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人精脒/精胺N1乙酰基转移酶基因的克隆、表达和纯化
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作者 孙慧 龚磊 +3 位作者 刘斌 杨亚培 徐春晓 刘贤锡 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2008年第2期128-131,共4页
目的构建人精脒/精胺N1乙酰基转移酶基因的原核表达载体,诱导该质粒在大肠杆菌中表达并纯化其表达的重组蛋白。方法从大肠癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增人SSAT基因的cDNA片段,经TA克隆及亚克隆方法构建原核表达载体pTriEx-4-SSAT... 目的构建人精脒/精胺N1乙酰基转移酶基因的原核表达载体,诱导该质粒在大肠杆菌中表达并纯化其表达的重组蛋白。方法从大肠癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增人SSAT基因的cDNA片段,经TA克隆及亚克隆方法构建原核表达载体pTriEx-4-SSAT。将重组表达质粒转化入E.coliJM109(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定表达蛋白,并通过6His-tag,利用亲和层析法纯化表达的融合蛋白。结果酶切鉴定和DNA测序显示,人SSAT的cDNA片段成功插入表达载体pTriEx-4中,而且方向正确,SDS-PAGE电泳显示表达出20 kD的外源蛋白。Western blot检测结果显示,表达出的蛋白为6His-tag的融合蛋白,而且用Ni-NTA亲和层析法纯化了该重组蛋白。结论成功构建、表达和纯化了重组SSAT蛋白,为制备其抗体及研究该基因与结直肠肿瘤的关系提供了有力的工具。 展开更多
关键词 精脒/精胺n1乙酰基转移酶 原核表达 结直肠肿瘤
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大鼠心肌多胺代谢限速酶ODC、SSAT活性分析 被引量:9
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作者 赵雅君 王丽娜 +4 位作者 李鸿珠 张力 徐长庆 孙轶华 Wang Rui 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期555-559,共5页
目的建立大鼠心肌多胺代谢限速酶鸟氨酸脱羧酶(ODC)及精脒/精胺乙酰转移酶(SSAT)活性分析方法。方法以Langendorff离体灌流心肌为实验材料,制备心肌组织匀浆;分别以dl[114C]Ornithine及[114C]acetylCoenzymeA为底物,以液体闪烁计数仪记... 目的建立大鼠心肌多胺代谢限速酶鸟氨酸脱羧酶(ODC)及精脒/精胺乙酰转移酶(SSAT)活性分析方法。方法以Langendorff离体灌流心肌为实验材料,制备心肌组织匀浆;分别以dl[114C]Ornithine及[114C]acetylCoenzymeA为底物,以液体闪烁计数仪记录生成的14CO2及[14C]acetylspermidine的放射活度,并以其代表ODC,SSAT的活性;计算大鼠心肌ODC、SSAT的酶促反应动力学参数,筛选出适宜的底物浓度;同时观察一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)对酶活性的影响。结果①大鼠心肌ODC、SSAT基础活性分别为:(9.67±3.09)nmol·mg-1Pro·h-1;(3.59±0.91)nmol·mg-1Pro·min-1。②ODC催化LOrnithine的酶促反应动力学参数Km=(54.95±8.14)μmol·L-1;Vmax=(2.364±0.37)nmol·mg-1·h-1;SSAT催化AcetylCoenzymeA的酶促反应动力学参数Km=(12.87±1.88)μmol·L-1;Vmax=(0.50±0.07)nmol·mg-1·min-1。③大鼠心肌ODC、SSAT活性检测的底物浓度分别为:90μmol·L-1(18.5kBq)DL[114C]Ornithine及36μmol·L-1(2.96kBq)[114C]acetylCoA。④SNP呈浓度依赖性地抑制ODC的活性、诱导SSAT的活性。结论建立了大鼠心肌多胺代谢限速酶鸟氨酸脱羧酶(ODC)及精脒/精胺乙酰转移酶(SSAT)活性的分析方法,该方法简便易行;根据Km值确定测定大鼠心肌ODC及SSAT? 展开更多
关键词 大鼠 心肌 鸟氨酸脱羧酶 精脒/精胺乙酰转移酶 方法
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Effect of diethylstilbestrol on polyamine metabolism in hamster epididymis 被引量:2
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作者 Masato Ohe Shigeru Matsuzaki 《Asian Journal of Andrology》 SCIE CAS CSCD 2003年第4期301-306,共6页
