三阴型乳腺癌中FOXO3a与SPROUTY2的表达及其临床意义

目的探讨FOXO3a与SPROUTY2(SPRY2)在三阴型乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)中的表达及其相关性。方法采用免疫组化EnV ision两步法检测TNBC组织和正常乳腺组织中FOXO3a与SPRY2的表达,并分析两者与TNBC临床病理特征的关系。结果TNBC组织中FOXO3a与SPRY2表达显著低于正常乳腺组织(P <0. 01)。秩和检验结果显示,TNBC中FOXO3a与SPRY2的表达与组织学分级及淋巴结转移呈负相关。Spearman相关性分析结果显示,TNBC中FOXO3a与SPRY2的表达呈正相关(P <0. 001)。结论 TNBC中FOXO3a与SPRY2的表达呈正相关,两者在TNBC中起抑制作用,可能存在调控关系,从而抑制淋巴结转移。FOXO3a与SPRY2可作为新的判断预后的重要因子,并为临床基因靶向治疗提供新的理论依据。

Sprouty2蛋白表达对肾癌细胞功能影响的实验研究

目的研究Sprouty2蛋白的表达水平对肾癌细胞增殖、侵袭等生物学功能的影响。方法采用RNAi技术,构建质粒转染肾癌细胞系786-O,建立Sprouty2低表达细胞株,通过MTT、Transwell等技术研究Sprouty2蛋白的表达水平对肾癌细胞增殖、侵袭等生物学行为的影响。结果成功构建Sprouty2低表达肾癌细胞系。当Sprouty2表达水平下调后,肾癌细胞的增殖、侵袭能力增强,与对照组及空质粒转染组比较差异有显著性(P<0.05)。结论 Sprouty2的表达对肾癌细胞的功能有一定影响,Sprouty2表达越低,肾癌细胞的增殖及侵袭力越强。

Sprouty2蛋白与人乳腺癌MCF-7细胞增殖与迁徙的研究

目的探讨Sprouty2蛋白与人乳腺癌MCF-7细胞增殖与迁徙的关系。方法通过siRNA技术干扰MCF-7细胞Sprouty2基因的表达,通过Real time PCR、Western blotting以及细胞免疫荧光检测Sprouty2基因的干扰效果,划痕实验以及Transwell实验观察细胞迁移和侵袭的能力,Western blotting检测MMP-2、MMP-9和MMP-13的表达。结果通过siRNA干扰,有效地干扰了Sprouty2基因的表达,建立了Sprouty2基因低表达的细胞株;Sprouty2基因沉默后,细胞的迁移和侵袭能力明显增强;沉默Sprouty2基因的MCF-7细胞中MMP-2、MMP-9和MMP-13蛋白较对照组均升高。结论 Sprouty2基因下调后,MCF-7细胞的迁移和侵袭能力明显提高,可能与MMP-2、MMP-9和MMP-13蛋白有关。

运用RNAi技术构建Sprouty2低表达肾癌细胞株的实验研究

目的构建Sprouty2低表达肾癌细胞株,以进一步研究Sprouty2蛋白在'肾癌发病机制中的生物学功能。方法采用RNAi技术,构建3组质粒,分别转染。肾癌细胞系786-0,建立Sprouty2低表达肾癌细胞株,并运Jf】Western blot检测细胞Sprouty2的表达。结果成功构建Sprouty2 siRNA质粒,转染肾癌细胞后转染组町见绿色荧光蛋白表达,Western blot检测显示Sprouty2表达降低。,结论运用RNAi技术可成功诱导786-0细胞系中Sprouty2蛋白表达降低,为进一步研究蛋白功能提供实验基础。

