各国对注射液不溶性微粒的监管要求及在生物技术药物的应用思考

目的:通过对比《中华人民共和国药典》2020年版(ChP 2020)、2023年美国药典(USP-NF2023)、欧洲药典11.0版(EP 11.0)、日本药典18版(JP 18)中注射剂不溶性微粒检测方法相关内容,分析不同药典对不溶性微粒的监管要求,供业界参考。以治疗性蛋白注射液为代表,结合目前各监管机构对注射液中不溶性微粒的要求,指出现有要求未能对此类生物技术药物中具有免疫原性潜力的小粒径(0.1~10μm)蛋白聚集体微粒进行控制,并从三方面提出建议以加强此类药物的质量控制,更好地保障患者的用药安全。方法:通过对比ChP 2020、USP-NF 2023、EP 11.0、JP 18中注射剂不溶性微粒检测的章节内容,对检测方法、限定标准和系统适用性检测等内容进行分析总结。通过收集归纳中、美、日、欧关于生物技术药物中不溶性微粒的药典要求和相关技术指导原则,明确目前不同机构对于生物技术药物中不溶性微粒的监管要求。结果与结论:(1)对于注射液中不溶性微粒检查方法,不同药典收载的方法均为光阻法和显微计数法,但是对各方法的适用条件的限定不同。此外,USP-NF 2023、EP 11.0和JP 18中提出的检测方法一致,Chp 2020主要在25 mL以下规格的供试品检测方面与其他三部药典有较大差异;在系统适用性检测方面,USP-NF 2023更为全面,Chp 2020在此方面要求较少;在微粒计数和限定标准方面,各药典一致;(2)对于生物技术药物,除Chp 2020外,其他药典均收载了生物技术药物不溶性微粒的检测方法,但是并未对0.1~10μm小粒径微粒进行计数和控制,仍然无法控制小粒径蛋白聚集体可能带来的免疫原性的危害;也未见各机构明确对生物技术药物中有免疫原风险的小粒径不溶性微粒的监管要求和标准。为此笔者分别在方法学研究方面、数据收集方面、研发技术要求方面提出三点建议,以更好地保障患者的用药安全。

肉鸡标准回肠氨基酸消化率测定研究进展及存在的问题

低蛋白日粮是畜禽营养发展的重要方向。基于标准回肠氨基酸消化率(Standard ileal amino acid digestibility, SIAAD)计算的肉鸡饲料配方能够更加准确合理的反映家禽对饲料蛋白质的消化能力、减少氮的排泄。因而采用标准回肠氨基酸消化率设计日粮配方是实现低蛋白营养的前提。文章综述了家禽标准回肠氨基酸消化率测定研究进展及存在的问题,以期为建立原料标准回肠氨基酸消化率参数数据库提供参考。

基于MC-UVE-VIP两步波长筛选实现近红外光谱模型的无标样传递

该文将蒙特卡洛-无变量信息消除(MC-UVE)算法和变量重要性投影(VIP)算法结合,挑选出重要、有信息的波长变量,建立了MC-UVE-VIP两步波长筛选方法。该法首先采用MC-UVE筛选出稳定性参数大于某一阈值(Mthreshold)的有信息波长集合U_(UVE),然后采用VIP算法从U_(UVE)中筛选出VIP参数大于U_(UVE)中所有波长VIP均值的波长,作为重要、有信息的波长集合U_(UVE)-VIP。基于U_(UVE)-VIP建立玉米中蛋白质含量的偏最小二乘回归(PLSR)近红外光谱预测模型,模型的潜变量个数根据累计贡献率大于99.9%确定。该模型变量少、稳健、可解释性强、运算速度快,其预测两台从机样品蛋白质的平均相对误差(MARE)分别为1.64%与1.88%,均小于MC-UVE模型的从机MARE(5.40%与5.19%)和VIP模型的从机MARE(6.23%与7.16%)。因此,基于MC-UVE-VIP两步波长筛选法所建立的玉米蛋白质含量近红外光谱模型可直接传递到从机,无需进行模型或从机光谱校正。该模型传递性能优于单纯基于MC-UVE或VIP算法筛选波长所建模型及全波长模型。

