SSB/La蛋白在HEK293F细胞中的高效表达、纯化及初步应用

目的天然SSB/La抗原存在难获取、成本高等问题,故使用HEK293F细胞尝试表达重组SSB/La蛋白。方法调取人SSB/La序列并进行基因密码子优化和合成,亚克隆至哺乳动物重组表达质粒后转染HEK293F细胞,完成培养后组合使用DEAE离子交换层析和Ni亲和层析纯化目的蛋白。结果重组SSB/La蛋白在HEK293F细胞中成功表达,随后纯化获得了高纯度的重组SSB/La蛋白,且进一步通过抗SSB抗体检测试剂盒初步证实了重组SSB/La蛋白具有优良的性能。结论成功实现了SSB/La蛋白制备,为其工业化生产及商业化应用奠定坚实的理论基础。

风力发电机组中SSB变桨机制的故障诊断与容错控制

本文介绍了风力发电机组中SSB变桨机制的故障诊断与容错控制,SSB变桨机制通过独立控制每个叶片的桨距角度,提高风能转换效率和设备可靠性。故障诊断包括检查超级电容、电路连接、9U1模块及反馈线路,容错控制策略采用分布式冗余控制架构、预测维护与预防性容错控制,以及基于模糊逻辑的容错控制,确保系统稳定运行。此类策略显著提高了风力发电机组的可靠性和稳定性,降低了故障率和维护成本。

新生儿红斑狼疮与抗Ro/SSA和抗La/SSB抗体阳性2例

报告了 2例新生儿红斑狼疮。 1例出生后发现有心脏房室传导阻滞和室间隔缺损 ,脐血检测有抗Ro/SSA和抗U1RNP抗体 ,母亲为SLE患者。 1例出生后 1个月于面部、颈部及躯干上部出现环形红斑样皮疹 ,脐血检测有抗Ro/SSA和抗La/SSB抗体 ,母亲为SCLE患者。 2例患儿皮疹和心脏传导阻滞于生后 3个月内消退 ,自身抗体于生后 6个月内消退 ,随访 7年和 1 5年后均健康。

抗SSA和抗SSB抗体在肝病患者的检测及临床意义

目的探讨抗SSA、抗SSB在肝病患者的临床意义。方法对143例抗SSA和(或)抗SSB抗体阳性的肝病患者自身抗体的检出情况及其与疾病的关系进行回顾性分析。结果 143例患者中,126例(88.1%)单一抗SSA阳性,3例(2.1%)单一抗SSB阳性,14例(9.8%)抗SSA、抗SSB均阳性;抗SSA的阳性率显著高于抗SSB(掊2=143,P<0.05)。140例抗SSA阳性患者中,79例(56.4%)抗Ro52阳性,33例(23.6%)抗Ro60阳性,28例(20.0%)两者均阳性。本组患者中,126例(88.1%)抗核抗体(ANA)阳性,ANA滴度为1:320～1:1000和1:100的患者分别为102例(71.3%)、24例(16.8%),差异具有统计学意义(掊2=113.99,P<0.05);17例(11.9%)患者ANA阴性,且均为单一抗SSA阳性者。抗SSA、抗SSB阳性主要见于原发性胆汁性肝硬化(61例,42.7%)、药物性肝损害(22例,15.4%)、自身免疫性肝炎(20例,14.0%)、慢性丙型肝炎(20例,14.0%)和慢性乙型肝炎(15例,10.5%)。143例患者中,13例(9.1%)合并干燥综合征。结论抗SSA和(或)抗SSB不仅见于干燥综合征、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肝炎等自身免疫性疾病中,还可见于药物性肝损害、病毒性肝炎等非自身免疫性疾病中,提示在肝病患者中出现抗SSA和(或)抗SSB抗体阳性时,应综合考虑其是否合并干燥综合征等结缔组织病,并密切随访,避免误诊漏诊。