Sprouty2蛋白在肾透明细胞癌组织中的表达及意义

目的检测肾透明细胞癌及癌旁组织标本中Sprouty2蛋白的表达情况,分析其表达水平与肿瘤的临床进展及患者预后的相关性。方法采用免疫组化与Western blot方法对92例根治性肾切除肿瘤及癌旁组织标本以及8例非肿瘤肾组织中Sprouty2的表达进行检测,并结合临床病理学资料及预后进行统计学分析。结果肾癌中Sprouty2蛋白的表达较癌旁及非肿瘤肾组织中的表达显著减少,并且与肿瘤大小、有无转移、高分期、高分级有相关性(P均<0.01)。Kaplan-Meier生存分析显示Sprouty2低表达组与高表达组之间差异有统计学意义(P<0.01),单因素及多因素回归分析显示Sprouty2的表达水平可作为一个独立参数以评估肾癌患者的预后。结论 Sprouty2的低表达与肾癌的发生及进展相关,可能作为肾癌预测及预后评估的指标。

Sprouty2与肿瘤的研究进展

Sprouty2蛋白对受体酪氨酸激酶(RTK)等信号通路起着重要的抑制作用,其表达在多种肿瘤组织中发生明显下降,并可进一步引起细胞异常增殖、转化及新生血管形成,从而促进肿瘤的发生及发展。现就其与肿瘤发生及发展关系的研究进展进行综述。

SIAh2与Sprouty2在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨SIAh2与Sprouty2在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况及二者的相关性。方法:通过免疫组化方法检测51例肝癌组织、33例癌旁组织(取距癌灶2 cm的组织)及16例正常肝组织中SIAh2及Sprouty2的表达。结果:SIAh2在HCC中的表达阳性率高于癌旁组织及正常肝组织,且癌旁组织表达阳性率高于正常肝组织,而Sprouty2在HCC中的表达阳性率低于癌旁组织及正常肝组织,差异均具有统计学意义(P<0.05)。SIAh2及Sprouty2在HCC中表达的阳性率与肿瘤分化程度及肿瘤大小呈负相关(P<0.05)。结论:SIAh2在HCC中高表达,而Sprouty2在HCC中低表达,二者呈负相关,SIAh2及Sprouty2可能影响HCC的发生、发展。

Sprouty2蛋白在人乳腺癌MCF-7细胞中的表达及增殖情况研究

目的探究Sprouty2蛋白在人乳腺癌MCF-7细胞中的表达及增殖情况。方法回顾性选取2019年1月至2021年12月间就诊于海南省人民医院肿瘤内科的80例乳腺癌患者临床资料,收集乳腺癌组织标本,对Sprouty2蛋白表达的乳腺癌MCF-7细胞进行培养,根据培养方法的不同分为观察组与对照组,观察组应用Sprouty2蛋白特异性抗体孵育,对照组应用DPBS孵育。对比两组Sprouty2蛋白表达情况;利用siRNA技术对MCF-7细胞Sprouty2基因表达进行干预,根据结果分为siRNA干扰组与未干扰组;应用MTT法对细胞增殖活力予以检测,根据划痕试验结果分为沉默组、DMSO对照组;并采用蛋白质印迹法检测MMP-2、MMP-9、MMP-13表达。结果观察组患者MCF-7细胞中Sprouty2蛋白免疫细胞百分数及平均荧光强度为(31.56±0.55)%、3.21±0.16,均明显低于对照组[(37.31±1.32)%、3.29±0.06],差异均有统计学意义(P<0.05)。siRNA干扰组的Sprouty2相对变化量为0.19±0.05,明显低于未干扰组(1.00±0.14),差异有统计学意义(P<0.05)。MTT试验结果显示,经过siRNA干扰,MCF-7细胞活力较对照组显著升高,沉默组细胞迁徙能力明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。沉默Sprouty2基因的MCF-7细胞中MMP-2、MMP-9、MMP-13表达量为2.53±0.27、0.89±0.12、2.64±0.26,均明显高于对照组(1.26±0.17、0.48±0.11、1.72±0.13),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Sprouty2蛋白表达失调与乳腺癌的发生密切相关,基因下调会提升MCF-7细胞增殖与侵袭能力。