同步放化疗联合复方苦参注射液用于鼻咽癌的近期疗效及对免疫因子、MIP-3α和sCD44水平的影响

目的:探讨同步放化疗联合复方苦参注射液用于鼻咽癌的近期疗效及对免疫因子、巨噬细胞炎性蛋白-3α(MIP-3α)和可溶性标准CD44(sCD44)水平的影响。方法:选择2019年3月至2022年3月该院收治的鼻咽癌患者60例,采用随机数字表法按1∶1比例随机分为观察组(n=30)与对照组(n=30)。对照组患者采用同步放化疗治疗,观察组患者在同步放化疗的基础上联合应用复方苦参注射液。两组患者均以21 d为1个周期,连续治疗3个周期。比较两组患者的近期疗效、不良反应,治疗前后卡诺夫斯凯计分(KPS)、Th1细胞因子、Th2细胞因子、血清MIP-3α和sCD44水平变化。结果:观察组鼻咽癌患者的总有效率为70.00%(21/30),高于对照组的43.33%(13/30),差异有统计学意义(P<0.05)。两组鼻咽癌患者治疗后的KPS评分高于治疗前,观察组鼻咽癌患者治疗后的KPS评分高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组鼻咽癌患者治疗后的血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)水平低于治疗前,而白细胞介素(IL)2水平高于治疗前;观察组鼻咽癌患者治疗后的血清TNF-α、IFN-γ水平低于对照组,而IL-2水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组鼻咽癌患者治疗后的血清IL-4、IL-6和IL-10水平低于治疗前,且观察组患者低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组鼻咽癌患者治疗后的血清MIP-3α、sCD44水平低于治疗前,且观察组患者低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组鼻咽癌患者肝肾功能异常、骨髓抑制、胃肠道反应和乏力的发生率均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:同步放化疗联合复方苦参注射治疗鼻咽癌的近期疗效良好,可调节免疫因子水平,降低血清MIP-3α和sCD44水平,且不良反应少。

基于蛋白络合测定鞣酸纯度

鞣酸是一种常用的药用辅料,但常规实验方法均不易鉴定其纯度。文章设计了一种基于络合体系浊度测定的方法,采用紫外测试体系在680nm的吸光度,并建立紫外吸光度-浓度的标准曲线。通过这种标准曲线法,测定了三种不同的鞣酸样品,测量结果RSD≤2%,且不受限于应用环境和样品浓度。该方法操作简便,重复性好,准确性高。

自制添加乳清蛋白匀浆膳标准肠内营养制剂对喉癌术后患者的影响

目的探讨自制添加乳清蛋白匀浆膳标准肠内营养制剂在喉癌术后患者创口恢复中的应用效果。方法选择2017年12月—2021年12月扬州大学附属医院收治的喉癌术后患者70例为研究对象,按照组间基本特征具有可比性的原则分为观察组与对照组,每组35例,对照组予以常规营养支持,观察组予以自制添加乳清蛋白的匀浆膳标准肠内营养制剂,比较两组患者干预前后创口恢复、营养情况及胃肠反应和并发症发生率。结果术前,两组患者体重指数(BMI)、三头肌皮褶厚度(TSF)、前白蛋白(PA)、转铁蛋白(TRF)的比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后14 d,观察组患者TSF、PA、TRF均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);但观察组BMI与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组胃肠道反应、并发症发生率低于对照组,留置胃管时间短于对照组,创口Ⅰ期愈合率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论自制添加乳清蛋白的匀浆膳标准肠内营养制剂可促进喉癌术后患者创口恢复,提高其营养水平,降低并发症的发生率,缩短留置胃管时间。

