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犬冠状病毒的分离鉴定及其纤突蛋白基因的克隆与序列比较 被引量:8
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作者 胡桂学 夏咸柱 +2 位作者 金宁一 涂长春 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期563-569,共7页
以犬胎原代细胞,采用同步接种、带毒传代和添加新细胞的方法,从1例腹泻犬脾脏和1例临床健康犬肠内容物中分离出2株犬冠状病毒(CCVYS1,CCVCI1)。该2株病毒可使CRFK细胞出现典型的细胞融合病变,与从美国引进的... 以犬胎原代细胞,采用同步接种、带毒传代和添加新细胞的方法,从1例腹泻犬脾脏和1例临床健康犬肠内容物中分离出2株犬冠状病毒(CCVYS1,CCVCI1)。该2株病毒可使CRFK细胞出现典型的细胞融合病变,与从美国引进的CCVNL-18参考株形成的细胞病变相似;电镜负染和超薄切片观察,分离毒株细胞培养物中均含有典型的冠状病毒粒子,并形成胞浆内包涵体;经理化学、生物学鉴定,具有CCV的特性;间接免疫荧光试验鉴定,证明为CCV;动物回归试验证明,CCVYS1毒力较强,CCVCI1毒力较弱。利用RT-PCR技术,分别扩增了CCVNL-18、CCVYS1和CCVCI1株纤突蛋白(S)主要功能区基因片段,经克隆、序列测定、计算机比较核苷酸和推导的氨基酸序列,结果为:(1)CCVYS1和CCVCI1与国外发表的K378等5株CCV和CCVML-18株的同源性为91.7%~99.4%和92.0%~99.4%,而与TGEV和FIPV的同源性为90.2%和88.0%~90.0%;Ab抗原亚位点与CCV相同,不同于TGEV和FIPV,进一步证明本研究分离的病毒为CCV;(2)CCVYS1、CCVCI1株与K378等CCV强毒株同源? 展开更多
关键词 犬冠状病毒 分离鉴定 纤突蛋白基因 克隆
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鸽视顶盖快速显著感知编码模型研究
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作者 王松伟 黄淑漫 +1 位作者 师丽 王梦珂 《系统仿真学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期4086-4099,共14页
在经典目标识别理论中,哺乳动物的视网膜和LGN中许多神经元执行了DoG (Difference of Gaussian)操作,其功能一般认为是白化,祛除冗余,并增强了边缘。通过对鸽视顶盖的ON-OFF神经元进行电生理研究,发现其利用FSL(First-SpikeLatency)进... 在经典目标识别理论中,哺乳动物的视网膜和LGN中许多神经元执行了DoG (Difference of Gaussian)操作,其功能一般认为是白化,祛除冗余,并增强了边缘。通过对鸽视顶盖的ON-OFF神经元进行电生理研究,发现其利用FSL(First-SpikeLatency)进行场景整体信息粗略快速的传递,利用发放率对场景中显著性特征进行相续的传递。通过解析神经元响应模式,提出了OT(Optic Tectum)的ON-OFF神经元工作机制的一种假设,搭建了模型架构。该研究对新型的Spike神经网络的研究具有一定的借鉴意义。 展开更多
关键词 视顶盖 显著性表征 spike神经网络 延时编码
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砂岩油气藏地震精细描述在油田开发中的应用 被引量:3
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作者 年静波 刘喜武 孟凡顺 《海洋石油》 CAS 2006年第1期51-56,共6页
针对砂岩油藏描述中如何将地震、测井和地质信息进行有效一体化综合的问题,提出砂岩油气藏地震精细描述的策略与技术路线,认为基于地质模型测井曲线约束的地震波阻抗反演是确保地震、测井和地质信息可靠一体化综合的首要技术。将油藏地... 针对砂岩油藏描述中如何将地震、测井和地质信息进行有效一体化综合的问题,提出砂岩油气藏地震精细描述的策略与技术路线,认为基于地质模型测井曲线约束的地震波阻抗反演是确保地震、测井和地质信息可靠一体化综合的首要技术。将油藏地震精细描述技术应用在某海上油田开发区块。应用的技术系列包括:斜井合成地震记录的制作;子波反演与层位标定迭代技术层位标定;储层特征测井曲线重构;测井约束稀疏脉冲波阻抗反演;随机模拟;信息融合等。对该区块两个油层组的油气藏构造、储层(岩性、物性)的空间分布及油气分布规律进行了精细研究和描述,为该区块井位部署调整提供地质依据。研究表明,以测井曲线重构、波阻抗反演和随机模拟为核心的地震油藏描述技术,可以较好地解决储层参数定量估算和含油气预测问题。 展开更多