miR-122通过介导sprouty2调控肾癌细胞的增殖

目的 :研究mi R-122在肾癌发生中的作用以及与sprouty2之间的关系。方法 :通过RT-q PCR实验,测定32对肾癌组织及邻近癌旁组织中mi R-122的表达水平。将mi R-122抑制剂(mi R-122 inhibitor)转染至肾癌细胞株786-0和CAKI-1中,下调mi R-122的表达,在不同时间点,CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,RT-q PCR和Western blot检测sprouty2m RNA和蛋白表达情况。通过双荧光报告素酶基因实验,研究mi R-122与sprouty2 3′UTR结合情况。结果 :mi R-122在肾癌组织中表达明显升高(P<0.05);mi R-122 inhibitor转染后能够抑制肾癌细胞增殖(P<0.05)及导致细胞周期阻滞(P<0.05),并促进肿瘤细胞中sprouty2蛋白的表达(P<0.05);双荧光报告素酶基因实验表明mi R-122 inhibitor能与sprouty2 3′UTR结合,显著升高荧光值(P<0.05)。结论:mi R-122促进肾癌细胞的增殖,sprouty2可能是mi R-122的靶基因。

miR-122抑制Sprouty2促进肾癌细胞增殖

目的研究miR-122在肾癌中的作用及其与Sprouty2的相互关系。方法使用Western blot检测4个肾癌组织和相邻正常组织中Sprouty2的表达水平,RT-qPCR检测42个肾癌组织和相邻正常组织中的miR-122表达水平。下调miR-122或敲低Sprouty2后通过CCK-8实验检测肾癌细胞增殖情况,并使用双荧光素酶基因实验明确miR-122和Sprouty2之间的关系。结果肾癌组织中Sprouty2表达水平低于正常组织(P<0.05),miR-122表达水平高于正常组织(P<0.05)。miR-122下调后肾癌细胞的增殖能力下降(P<0.05)。敲低Sprouty2表达水平能促进肾癌细胞的体外增殖(P<0.05)。miR-122抑制剂能与Sprouty23′-UTR结合,共转染后增强Sprouty2基因的活性。结论Sprouty2基因是miR-122的靶基因。miR-122可以通过抑制Sprouty2基因的活性,促进肾癌的发生、发展。

Sprouty2蛋白在胃癌组织中的表达及其意义

目的：探索Sprouty2（SPRY2）在胃癌及癌旁组织中的表达情况,分析其表达水平与临床病理因素及患者预后的相关性.方法：采用免疫组织化学的方法检测了121例胃腺癌标本中Sprouty2的表达.通过卡方检验评估了SPRY2表达与临床病理因素的相关性,并通过Kaplan-Merier法计算了SPRY2与总体生存率的关系,即SPRY2的预后意义.通过实时定量PCR的方法,我们检测了11对肿瘤组织和癌旁正常组织中SPRY2的mRNA水平并加以比较.结果：SPRY2在121例胃癌组织较低表达80例,较高表达41例,胃癌组织SPRY2表达水平较癌旁组织表达量显著降低.通过卡方检验证明SPRY2的表达与淋巴结转移（P〈0.001）和TNM分期明显相关（P=0.004）.Kaplan-Meier生存分析证明SPRY2低表达组与高表达组的病人存在显著的总体生存率的差异.SPRY2可以作为胃腺癌的一个预后标记物.结论：SPRY2高表达与胃癌病人不良预后明显相关,可作为胃癌预后的评价指标.

Sprouty2蛋白在糖尿病性心肌病中表达的研究

目的:探究Sprouty2蛋白对糖尿病心肌病纤维化程度的影响。方法:选取24只雄性SD大鼠随机分为正常组、DCM组、DCM + Sprouty2慢病毒干扰组,每组8只。DCM组、DCM + Sprouty2慢病毒干扰组高糖高脂饮食喂养4周后,腹腔注射链脲佐菌素30 mg/kg,而正常组普通饲料喂养,腹腔注射柠檬酸钠缓冲液,12周时进行慢病毒转染,16周进行超声心动图检测后处死并取材。分别进行Masson染色、天狼猩红染色、免疫组织化学和TUNEL染色。结果:与正常组相比,DCM组、DCM + Sprouty2慢病毒干扰组血糖值升高,而DCM + Sprouty2慢病毒干扰组与DCM组比较,血糖进一步升高。通过超声心动图检测发现,抑制Sprouty2蛋白表达会进一步加重心功能障碍。与正常组比较,DCM组、DCM + Sprouty2慢病毒干扰组凋亡细胞数有所增加,而DCM + Sprouty2慢病毒干扰组的凋亡细胞量明显上升。通过病理学染色观察到,敲低Sprouty2蛋白导致大量心肌纤维断裂,大量炎性细胞产生,胶原纤维表达明显升高。在免疫组化和蛋白表达上,DCM组、DCM + Sprouty2慢病毒干扰组心肌组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达量升高,而DCM + Sprouty2慢病毒干扰组表达更加明显。结论:抑制Sprouty2蛋白可以促进DCM的纤维化程度,同时促进心肌细胞凋亡。因此,激活Sprouty2蛋白的表达可以逆转DCM。

