为主,而其二聚体dGly蛋白以包涵体形式存在,纯化的sGly和dGly蛋白都具有较好的免疫原性,重组蛋白sGly的抗原性更佳。成功构建的大豆主要过敏原Gly m Bd 30k蛋白的抗原表位区单体sGly蛋白及其二聚体dGly蛋白的工程菌,为研制大豆主要过敏原的单克隆抗体以制备用于大豆主要过敏原检测的试剂奠定了基础。