二进制蜻蜓算法-直接校正算法优选标样集在小麦粉蛋白质近红外模型传递中的应用

为了实现小麦粉蛋白质含量近红外分析模型的传递,探究二进制蜻蜓算法(Binary Dragonfly Algorithm,BDA)与直接校正算法(Direct Standardization,DS)相结合构成的BDA-DS算法挑选标样集对模型传递结果的影响。以棱光S450光栅型近红外光谱仪为主机,NeoSpectra Micro傅里叶变换型近红外光谱仪为从机,采集了126个小麦粉的近红外光谱,用偏最小二乘回归法建立了主机近红外光谱与小麦粉蛋白质的关联模型。经BDA-DS算法模型传递后,主机模型对从机样品预测决定系数为0.9812,预测标准偏差为0.1838,从机与主机的光谱集合平均马氏距离由22.34下降到1.40,均接近于主机模型精度水平。该研究同时与采用Kennard/Stone(K/S)挑选标样集再结合DS构成的传统K/S-DS算法进行了对比,结果表明:相对于K/S-DS算法,BDA-DS算法挑选出较少的标样集就能表征仪器的差异,有效地提高了主机模型对从机样品的预测精度,为近红外模型传递提供了一种更加有效的标样集选择方法。

6个紫花苜蓿品种氨基酸组成分析及营养价值评价

【目的】选择我国培育的中草3号、甘农1号、龙牧806、中苜2号、新疆大叶、公农1号等6个紫花苜蓿品种为试验材料,通过氨基酸组分的分析及含量的测定,综合评价紫花苜蓿蛋白质营养价值,为深入研究和开发利用我国紫花苜蓿资源提供科学依据。【方法】采用随机区组设计,将不同品种紫花苜蓿分别种植于不同试验小区,小区面积为30 m2,重复3次。试验样品为当年种植的第一茬于初花期刈割的苜蓿,每个小区随机选3行,刈割后105℃杀青20 min,65℃烘干48 h,粉碎过60目筛。采用盐酸水解法,使用氨基酸全自动分析仪测定17种氨基酸含量,分析不同氨基酸含量及组分。通过与FAO/WHO氨基酸模式谱和FAO/WHO理想蛋白质标准比较,通过计算紫花苜蓿必须氨基酸比值(RAA)、必须氨基酸比值系数(RC)、必须氨基酸比值系数分(SRC)和必需氨基酸指数(EAAI),综合评价紫花苜蓿蛋白质的营养价值。【结果】我国培育的6个紫花苜蓿品种均含有被测的17种氨基酸。6个紫花苜蓿品种除天冬氨酸(Asp)、半胱氨酸(Cys)、脯氨酸(Pro)、鲜味氨基酸(F)的含量以及酸鲜甜氨基酸与苦味氨基酸比值((S+F)/B)有显著差异外,其他氨基酸含量差异不显著;紫花苜蓿总氨基酸含量为14.85%—19.48%、必需氨基酸的含量为5.35%—6.93%、非必需氨基酸含量为9.50%—12.55%,其中新疆大叶紫花苜蓿总氨基酸含量、必需氨基酸含量和非必需氨基酸含量高于其他品种;紫花苜蓿含有9种药效氨基酸,药效氨基酸占总氨基酸的60%以上,甘农1号、新疆大叶和公农1号紫花苜蓿的药效氨基酸含量高于其他3个品种;紫花苜蓿酸鲜甜味氨基酸含量与苦味氨基酸含量比大于1.8。除了蛋氨酸+半胱氨酸含量低于FAO/WHO氨基酸模式谱外,其他几种氨基酸含量均高于FAO/WHO氨基酸模式谱。6个紫花苜蓿品种必需氨基酸占氨基酸总量的比值(E/T值)在35%—36%之间,必须氨基酸与非必须氨基酸的比值(E/N值)在54%—57%之间,E/T值和E/N值均略低于FAO/WHO理想蛋白质标准。6个紫花苜蓿品种的必须氨基酸比值系数分SRC值在73—77之间,必需氨基酸指数EAAI值均接近1。【结论】紫花苜蓿氨基酸种类齐全,总氨基酸含量较高。必需氨基酸齐全,相对均衡合理,接近人体氨基酸比例。口感好,营养价值高,为可食用优质蛋白源,并具有一定的药用价值。紫花苜蓿第一限制氨基酸为蛋氨酸+半胱氨酸,作为蔬菜食用时建议搭配蛋氨酸和半胱氨酸含量高的食品作为互补,以提高其营养价值。