Sprouty2蛋白调节去势抵抗性前列腺癌细胞增殖、迁移和凋亡的机制研究

目的 探讨快速发育生长因子同源蛋白2抗体(Sprouty2)蛋白调节去势抵抗性前列腺癌细胞增殖、迁移和凋亡的机制.方法 根据试验目的将人去势抵抗性前列腺癌细胞分为Sprouty2蛋白高表达组、阴性对照组、空白对照组.Sprouty2蛋白高表达组通过siRNA技术将小激活RNA(saRNA)转入人去势抵抗性前列腺癌细胞中进行干预;阴性对照组通过siRNA技术将空载体质粒转入人去势抵抗性前列腺癌细胞中进行干预;空白对照组进行常规培养;取对数生长期细胞用于后续实验.噻唑蓝(MTT)测定细胞增殖情况;划痕实验测定细胞迁移能力;Annexin V-FITC和PI双染色测定细胞凋亡情况.Western blot测定Myc促癌基因(c-Myc)、SRY盒转录因子4(Sox4)、E-box结合同源盒1(ZEB1)蛋白、E-钙黏蛋白、波形蛋白表达.结果 Sprouty2蛋白免疫细胞百分比、Sprouty2蛋白免疫细胞荧光强度在各组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05).细胞增殖活力在阴性对照组与空白对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05);Sprouty2蛋白高表达组细胞迁移率明显低于阴性对照组和空白对照组,细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01);细胞迁移率和细胞凋亡率在阴性对照组与空白对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05).E-钙黏蛋白表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01);c-Myc、Sox4、ZEB1蛋白、E-钙黏蛋白、波形蛋白表达水平在阴性对照组与空白对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 Sprouty2蛋白高表达可能通过下调c-Myc、Sox4、ZEB1蛋白、波形蛋白表达,上调Sprouty2蛋白表达抑制去势抵抗性前列腺癌细胞的增殖、迁移和凋亡.

Sprouty2蛋白与人乳腺癌MCF-7细胞增殖与迁徙的关系

目的:探讨Sprouty2蛋白与人乳腺癌MCF-7细胞增殖与迁徙的关系。方法:通过siRNA技术干扰MCF-7细胞sprouty2基因的表达,通过qPCR,细胞免疫荧光和western blotting检测sprouty2基因的干扰效果,MTT检测细胞增殖活力,划痕实验观察细胞迁徙能力,western blotting检测MMP-2,MMP-9和MMP-13的表达。结果:qPCR,细胞免疫荧光和western blotting检测sprouty2基因,发现sprouty2基因的下调很明显,MTT实验发现siRNA Sprouty2基因后的MCF-7细胞比对照组细胞活力明显提高,沉默组细胞的迁徙能力也明显强于对照组,且沉默sprouty2基因的MCF-7细胞,MMP-2,MMP-9和MMP-13蛋白相对对照组均上调。结论:sprouty2基因下调后,MCF-7细胞的细胞活力和迁徙能力明显提高。