关键词 油田开发 地震油藏描述 斜井 拟声波阻抗 稀疏脉冲反演 随机模拟
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鸡传染性支气管炎病毒CK/CH/LDL97Ⅰ/97株S基因特征
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作者 刘昕 刘胜旺 +4 位作者 孔宪刚 张庆霞 荣骏弓 韩宗玺 邵昱昊 《中国病毒学》 CAS CSCD 2006年第1期68-70,共3页
The spike gene(S)of Infectious bronchitis virus(IBV)CK/CH/LDL97Ⅰ/97 isolate was amplified,cloned,sequenced and analyzed.Results showed that the S gene was 3501 bp encoding a polypeptide of 1167 amino acids.The precur... The spike gene(S)of Infectious bronchitis virus(IBV)CK/CH/LDL97Ⅰ/97 isolate was amplified,cloned,sequenced and analyzed.Results showed that the S gene was 3501 bp encoding a polypeptide of 1167 amino acids.The precursor of the S protein was cleaved into S1 and S2 fragments,which comprised 541 and 626 amino acid residues,respectively.The cleavage site sequence was RRTGR.The homologies of nucleotide and amino acid sequences of S1 gene between CK/CH/LDL97 Ⅰ/97 and 27 reference IBV strains ranged from 60.6% to 99.6%,and 50.5% to 99.1%,respectively.The CK/CH/LDL97Ⅰ/97 S1 was most similar to that of three proventriculus IBV isolates,Q1(99.1%),J2(98.9%),T3(98.9%),which were isolated in China.Phylogenetic analysis of S1 proteins indicated that CK/CH/LDL97Ⅰ/97,Q1,J2 and T3 formed a separated cluster,which might belong to a novel genotype of IBV. 展开更多
关键词 传染性支气管炎病毒 S糖蛋白 基因特征
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2010~2012年华中地区猪流行性腹泻病毒分子特征和遗传进化分析 被引量:80
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作者 郑逢梅 霍金耀 +4 位作者 赵军 常洪涛 王晓梦 陈陆 王川庆 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期197-205,共9页
2010年底开始,猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)在中国境内出现严重暴发。为探讨该病突然再次暴发的原因,对2010年10月至2012年6月于华中地区11个地市收集的12株猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemic diarrhea virus,PEDV)S、M... 2010年底开始,猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)在中国境内出现严重暴发。为探讨该病突然再次暴发的原因,对2010年10月至2012年6月于华中地区11个地市收集的12株猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemic diarrhea virus,PEDV)S、M和ORF3基因进行RT-PCR扩增、克隆及测序,并对其序列变化、遗传进化关系、抗原位点、糖基化位点和多肽极性进行分析。结果显示,12株PEDV流行毒株S、M和ORF3基因部分核苷酸及氨基酸的改变使其关键序列明显不同于以往毒株,其中有11株流行毒株的S基因比现用疫苗毒株CV777多9个核苷酸,而且在其S1区N′端存在大量的氨基酸突变。