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利用微载体系统规模化生产鸡成肌细胞
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作者 刘屹森 蔡佳琦 +9 位作者 李石磊 李莹莹 王守伟 杨峰 胡海娟 刘文婷 李雨爽 董圣艳 陈嘉璇 梁俊 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第24期127-137,共11页
随着细胞培育肉产业的快速发展,应用于细胞培育肉生产的细胞规模化培养技术受到广泛关注。本研究采用3D Table Trix^(TM)和Cytodex 1两种微载体在转瓶中对成肌细胞进行悬浮培养,筛选出更适于成肌细胞大规模培养的微载体,进而采用单因素... 随着细胞培育肉产业的快速发展,应用于细胞培育肉生产的细胞规模化培养技术受到广泛关注。本研究采用3D Table Trix^(TM)和Cytodex 1两种微载体在转瓶中对成肌细胞进行悬浮培养,筛选出更适于成肌细胞大规模培养的微载体,进而采用单因素控制变量法探讨了不同培养条件对细胞大规模培养的影响。两种微载体的显微示意图显示,Cytodex 1是一种表面光滑且无大孔结构的球体,3D Table Trix^(TM)是一种表面多孔且孔隙较大的不规则球体。细胞转瓶培养结果显示,细胞在3D Table Trix^(TM)上生长更加高效,培养10 d后细胞收获量为8.97×10^(5)个/m L。优化细胞在3D Table Trix^(TM)的培养条件,结果显示,在细胞贴壁期,以40 r/min速率搅拌10 min、静置50 min的间隔搅拌方式培养最佳;在细胞接种密度1×10^(5)个/m L、微载体质量浓度2 mg/m L、搅拌速率40 r/min的条件下,初始培养血清体积分数为20%,培养24 h后更换为血清体积分数10%的培养基,并采用隔天更换50%培养基的补料方式,可获得最佳的细胞培养效率。通过微载体的珠对珠转移,将细胞转移至2 L转瓶,最终收获细胞数量1.07×10^(9)个,存活率达到95%以上。带有细胞的微载体还可以冻存和复苏,并且和解冻细胞的增殖状况和形态没有显著差异。优化后的培养工艺实现了在转瓶中成肌细胞高效的大规模培养,并在工业化大规模生产细胞培育肉领域具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 成肌细胞 细胞培育肉 微载体 转瓶 优化培养工艺
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ADSCs-壳聚糖/明胶水凝胶工程化软骨的三维动态构建 被引量:5
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作者 宋克东 杨延飞 +3 位作者 李文芳 李丽颖 朱艳霞 刘天庆 《功能材料》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第15期15021-15030,共10页
组织工程软骨的体外构建被认为是一种有希望治疗关节软骨缺损的有效途径。为评估载脂肪干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSCs)壳聚糖/明胶水凝胶支架,在体外动态构建组织工程软骨相对传统静态培养的优势,本研究用壳聚糖/明胶制备了... 组织工程软骨的体外构建被认为是一种有希望治疗关节软骨缺损的有效途径。为评估载脂肪干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSCs)壳聚糖/明胶水凝胶支架,在体外动态构建组织工程软骨相对传统静态培养的优势,本研究用壳聚糖/明胶制备了软骨仿生支架,并检测其物理性质。在制备的水凝胶支架上以1×107cells/m L密度接种ADSCs后,分别置于转瓶及T-瓶的软骨诱导基中培养两周,通过试剂染色、代谢检测和电镜观察,考察了细胞的软骨分化能力、活性、生长分布、渗透深度、增殖及胞外基质分泌情况。结果表明,壳聚糖/明胶支架的平均孔径为118.25±19.51μm,孔隙率为82.60±2.34%,吸水率为361.28±0.47%,弹性模量为61.2±0.16 k Pa,具有良好生物相容性。ADSCs生长状态良好,可向软骨细胞分化,适于作为组织工程软骨构建的种子细胞。表征结果显示,转瓶内水凝胶支架中细胞蛋白多糖的表达更显著,细胞生长分布更加均匀,细胞外基质分泌基本填满整个支架。因此,转瓶载壳聚糖/明胶支架所提供的三维动态环境,是体外构建组织工程软骨的良好方法。 展开更多
关键词 转瓶 组织工程软骨 脂肪干细胞 壳聚糖/明胶水凝胶 细胞培养
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昆虫细胞Sf9在四种生物反应器中的培养 被引量:5
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作者 谢秋玲 郑云程 廖美德 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期96-100,共5页
昆虫细胞表达系统已广泛的应用于表达各种重组蛋白,研究昆虫细胞Sf9分别在4种生物反应器:转瓶、摇瓶、Bellocell反应器、发酵罐中进行悬浮培养.转瓶、摇瓶、Bellocell和发酵罐的细胞接种密度都是5×105/mL.对细胞数量、葡萄糖浓度... 昆虫细胞表达系统已广泛的应用于表达各种重组蛋白,研究昆虫细胞Sf9分别在4种生物反应器:转瓶、摇瓶、Bellocell反应器、发酵罐中进行悬浮培养.转瓶、摇瓶、Bellocell和发酵罐的细胞接种密度都是5×105/mL.对细胞数量、葡萄糖浓度以及主要代谢产物乳酸、氨的浓度进行检测.昆虫细胞经转瓶和摇瓶培养,细胞密度达到最高分别为:5.5×106、7.3×106/mL,是起始密度的11倍和14.6倍.昆虫细胞经Bellocell和发酵罐培养,细胞密度达到最高分别为:8.01×106、1.52×107/mL,是起始密度的16.02倍和30.4倍.昆虫细胞经四种生物反应器中的悬浮培养之后,都达到了很高的密度,尤其是经发酵罐培养达到如此高密度,为高效大规模表达药物蛋白,奠定重要的基础. 展开更多
关键词 昆虫细胞SF9 转瓶 摇瓶 Bellocell反应器 发酵罐