miR-27a通过调控Sprouty2促进胰腺癌细胞PANC-1的生长

目的探讨miR-27a在胰腺癌细胞生长过程中的作用及相关机制。方法应用RT-PCR检测胰腺癌组织中miR-27a的表达水平;应用CCK-8生长曲线和软琼脂克隆形成实验检测miR-27a对胰腺癌细胞PANC-1生长能力的影响;应用双荧光素酶报告基因实验和Westernblot筛选miR-27a的靶基因。结果 (1)相比较于癌旁正常胰腺组织,胰腺癌组织中miR-27a表达显著上调;(2)抑制胰腺癌细胞PANC-1内源性miR-27a能够显著下调癌细胞的生长活性;(3)miR-27a能够直接调控Sprouty2基因3'UTR中的MRE序列;(4)抑制PANC-1细胞内源性miR-27a能够显著上调Sprouty2蛋白35%。结论 miR-27通过调控胰腺癌细胞PANC-1中Sprouty2蛋白表达发挥癌基因功能。

KAI1/CD82 suppresses hepatocyte growth factorinduced migration of hepatoma cells via upregulationof Sprouty2

We conducted a study concerning the suppressive mechanism of KAI1/CD82 on hepatoma cell metastasis.Hepatocyte growth factor(HGF)induces the migration of hepatoma cells through activation of cellular sphingosine kinase 1(SphK1).Adenovirus-mediated gene transfer of KAI1(Ad-KAI1)downregulates the SphK1 expression and suppresses the HGF-induced migration of SMMC-7721 human hepatocellcular carcinoma cells.Overexpression of KAI1/CD82 significantly elevates Sprouty2 at the protein level.Ablation of Sprouty2 with RNA interference can block the KAI1/CD82-induced suppression of hepatoma cell migration and downregulation of SphK1 expression.It is demonstrated that KAI1/CD82 suppresses HGF-induced migration of hepatoma cells via upregulation of Sprouty2.

慢病毒载体介导SPROUTY2基因过表达对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖作用的影响

目的 探讨慢病毒表达载体介导的人SPROUTY2基因过表达对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖、克隆性生长和细胞外调节蛋白激酶（ERK）抑制剂敏感性等生物学特性的影响.方法 克隆人SPROUTY2基因,构建SPROUTY2基因与绿色荧光蛋白（GFP）的重组慢病毒表达载体LV-S-GFP及对照载体LV-GFP.脂质体法包装病毒;优化慢病毒感染RPMI8226细胞的条件;荧光显微镜观察GFP表达;反转录聚合酶链反应（PCR）、蛋白质印迹法（Western blot）方法分别检测目的基因及其蛋白的表达,CCK-8法检测RPMI8226细胞增殖及其对ERK 1 /2抑制剂AS703026敏感性的影响,软琼脂克隆形成实验检测细胞的克隆性生长能力.结果 成功地构建了共表达SPROUTY2基因和报告GFP的高滴度慢病毒颗粒.LV-S-GFP实验组RPMI8226细胞中SPROUTY2的表达明显高于LV-GFP对照组,灰度值分别为（230.85±32.12）％和（140.35±36.62）％（P＜ 0.05）.过表达SPROUTY2基因对骨髓瘤细胞增殖具有抑制作用,并可以增强ERK1/2抑制剂AS703026对RPMI8226细胞的杀伤作用.过表达SPROUTY2基因可明显抑制RPMI8226细胞的克隆性生长.结论 慢病毒载体系统可高效介导SPROUTY2基因在RPMI8226细胞中的表达,抑制骨髓瘤细胞增殖及克隆性生长,并能够提高其对ERK抑制剂的敏感性.

高氧对胎鼠肺Ⅱ型上皮细胞EGF、TGFβ1信号通路的影响

目的研究高浓度氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)EGF、TGFβ1信号通路及呼吸抑制拮抗基因Sprouty2表达的影响。方法将原代培养的胎鼠AECⅡ随机分为空气和高氧两个组,观察细胞形态学变化;Annexin V和PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡;实时定量PCR法检测细胞Sprouty2 mRNA的表达;Western blot法检测细胞Sprouty2、EGF受体、磷酸化EGF受体(Tyr1148)、磷酸化EGF受体(Tyr845)、TGF-βⅡ型受体蛋白表达。结果 AECⅡ暴露于高氧后,细胞贴壁不紧,长势欠佳。高氧组早期凋亡细胞明显增多(P<0.05);高氧暴露后24和36 h,Sprouty2 mRNA及蛋白表达随高氧暴露时间延长而增加(P<0.05);高氧暴露后24和36 h,EGF受体、磷酸化EGF受体(Tyr1148)、磷酸化EGF受体(Tyr845)表达均减少,而TGF-βⅡ型受体蛋白表达增加(P<0.05)。结论高氧暴露通过下调EGF信号和上调TGFβ1信号,进而使Sprouty2表达增加,增加的Sprouty2与AECⅡ凋亡相关。