ANA、SSA、SSB、RO-52在干燥综合征诊断中的临床意义

目的探讨干燥综合征(SS)患者ANA、SSA、SSB和RO-52抗体检测的临床意义。方法选取2010年5月至2012年5月南昌大学第二附属医院住院及门诊SS患者49例和非SS患者144例及40例健康对照体检者,采用间接免疫荧光法测ANA;免疫印迹法测抗SSA、SSB和RO-52抗体,并对结果进行回顾性分析。结果 (1)三组ANA、SSA、SSB、RO-52阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01);(2)SS组ANA与SSB、RO-52阳性率(P<0.01)和SSA与RO-52阳性率(P<0.05)比较差异有统计学意义,SLE组除SSA与RO-52外其余阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01),MCTD组SSA与SSB、RO-52阳性率(P<0.01)和SSA与SSB阳性率(P<0.05)比较差异有统计学意义,RA组ANA与RO-52阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01),各组其余阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05);(3)SS组SSA/SSB与SSA/SSB/RO-52阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05),SLE组SSA/RO-52与其余各项阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01),MCTD组SSA/RO-52与其余各项阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);(4)在SS患者抗体检测中ANA的敏感性高但特异性差,SSA、SSB、RO-52敏感性稍低但特异性高。结论 SS患者检测ANA及抗SSA、SSB和RO-52抗体等自身抗体,对SS的诊断、鉴别诊断具有重要的作用,可提高SS的诊疗水平。

联合检测ANA、抗SSA和抗SSB对原发性干燥综合征诊断的临床意义

目的调查浙江地区原发性干燥综合征患者的抗核抗体及抗核抗体谱阳性分布特点及临床意义。方法采用间接免疫荧光法和欧蒙线性免疫印迹法,回顾性分析2012年6月~2015年6月我院就诊的162例临床确诊原发性干燥综合征患者血清中抗核抗体及其抗核抗体检测谱的结果。结果 162例研究对象中抗核抗体阳性149例(占92.0%)。男7例,女155例。抗SSA阳性118例(占72.8%);抗SSB阳性72例(占44.4%);抗Ro52阳性119例(占73.4%);三者阳性检出率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。其他自身抗体检出率均较低。ANA分别与抗SSA、抗SSB、抗Ro52联合检测的阳性率为87.6%、65.9%、83.2%。联合检测抗SSA、抗SSB具有相对较好的特异性为57%。结论 ANA阳性患者,联合抗SSA、抗SSB判断有助于提高原发性干燥综合征诊断的特异性。

抗SSA、SSB抗体的荧光特点和临床意义

目的评价SSA、SSB抗体的荧光特点和临床意义,并探索在进行临床抗核抗体(ANA)筛查的过程中,鉴定这些抗体的必要性。方法对所有送检标本进行ANA和可提取性核抗原(ENA)检测,选择SSA、SSB阳性标本进行实验室和临床分析。结果在4 978个送检样本中,259个样本抗SSA、SSB阳性,阳性样本分为SSA+SSB-、SSA-SSB+和SSA+SSB+三组。与SSA+SSB-组和SSA-SSB+组比较,SSA+SSB+组ANA阴性样本比例(0.5%)明显降低(P<0.01),而高滴度样本比例(53.5%)明显增高(P<0.01)。SSA和(或)SSB阳性样本除呈现颗粒型荧光外,还出现各种荧光核型。SSA+SSB+组颗粒型荧光的比例明显高于SSA+SSB-和SSA-SSB+(P<0.01)。与SSA+SSB-组相比,SSA+SSB+组患有干燥综合征(SS)的比例明显增高,患有其他疾病的比例明显降低。SSA-SSB+组共8例患者,所患疾病各不相同。结论临床上检测SSA、SSB抗体具有必要性,联合检测SSA和SSB抗体可以提高SS诊断特异性。