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人脂肪干细胞复合胶原/壳聚糖支架在生物反应器中扩增的研究 被引量:3
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作者 朱艳霞 刘天庆 +2 位作者 宋克东 马学虎 崔占峰 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第2期239-246,共8页
研究表明脂肪组织是多潜能干细胞的又一新来源,脂肪组织来源的干细胞可被用于细胞治疗及组织工程。然而,传统的培养方法很难满足临床需求。为获得大量的脂肪干细胞以满足临床需求,现将脂肪干细胞接种到胶原/壳聚糖支架上,比较细胞在静... 研究表明脂肪组织是多潜能干细胞的又一新来源,脂肪组织来源的干细胞可被用于细胞治疗及组织工程。然而,传统的培养方法很难满足临床需求。为获得大量的脂肪干细胞以满足临床需求,现将脂肪干细胞接种到胶原/壳聚糖支架上,比较细胞在静态环境和在转瓶中动态扩增的情况。通过CCK-8检测细胞增殖情况;并分析葡萄糖和乳酸的代谢情况;14d后扫描电镜观察细胞在支架内的生长情况;流式细胞仪检测干细胞相关表面标记表达;RT-PCR检测干细胞相关转录因子的表达;并检测扩增后的干细胞的多向分化潜能。结果表明:在动态微环境中扩增14d后,与静态条件下相比,支架内的细胞具有更强的增殖活性和更好的多向分化潜能。所扩增的细胞能够保持原有干细胞的特性。结论:所设计的支架-转瓶培养系统是一个简便有效的扩增脂肪干细胞的方法。 展开更多
关键词 脂肪干细胞 扩增 支架 转瓶 组织工程
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一种确定转瓶中昆虫细胞摄氧率的简便方法 被引量:3
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作者 赵佼 谭文松 +2 位作者 周亚竞 张虹华 俞俊棠 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1997年第5期540-544,共5页
提出一种确定转瓶中昆虫细胞摄氧率(OUR)的简便方法。不同溶氧水平的转瓶实验表明:在考虑了小型培养装置中溶氧解吸过程的这种方法不仅能正确反映细胞OUR的变化状况,而且能借助OUR迅速判断培养细胞所处生理状态。
关键词 昆虫细胞 解吸 生理状态 摄氧率 转瓶
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转瓶内部结构对无血清悬浮培养昆虫细胞的影响 被引量:4
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作者 赵佼 戴琥 谭文松 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期755-758,共4页
The good growth behavior was achieved for a Trichoplusia ni cell line,called Tn 5B1 4(Tn5)cells,in suspension culture by the use of IC-SFM serum free medium developed by our lab.This medium,combined with the specially... The good growth behavior was achieved for a Trichoplusia ni cell line,called Tn 5B1 4(Tn5)cells,in suspension culture by the use of IC-SFM serum free medium developed by our lab.This medium,combined with the specially designed spinner flask with relatively good culture environment,could support the fragile Tn5 cells to grow well even in low inoculum density.The effect of inner designs of spinner flasks on cellular growth and metabolism was discussed on the basis of this culture system. 展开更多
关键词 昆虫细胞 无血清 转瓶 悬浮培养
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在静态和动态培养条件下杂交瘤细胞的生长和代谢 被引量:3
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作者 张立 沈红 张元兴 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期373-377,共5页
通过对WuT3杂交瘤细胞在静态和动态培养条件下的比较 ,发现细胞生长和代谢有很大不同。在静态培养条件下 ,细胞培养周期较长 ,细胞密度较高 ;但在动态培养条件下 ,细胞代谢更加旺盛 ,葡萄糖、氨基酸等营养物质的消耗加快 ,乳酸、氨。
关键词 杂交瘤细胞 方瓶培养 转瓶培养 细胞培养
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转瓶中不同供氧状况对昆虫细胞生长和代谢的影响 被引量:1
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作者 赵佼 谭文松 俞俊棠 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期298-302,333,共6页
对传统转瓶进行了改进,使之成为一套既可有效控制供氧又可在线检测细胞摄氧率的小型多功能培养装置,并在此基础上,系统考察了不同供氧状况对IPLB-Sf21-AE昆虫细胞生长和代谢的影响。结果表明:维持适宜的溶氧水平对优化... 对传统转瓶进行了改进,使之成为一套既可有效控制供氧又可在线检测细胞摄氧率的小型多功能培养装置,并在此基础上,系统考察了不同供氧状况对IPLB-Sf21-AE昆虫细胞生长和代谢的影响。结果表明:维持适宜的溶氧水平对优化昆虫细胞的生长和代谢至关重要,昆虫细胞的摄氧率与其生长代谢密切相关,并可作为在线监控细胞生理状态的重要依据。 展开更多