遗传进化分析显示,12株PEDV华中地区毒株与2007~2009年韩国毒株、2007~2008年泰国毒株、2009~2010年越南毒株、2011年日本毒株及2010~2012年中国其它地区流行毒株亲缘关系均较密切,而与欧洲株(CV 777、Br1/87)、中国现用疫苗株(CV777)及2003~2007年中国分离株(LJB/03、JS-2004-2、DX、QH、LZC)亲缘关系均较远。与现用疫苗株(CV777)相比,流行毒株S蛋白的抗原位点、糖基化位点和跨膜螺旋均有明显改变,提示PEDV在近年呈现快速变异和进化的趋势,因而可能需要选择更有效的疫苗株来控制PEDV的暴发。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 分子特征 系统进化分析 S基因 ORF3基因 M基因 病毒变异
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水稻幼穗分化特异性启动子pRFL的克隆和特征分析
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作者 苏军 林智敏 +3 位作者 刘霞 胡太蛟 李刚 颜静宛 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期675-679,共5页
组织特异性启动子能够驱动基因在特定的时期和部位表达,克服组成型启动子启动的外源基因在受体植物中非特异、持续、高效表达所造成的浪费,是基因工程技术最重要元件之一.本研究利用PCR技术从水稻基因组中克隆了幼穗分化特异表达基因RF... 组织特异性启动子能够驱动基因在特定的时期和部位表达,克服组成型启动子启动的外源基因在受体植物中非特异、持续、高效表达所造成的浪费,是基因工程技术最重要元件之一.本研究利用PCR技术从水稻基因组中克隆了幼穗分化特异表达基因RFL翻译起始位点上游2 001 bp的启动子序列,命名为pRFL.生物信息分析显示,该片段含有36个转录起始核心启动子元件TATA-box和多个启动子增强子区顺式作用元件CAAT-box,以及多个光反应调控元件和植物激素响应元件等.将其与GUS基因构建成植物表达载体,导入水稻"日本晴",组织化学染色法检测显示,转基因水稻植株叶片、茎均无GUS显色,花序及发育中的小花有较强表达;荧光定量PCR测定幼穗GUS基因转录活性,显示pRFL驱动的GUS基因表达量比actin启动子驱动的GUS基因表达量高2.9倍.上述结果初步证明了pRFL为幼穗分化特异性启动子. 展开更多
关键词 水稻 幼穗分化 特异性启动子 克隆 特征分析
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10株猪流行性腹泻病毒云南分离株的S基因克隆及分子特征 被引量:4
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作者 钱祁昇 朱丽 +6 位作者 苏琳琳 张天羽 赵翔玥 郑晓林 吕念词 柴俊 张以芳 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第5期101-107,共7页
自2013年来,猪流行性腹泻病(PED)的暴发给云南省养猪业带来严重的经济损失。本研究对2018年来自云南4个地区的42份病料中分离出的6株猪流行性腹泻病毒(PEDV)的部分S基因进行扩增,并结合在2013年所分离到的来自云南4个地区的4株PEDV流行... 自2013年来,猪流行性腹泻病(PED)的暴发给云南省养猪业带来严重的经济损失。本研究对2018年来自云南4个地区的42份病料中分离出的6株猪流行性腹泻病毒(PEDV)的部分S基因进行扩增,并结合在2013年所分离到的来自云南4个地区的4株PEDV流行株,进行分子特征和遗传进化分析。结果显示:这2年的分离株和CV777株相比,2018年分离株的核苷酸和氨基酸突变位点增加了12个和7个,且有3个丝氨酸突变都是在COE结构域(69、101和146)。系统发育分析表明,2018和2013年分离株的核苷酸和氨基酸的同源性为95.6%~98.8%,95%~98.8%;分别与CV777株相比,核苷酸和氨基酸的同源性差异较小(94.9%~95.5%和92.7%~95.4%;94.5%~95.2%和93.4%~94.2%),亲缘关系都较远。2013年的分离株主要分布在G2b亚群,而2018年的分离株主要分布在G2a和G2c亚群,具有遗传多样性。N-糖基化和磷酸化位点预测分析显示,在216位上预测的N-糖基化位点由NSSI→NSSF,尤其是COE结构域中的丝氨酸取代而导致其可预测磷酸化。这些变异很可能会影响其抗原性和疫苗效果,导致PEDV控制效果不好。本研究阐明了云南部分地区PEDV流行毒株的分子流行病学和遗传特征,为该地区PED的防控奠定理论基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 PEDV S基因 分子特征 系统发育分析
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