干燥综合征患者血清抗α-胞衬蛋白、抗SSA/SSB抗体、IFN-γ及TNF-α与唇腺病理损害相关性研究

目的:观察干燥综合征患者(SS)血清抗α-胞衬蛋白、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及抗SSA/SSB抗体与患者唇腺活检病理损害的关系,探讨SS患者的抗体表达、免疫异常与唇腺病理损害的相关性。方法:收集SS患者36例为SS组。具有口干症状、慢性非唇腺、唾液腺免疫性炎症的非干燥综合征患者24例为非SS组,两组均行唇腺活检。同时记录患者的一般资料及临床数据,包括年龄、性别、病程、临床体征,记录口干评分,血清学指标包括类风湿因子(RF)、C-反应蛋白(CRP)、血细胞沉降率(ESR),抗SSA/SSB抗体、血清干扰素水平等。结果:①与非SS组比较,SS组唇腺活检阳性率达100%,显著高于非SS组(P<0.05);两组的年龄和性别比较差异无统计学意义(均P>0.05)。②与非SS组比较,SS组的CRP及ESR水平明显增高(P<0.05),抗α-胞衬蛋白、抗SSA/SSB抗体、抗CCP抗体、RF阳性率也高于非SS组。③与轻度病理损伤组比较,中重度病理损伤组抗α-胞衬蛋白的比率无统计学差异;与轻度病理损伤组比较,中重度病理损伤组抗SSB抗体阳性率均明显升高,两组比较差异具有统计学意义,而抗SSA抗体两组间比较无统计学差异(P>0.05)。③TNF-α与每低倍视野下导管扩张数、腺泡萎缩数具有相关性(P<0.05),而CRP、ESR与其未见相关性(P>0.05);TNF-α、CRP和ESR与唇腺灶性指数、淋巴细胞计数均具有相关性(P<0.05);IFN-γ与淋巴细胞计数具有相关性(P<0.05),而与导管扩张数、腺泡萎缩数未见明显相关性(P<0.05)。结论:SS的发病与免疫异常密切相关,SS的唇腺淋巴细胞浸润、腺泡损害等病理损害,可能由于多种自身抗体、细胞因子的作用调控而发生发展的。

SSB蛋白与ssDNA相互作用的动力学和可视化研究(英文)

研究大肠杆菌单链结合蛋白(single-stranded DNA-binding protein,SSB)与单链DNA(single-stranded DNA,ssDNA)的相互作用对于了解其在DNA复制、重组和修复中的作用是非常重要的。通过表面等离子共振技术(surface plasmon resonance,SPR)得到了在有、无镁离子的情况下,SSB与ssDNA两者的平衡解离常数(equilibrium dissociation constant,KD)分别为9.67×10-7M和4.79×10-7M,阐明了镁离子对于两者作用形式的影响。利用原子力显微镜技术分别观察SSB蛋白、ssDNA和SSB-ssDNA复合物的成像,为下一步研究SSB在DNA代谢中作用模式的单分子可视化奠定了基础。

抗SSA、抗SSB、抗Ro52抗体在自身免疫性疾病中的临床价值探讨

目的研究抗SSA、抗SSB和抗Ro52抗体在自身免疫性疾病(autoimmune diseases,AID)诊断中的临床意义,探讨在SLE、SS、RA中相关实验室项目结果在抗SSA/SSB/Ro52抗体的单阳性组和多阳性组间是否存在差异。方法选取抗SSA/SSB/Ro52抗体结果为阳性的患者,分析他们的相关实验室检测结果与临床最终诊断。结果抗SSA/SSB/Ro52抗体不同阳性组合之间AID和非AID诊断的构成比具有显著差异,并且随着抗体阳性的增多AID所占的百分比也随着增加,各组百分比按大小排列为SSA+SSB+Ro52+>SSA+SSB+/SSA+Ro52+/SSB+R052+>SSA+/SSB+/Ro52+;SLE患者Ig G的升高、RA淋巴细胞的降低、SS患者球蛋白Ig G的升高以及C3的降低在单阳性组与多阳性组间有显著差异。结论抗SSA、抗SSB、抗Ro52抗体可作为AID的筛选指标,阳性抗体越多AID确诊的可能性越大。在SLE、RA、SS患者中,部分实验结果在单阳性组与多阳性组间有显著差异,提示多抗体阳性可能与疾病的活动性或严重程度有关。

SSB滚转通道改进型主导极点配置控制系统设计

针对参数大范围变化且具有耦合作用和外部干扰的SSB滚转通道姿态控制问题,给出一种SSB滚转通道改进型主导极点配置控制系统设计方法。首先,通过增加前置滤波器,给出一种改进型主导极点配置PID控制器设计方法,实现精确主导极点配置。其次,采用系数冻结线性化方法,在SSB飞行包线中选取若干具有代表性的特征点构建局部子系统。应用给出的主导极点配置PID控制器设计方法,分别设计局部子前置滤波器和子PID控制器。最后采用一种平滑变增益方法,设计出全局时变前置滤波器和PID控制器。真实SSB模型数值仿真结果表明,所设计的SSB滚转通道系统性能满足预期要求,所给出的方法是有效的。