<abstract>Aim: To investigate the effect of diethylstilbestrol (DES), one of the most potent endocrine disruptors, on the metabolism of polyamines in hamster epididymis. Methods: Male golden hamsters of 7-week-o... <abstract>Aim: To investigate the effect of diethylstilbestrol (DES), one of the most potent endocrine disruptors, on the metabolism of polyamines in hamster epididymis. Methods: Male golden hamsters of 7-week-old were kept under a light and dark cycle of 14 h and 10 h for 1 week to stimulate maximally the gonadal function. DES was injected subcutaneously at doses of 0.01 mg·kg-1·day-1, 0.1 mg·kg-1·day-1 and 1 mg·kg-1·day-1 for one week. Results: DES treatment caused a significant decrease in the weight of epididymis. The activity of epididymal ornithine decar boxylase (ODC) increased 1 day after DES treatment, kept at a high level for 4 days and then decreased to nearly normal level at day 7. The activity of spermidine/spermine N1-acetyltransferase (SSAT) also increased transiently after DES treatment. The contents of putrescine, spermidine, spermine and N1-acetylspermidine were increased 1 day -4 days after DES treatment and restored to normal at day 7. All these changes showed a marked difference between the caput and the cauda. Conclusion: The polyamine biosynthesis in the hamster epididymis can be affected by DES, a xenoestrogen. DES may probably affect polyamine metabolism in the epididymis by regulating the rate-limiting enzymes involved in the polyamine biosynthesis. 展开更多
关键词 diethylstilbestrol polyamines ornithine decarboxylase spermidine/spermine n1-acetyltransferase
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多胺代谢与缺血性心血管疾病研究进展 被引量:5
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作者 任婷 成细华 +5 位作者 陈聪 吴若霞 饶春梅 彭霞 孙彦波 黄政德 《湖南中医药大学学报》 CAS 2017年第6期690-692,共3页
多胺广泛分布于生物组织和体液中,参与体内多种生理和病理过程,具有促进细胞生长、分化、增生,对维持细胞膜和线粒体的完整性,DNA和RNA结构的稳定性,以及在信号转导、基因表达、蛋白合成等方面都意义重大。多胺参与心肌缺血损伤的发生,... 多胺广泛分布于生物组织和体液中,参与体内多种生理和病理过程,具有促进细胞生长、分化、增生,对维持细胞膜和线粒体的完整性,DNA和RNA结构的稳定性,以及在信号转导、基因表达、蛋白合成等方面都意义重大。多胺参与心肌缺血损伤的发生,多胺代谢失衡,鸟氨酸脱羧酶及精脒/精胺乙酰转移酶活性改变,腐胺生成增多而精胺、精脒减少,将导致继发性的心肌损伤,本文就多胺及多胺在缺血性心血管疾病研究中的意义及进展加以综述。 展开更多
关键词 多胺 ODC ssat 心肌缺血
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人精脒/精胺N^1-乙酰基转移酶的原核表达与鉴定
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作者 王亚芬 韩钰 《武汉生物工程学院学报》 2008年第3期125-127,132,共4页
用RT—PCR从人肺癌细胞株中获得精脒/精胺N^1-乙酰基转移酶(SSAT)编码区cD—NA,克隆到大肠杆菌原核表达载体pET15b中,并让该载体在大肠杆菌中高效表达出SSAT重组蛋白,利用Ni—NTA树脂亲和层析纯化出重组蛋白,从而建立了SSAT原核表达和... 用RT—PCR从人肺癌细胞株中获得精脒/精胺N^1-乙酰基转移酶(SSAT)编码区cD—NA,克隆到大肠杆菌原核表达载体pET15b中,并让该载体在大肠杆菌中高效表达出SSAT重组蛋白,利用Ni—NTA树脂亲和层析纯化出重组蛋白,从而建立了SSAT原核表达和纯化系统。 展开更多
关键词 精脒/精胺n^1-乙酰基转移酶 肺癌细胞株 原核表达 蛋白纯化
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