重组人生长激素对特发性矮小症儿童血清IGF-1/IGFBP-3摩尔比的影响及其临床意义

目的:探讨重组人生长激素(rhGH)对特发性矮小症(ISS)儿童血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)/IGF结合蛋白-3(IGFBP-3)摩尔比的影响及临床意义。方法:收集我院2016年6月至2020年6月收治的132例学龄期ISS儿童的临床和实验室记录进行回顾性分析,所有儿童接受至少2年的rhGH治疗。采用化学发光法测定血清IGF-1和IGFBP-3浓度,并计算摩尔比。rhGH治疗前后数据差值(Δ)=治疗后值-治疗前值。rhGH治疗1年后Δ身高标准差分值(SDS)<0.3定义为治疗反应不良,Δ身高SDS≥0.3定义为治疗反应良好。结果:与基线相比,rhGH治疗1年和2年身高SDS、IGF-1 SDS、IGFBP-3 SDS以及IGF-1/IGFBP-3摩尔比SDS均增加(P<0.05)。rhGH治疗反应不良的学龄期ISS儿童基线时的实际年龄、骨龄明显高于反应良好儿童,同时IGF-1/IGFBP-3摩尔比和IGF-1/IGFBP-3摩尔比SDS明显低于反应良好儿童(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析,基线时IGF-1/IGFBP-3摩尔比SDS较低是rhGH治疗反应不良的独立危险因素(P<0.001)。rhGH治疗1年或2年后的Δ身高SDS与ΔIGF-1/IGFBP-3摩尔比、ΔIGF-1/IGFBP-3摩尔比SDS呈正相关(P<0.05)。进一步校正作为协变量的基线身高后,治疗2年后Δ身高SDS与ΔIGF-1/IGFBP-3摩尔比SDS呈正相关(P<0.05)。结论:血清IGF-1/IGFBP-3摩尔比SDS与rhGH治疗后身高增加反应相关,可能适合作为预测学龄期ISS儿童接受rhGH治疗后身高反应的生物标志物。

几种标准蛋白质的毛细管区带电泳的分离及其迁移行为

本文采用毛细管区带电泳分离了几种标准蛋白,研究了不同的清洗方式,不同pH的缓冲溶液等对迁移行为及分离的影响,并同时考察了迁移时间和相对迁移时间(即电泳选择性因子)与操作电压的关系。

高蛋白饲料稻品种的筛选研究

1996— 2 0 0 0年对从中国南方稻区征集的百余个水稻品种 (品系 ,组合 )在湖南进行了高蛋白饲料稻品种筛选 ,确定了湘早籼 2 4号等 7个近期可供生产上应用的早、晚籼饲料稻品种 (组合 ) .同时表明 :协调高蛋白与超高产的关系是饲料稻品种选育和栽培的共同主攻目标 .制订饲料专用稻品种标准时 ,应考虑蛋白质含量测定样品的代表性 ,建议采用省区域试验中 3～ 5个有代表性试点的样品 ,并且以湘早籼 2