Mnk1对脂多糖诱导的巨噬细胞炎症反应的影响

目的:探究丝裂原活化蛋白激酶相互作用丝苏氨酸激酶1(Mnk1)基因缺失对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞(Mφ)炎症反应的影响及可能机制。方法:选取8~10周龄健康雄性野生型C57BL/6J(WT)、Mnk1基因敲除(KO)小鼠,分为WT+PBS组、KO+PBS组、WT+LPS组、KO+LPS组,腹腔注射PBS或LPS 24 h后,ELISA法检测血清中IL-1β含量,提取脾脏Mφ行qRT-PCR检测脾脏Mφ中IL-1β和Sprouty2(Spry2)的mRNA表达水平。同时分别提取两种品系的小鼠腹腔Mφ进行体外实验,检测巨噬细胞黏附功能,并以等体积LPS或PBS溶液刺激24 h,分为WT+PBS组、KO+PBS组、WT+LPS组、KO+LPS组,并用表达Spry2的腺病毒转染各组Mφ,qRT-PCR法检测Mφ中LFA-1α、IL-1β、iNOS、CD206、Arg1和Spry2的mRNA表达水平,Western blot法检测Mφ中Mnk1、ERK1/2、P-ERK1/2、P-p38、P-JNK、Spry2蛋白水平。结果:在体实验中,腹腔注射LPS的KO+LPS组小鼠较WT+LPS组血清中IL-1β的浓度升高更为显著。与WT+LPS组比较,KO+LPS组脾MφIL-1β的表达水平更高,Spry2的mRNA表达水平下降。体外实验中,与WT+LPS组比较,KO+LPS组IL-1β、iNOS的mRNA表达水平升高,CD206、Arg1、Spry2的mRNA表达水平下降;LFA-1α的表达在WT+PBS和WT+LPS组无明显差异,而KO+LPS组LFA-1α的表达水平较WT+LPS组显著上升。巨噬细胞黏附功能检测结果显示,KO组Mφ的黏附率在多个时间点较WT组均增高。LPS刺激后,Mnk1 KO组的MφSpry2表达较WT下降,而P-ERK1/2表达较WT组升高。Mφ转染过表达Spry2的腺病毒并用LPS刺激后,KO+AdSpry2组MφSpry2表达上升,P-ERK1/2表达较KO+AdGFP组明显下降。结论:Mnk1基因敲除可增强LPS诱导的巨噬细胞炎症反应,其机制可能与Mnk1的底物Spry2参与调控巨噬细胞功能相关。

金雀异黄素通过调控miR-27a及其靶基因对卵巢癌细胞SKOV3生长的影响

目的:研究金雀异黄素对卵巢癌细胞株SKOV3生长的抑制作用及其可能的机制。方法:收集卵巢癌组织及良性组织,应用RT-PCR法检测miR-27a的表达。用不同浓度的金雀异黄素处理细胞,通过SRB法检测金雀异黄素单用或加入miR-27amimics后对细胞株生长的抑制作用;经RT-PCR和Western blot检测miR-27a及靶基因Sprouty2表达的变化。结果:miR-27a在卵巢癌组织中的表达高于良性组织(P<0.05)。金雀异黄素可呈浓度和时间依赖的方式抑制卵巢癌细胞SKOV3生长;金雀异黄素浓度依赖性地下调miR-27a,上调Sprouty2的表达,且miR-27amimics能够部分拮抗金雀异黄素抑制细胞生长的作用。结论:金雀异黄素可能通过下调致癌miR-27a的表达,发挥抑制卵巢癌细胞生长的作用。