母体抗SSA/SSB抗体阳性胎儿完全性房室传导阻滞超声表现

目的观察母体抗SSA/SSB抗体阳性胎儿完全性房室传导阻滞(CAVB)超声表现。方法以二维、M型及多普勒超声技术观察7胎母体抗SSA/SSB抗体阳性CAVB胎儿心脏,获取二尖瓣、左心室流入道及流出道、脐动脉(UA)、静脉导管(DV)及大脑中动脉(MCA)血流频谱。结果7名孕妇抗SSA抗体、抗Ro52抗体均呈阳性,其中4名抗SSB抗体呈阳性。7胎均见房室分离,心房律正常而心室律缓慢,二尖瓣、UA、DV及MCA血流异常;其中4胎心房壁、房间隔、二尖瓣环或腱索回声增强。7胎均未合并其他心内外结构畸形。结论母体抗SSA/SSB抗体阳性可致胎儿发生CAVB;超声观察胎儿心脏及血流动力学变化有利于判断胎儿预后。

SSB蛋白的高效表达及其与ssDNA的相互作用(英文)

大肠杆菌单链结合蛋白SSB在DNA复制、重组和修复中起着重要作用。为研究单链结合蛋白SSB的体外生物功能构建了融合蛋白SSB的表达载体并使其高效表达及易于纯化。ssb基因片段是以E.coliK-12基因组为模板经PCR扩增获得,并通过基因的体外拼接成功构建了表达载体pQE30-ssb。重组菌株M15/pQE30-ssb经过IPTG的诱导表达了蛋白SSB。收集菌体细胞、超声波破碎后离心取上清进行SDS-PAGE分析,结果表明有一与预期分子量(20.6kDa)相应的诱导表达条带出现,其表达量约占全细胞蛋白的30%且以可溶形式存在。利用固定化金属离子(Ni2+)配体亲和层析柱纯化融合蛋白SSB,其纯度达到90%。通过凝胶层析和等离子共振技术对SSB的生物功能进行了系统研究分析。结果表明,SSB蛋白以四聚体形式与单链DNA分子结合,其亲和力常数(KD)为4.79×10-7mol/L。

利用重组抗原检测抗SSB自身抗体及其临床意义

目的：利用重组抗原检测自身免疫疾病患者血清中抗ＳＳＢ自身抗体并探讨其临床意义。方法：应用ＤＮＡ重组技术构建ＳＳＢ基因工程菌，并表达 ＳＳＢ融合蛋白、经 ＧＳＴ柱层析法纯化后，分别经蛋白质印迹（ＷＢＴ）法和酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）法检测２０份干燥综合征患者、６０份系统性红斑狼疮患者和３０份正常人血清。结果：经常规试剂盒检测为ＳＳＢ（＋）的２４份患者血清，利用重组抗原检测均阳性；经常规试剂盒检测为ＳＳＢ（－）的５６份患者血清，利用重组抗原检测有１１份阳性（ＷＢＴ法４份，ＥＬＩＳＡ法７份）。结论：利用重组抗原检测抗ＳＳＢ自身抗体敏感性较高。利用重组抗原对自身抗体进行定性、定量分析有助于对自身免疫疾病的诊断。

利用酵母重组SSB抗原建立间接ELISA法检测抗SSB抗体的初步研究

目的:利用纯化的酵母重组SSB抗原建立间接ELISA法,用于检测抗SSB抗体。方法:将毕赤酵母菌重组表达的SSB抗原包被于聚苯乙烯微量反应板,与待检血清中抗SSB抗体反应后,经洗涤,再加入辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG与之结合,然后用TMB作用显色。结果:本法的敏感性和特异性分别为93.33%和100%,与欧蒙斑点酶免疫法检测结果之间的符合率为94.87%。结论:本法敏感性和特异性均较高,具有很好的临床诊断应用前景。

免疫亲和层析在纯化可提取性核抗原SSB/La中的应用

生化提纯高纯度有生物活性的蛋白质一直是一项艰巨的工作.主要综述了免疫亲和层析的纯化特点,以及用此方法在分离纯化具有临床诊断价值的可提取性核抗原SSB La中的有效应用.