关键词 转瓶 昆虫细胞 溶氧 供氧 细胞培养
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在搅拌培养和静态培养中造血细胞亚群组成的分析
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作者 迟占有 蔡海波 +2 位作者 姜华 谭文松 戴干策 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第4期233-236,共4页
目的 分析转瓶和方瓶培养过程中造血细胞亚群组成的变化。方法 观察培养过程中脐血单个核细胞总细胞扩增倍数 ,CD34+ 细胞、CD33+ 细胞、CFU GM、CD4 1+ 细胞、CFU Mk和BFU E占总细胞的比例及其随培养时间的变化。结果  14d的培养中 ... 目的 分析转瓶和方瓶培养过程中造血细胞亚群组成的变化。方法 观察培养过程中脐血单个核细胞总细胞扩增倍数 ,CD34+ 细胞、CD33+ 细胞、CFU GM、CD4 1+ 细胞、CFU Mk和BFU E占总细胞的比例及其随培养时间的变化。结果  14d的培养中 ,无论是用转瓶和方瓶 ,总细胞不断扩增 ,CD34+ 细胞含量在第 7天、CFU GM含量在第 10天、BFU E含量在第 5天达到最高 ,而后出现分化 ,转瓶和方瓶培养的CD34+ 细胞和CFU GM和BFU E含量差异无显著意义 ;CFU Mk则不同 ,其含量在转瓶培养第 7天时达到最高 ,而在方瓶第 10天达到最高 ,在转瓶中CFU Mk的含量一直低于方瓶培养 ;两种培养过程中CD33+ 细胞比例均在 5 0 %~ 70 %之间 ,而且差异无显著意义。转瓶培养中CD4 1+ 细胞含量到后期出现下降 ,而方瓶中则一直增加。结论 与静态培养环境相比 ,搅拌环境对干 祖细胞分化速度、粒 巨噬系祖细胞和红系祖细胞的分化没有明显影响 ,但不利于巨核系祖细胞的扩增 。 展开更多
关键词 造血细胞 搅拌培养 静态培养 剪切力 分化
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贴壁及悬浮培养的Trex-293细胞生长及其重组腺病毒制备产率的比较分析 被引量:1
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作者 全红花 陈悬卓 成永哲 《科学技术与工程》 北大核心 2012年第32期8637-8641,共5页
为了提高病毒产率并避免制备的重组腺病毒产物中残留的动物血清,将贴壁生长的Trex-293细胞用无动物血清的CD293培养基在搅拌式培养瓶中悬浮培养。分析比较其生长特征及不同条件下的病毒产率。结果表明悬浮培养的细胞生长为稳定状态的时... 为了提高病毒产率并避免制备的重组腺病毒产物中残留的动物血清,将贴壁生长的Trex-293细胞用无动物血清的CD293培养基在搅拌式培养瓶中悬浮培养。分析比较其生长特征及不同条件下的病毒产率。结果表明悬浮培养的细胞生长为稳定状态的时间比贴壁培养时稍长,但每次以(4—6)×105cells/mL密度传代。(3—4)d后基本达到2×106cells/mL,21 d达3×106cells/mL以上,比贴壁细胞密度约高3倍。培养初期,悬浮细胞存活率稍低,培养14 d开始维持90%以上,细胞倍增时间约32 h。而贴壁细胞存活率是基本维持在95%以上。重组腺病毒以200,500和1 000 VP/cell的比例感染悬浮细胞所获产率均值各为18 000,14 000和990 VP/cell,而1 000 VP/cell的比例感染贴壁细胞所获产率均值为10 500 VP/cell。结论为Trex-293细胞用无动物血清的培养基在搅拌式培养瓶中可悬浮培养,当重组腺病毒感染比例为200 VP/cell,感染后48 h,细胞存活率50%时收获有利于提高病毒产率,且高于感染贴壁细胞所获产率。 展开更多
关键词 重组腺病毒产率 Trex-293 搅拌式培养瓶(Spinner Flask) 悬浮培养
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培养方式对真皮组织体外构建的影响 被引量:3
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作者 何燕娜 丁春梅 +2 位作者 江华 周燕 谭文松 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期75-80,共6页
采用静态培养和转瓶培养方式分别构建真皮组织,考察培养方式和搅拌转速对细胞在三维支架材料中增殖、代谢、分布的影响。结果表明,由转瓶培养方式构建的细胞-材料复合物,其最终细胞密度和细胞比生长速率均明显高于静态培养(14.2~27.6&#... 采用静态培养和转瓶培养方式分别构建真皮组织,考察培养方式和搅拌转速对细胞在三维支架材料中增殖、代谢、分布的影响。结果表明,由转瓶培养方式构建的细胞-材料复合物,其最终细胞密度和细胞比生长速率均明显高于静态培养(14.2~27.6×106cells/cm3vs10.1×106cells/cm3和0.145~0.262d-1vs0.111d-1),而转速达80r/min的转瓶尤其突出;静态培养的细胞-材料复合物内部细胞稀少,且分布不均匀,转瓶培养的细胞-材料复合物在材料表面和内部细胞密度都有所提高,分布情况也得到改善,且80r/min转瓶培养的组织其细胞密度和分布均优于10r/min和40r/min转瓶培养。转瓶培养在其转速达到一定强度时能明显提高细胞在支架中的增殖速率,缩短培养时间,并有效改善细胞在支架内的分布,是一种理想的培养方式。 展开更多
关键词 组织工程 真皮 转瓶培养
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INFLUENCE OF MIXING DEVICE ON SERUM-FREE CULTIVATION OF INSECT CELLS IN SPINNER FLASKS
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作者 Zhao Jiao, Dai Hu and Tan Wensong (State Key Lab of Bioreactor Engineering, East China University of Science and Technology Shanghai 200237,China) 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2000年第S1期101-104,共4页
A culture system was developed and successfully employed for the serum-free cultivation of Tn-5B1-4 (Tn5 ) insect cells. With our adaptation procedure, it was possible to obtain cells fully adapted to serum-free media... A culture system was developed and successfully employed for the serum-free cultivation of Tn-5B1-4 (Tn5 ) insect cells. With our adaptation procedure, it was possible to obtain cells fully adapted to serum-free media in stationary T-flasks and then enable these adapted cells to grow well in spinner flasks immediately. The spinner "ask with special stirring design proved tO provide favorable culture environment that made it desirable for use in the serum-free cultivation of Tn5 cells even at low seeding density. 展开更多
关键词 SERUM-FREE insect cells ADAPTATION spinner flasks culture environment
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The Growth Study of Vero Cells in Different Type of Microcarrier
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作者 Yusilawati Ahmad Nor Nurul Hafizah Sulong +2 位作者 Maizirwan Mel Hamzah Mohd Salleh Iis Sopyan 《Materials Sciences and Applications》 2010年第5期261-266,共6页
The fact of microcarrier (MC) culture introduces new possibilities and makes possible the practical high-yield culture of anchorage-dependent cells has generated a considerable focus in this study. The objective of th... The fact of microcarrier (MC) culture introduces new possibilities and makes possible the practical high-yield culture of anchorage-dependent cells has generated a considerable focus in this study. The objective of this research was to study the comparison of Vero cell growth on different types of commercial microcarriers;Cytodex-1, Cytodex-3, Hil-lex? II and Plastic Plus in spinner vessel and two liters bioreactor cultured for 96 hours. Biological performance of the microcarrier in RPMI media showed the preference of Vero cell grew on Cytodex 3 microcarriers with highest maximum viable cell number (2.4 × 105 cells/ml) followed by Cytodex 1, Hillex and Plustic Plus. Vero cell on Cyto-dex-3 data in spinner flask was compared in bioreactor and result showed higher viable cell number in biorector. Thus, this dextran-crosslink gelatin microcarrier (Cytodex 3) provided the best surface for cell attachment and fast proliferation. At the end of this cell growth improvement will be used for virus transfection producing a vaccine in bioreactor. 展开更多
关键词 Cytodex 3 MICROCARRIER SPINNER FLASK VERO CELLS Vaccines
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