核分离-滤膜洗脱技术同时检测植物DNASSB与DSB

采用核分离 -滤膜洗脱技术 ,将分离的细胞核在微孔滤膜上裂解后相继用中性溶液和碱性溶液洗脱 ,研究了 60 Co- γ辐射引发的大麦种胚细胞 DNA断裂 .结果显示 ,50 Gy的 60 Co- γ辐射主要引发 DNA单链断裂 (DNA SSB) ;50～ 1 0 0 Gy的辐射引发的DNA断裂包括单链断裂 (SSB)与双链断裂 (DSB) ;当辐射剂量大于 1 0 0 Gy时 ,DNA断裂的增加部分则以 DSB为主 .所用的实验方法适用于质地致密的植物材料并可在一次实验中同时检测 DNA的 SSB与 DSB,为植物细胞的 DNA链断裂作为生物标志物应用于环境诱变因子监测提供了基础 .

132例原发性干燥综合征抗SSA、抗SSB抗体的检测与系统性损害

目的 :分析 13 2例原发性干燥综合征 (PSS)系统损害与抗 SSA、抗 SSB抗体之间的关系。方法 :采用对流免疫电泳法 (CIE)和免疫印迹 (IBT)法检测 13 2例 PSS患者血清中抗 SSA、抗 SSB抗体。结果 :PSS患者抗 SSA、抗 SSB抗体阳性组出现系统性损害发生率75 .0 % ,而阴性组仅为 16.7% ,两组差异有显著性 (P<0 .0 1)。结论 :抗 SSA、抗 SSB抗体与 PSS的系统性损害密切相关 ,它代表了不同的临床类型 ,对

抗SSB抗体检测在系统性红斑狼疮中的临床意义

[目的]探讨抗SSB抗体对系统性红斑狼疮(SLE)诊断的敏感性和特异性,并了解其与SLE临床表现的关系。[方法]采用线型免疫印迹(LIA)法检测SLE患者与对照组血清抗SSB抗体,并记录SLE患者的主要临床表现,分析其与抗SSB抗体的关系。[结果]74例SLE患者血清中25.7%抗SSB抗体阳性,30例对照组仅3.3%阳性,抗SSB抗体在SLE中检测的敏感性25.7%,排除类风湿关节炎(RA)和原发性干燥综合症(pSS)后抗SSB抗体在SLE中检测的特异性为96.7%。抗SSB抗体阳性组的SLE患者颊部红斑、脱发、浆膜炎、继发性干燥综合征(sSS)、周围血象减低、IgG升高、抗SSA60抗体阳性、抗SSA52抗体阳性及两者均阳性的发生率显著高于抗SSB抗体阴性组(P均﹤0.05)。[结论]抗SSB抗体对SLE的诊断有重要意义,与颊部红斑、脱发、浆膜炎、sSS、周围血象减低、IgG升高、抗SSA60抗体阳性和或抗SSA52抗体阳性有一定相关性。

ANA、SSA、SSB检测对68例干燥综合征诊断中的临床意义

目的探讨ANA、SSA、SSB检测对干燥综合征诊断中的临床意义。方法选取本院2005年1月至2009年10月门诊或住院干燥综合征患者68例。同期诊断的非干燥综合征患者70例为对照组,进行检测ANA、SSA、SSB,观察阳性率并进行比较分析。68例干燥综合征患者ANA阳性47例占69.11%;SSA阳性57例占83.82%;SSB阳性27例占39.70%;SSA/SSB阳性11例占16.17%.两组经统计学比较:ANA检测阳性率比较(P>0.05)无显著差异性。两组SSA、SSB、SSA/SSB检测阳性率比较P<0.05有显著差异性。结论干燥综合征检测项目中ANA缺乏特异性,是许多结缔组织病都可以表达的,SSA、SSB、SSA/SSB检测对干燥综合征具有较强的特异性,在其他结缔组织病表达较少,对诊断干燥综合征更具有指导性。