人NT-proBNP的高效原核表达及免疫学检测标准品的研究

目的构建人NT-proBNP(氨基末端脑钠肽,amino-terminal pro-brain natriuretic peptide)的高效原核表达载体,建立重组NT-proBNP纯化工艺,制备NT-proBNP免疫学检测工作标准品。方法采用人工合成和套叠(GeneSOEing)PCR技术相结合的方式对NT-proBNP基因序列进行密码子进行偏嗜性改造后克隆入原核表达质粒pET32a和pET42a构建不同形式的NT-proBNP原核表达重组质粒;采用离子交换、HIS和GST亲和层析柱以及肠激酶(EK酶)酶切等方法建立NT-proBNP重组蛋白的纯化工艺;用Roche公司NT-proBNP检测试剂盒测定所制备的标准品的免疫活性和稳定性。结果pET32a和pET42a构建的不同形式NT-proBNP原核表达质粒在BL21(DE3)均实现了高效可溶性表达,通过多种纯化方案制备了纯度达98.3%的NT-proBNP-83重组蛋白,经测定具有良好免疫活性和稳定性,适合用于免疫学检测工作标准品。结论成功构建了人NT-proBN的高效原核表达载体,筛选出较适合用于免疫学检测工作标准品的NT-proBNP重组蛋白。

B.t.制剂标准化发展趋势及现存问题的探讨

概述了Ｂ．ｔ．制剂标准化方法的发展历程，并对其毒素蛋白含量测定方法如免疫测定法、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ－ＴＬＣ及洗脱比色法进行了介绍，对ＨＰＬＣ、ＨＰＣＥ的应用前景也进行了预测，并对Ｂ．ｔ．制剂标准化所面临的几个问题进行了探讨。

第4批蛋白含量测定国家标准品的制备和标定

目的:建立蛋白含量测定用国家标准品。方法:按2005年版中国药典三部、WHO 和 ICH 标准品有关要求,对标准品进行制备、分装、冻干、质量检测并开展协作标定。结果:批号为2002/04的蛋白含量测定标准品经检测,外观、无菌实验合格。pH 为7.5,水分含量为0.7%。蛋白含量经过6家单位共计39次的凯氏定氮法协作标定后,确定其含量为21.24 mg·支^(-1),标准差为0.694 mg·支^(-1),总体 RSD 为1.06%。采用 Lowry 法对第3批蛋白含量测定国家标准品与该批蛋白标准品进行比较后,结果表明两者无显著差异。结论:该批蛋白含量测定标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准用于 Lowry 法蛋白含量测定,特定为第4批蛋白含量测定国家标准品。

重组抗肿瘤抗病毒蛋白乐复能质控方法与质量标准的建立

目的:建立重组抗肿瘤抗病毒蛋白乐复能(novaferon)的质控方法和质量标准。方法:以WST-1染色法检测Daudi细胞增殖,测定乐复能的抗肿瘤细胞增殖活性;以WISH细胞病变抑制法测定乐复能抗病毒活性;乐复能以胰蛋白酶酶切后,用HPLC分析肽图;其余检测项目按《中华人民共和国药典》(三部)2005年版的规定进行。结果:3批乐复能原液和成品的抗肿瘤比活性均≥2.0×106U/mg、抗病毒比活性均≥1.0×109IU/mg。3批乐复原液的HPLC肽图与参考品一致,乐复原液的蛋白含量、纯度、分子质量、等电点、末端氨基酸序列等指标及成品的细菌内毒素、苯甲酸含量、乙腈残留量等指标均符合规定。根据检定结果建立了乐复能的质量标准。结论:建立的质控方法和质量标准可以保证乐复能的安全、有效和质量可控,可用于乐复能的常规检定。

盐渍海参行业标准制修订的分析探讨

盐渍海参是近年来颇受人们喜爱的一种高营养、耐贮存的食品。为确保市售盐渍海参质量,保障消费者的利益,农业部曾于2007年颁布行业标准SC/T 3215—2007《盐渍海参》,由于盐渍海参加工业的不断发展,使得SC/T3215—2007《盐渍海参》已经不符合产业实际,为此2012年对标准进行了修订,于2014年颁布了新的标准SC/T3215—2014《盐渍海参》。本研究在介绍盐渍海参标准基本框架的基础上,比较了SC/T3215—2014《盐渍海参》(新标准)和SC/T 3215—2007《盐渍海参》(旧标准)的主要变化,即表现在增加了原辅材料、加工要求和原料处理方法的规定;将产品等级进行了划分,分为3个等级;增加了蛋白质、附盐的规定,修改了产品规格、盐分指标;净含量、污染物和兽药残留的规定直接引用相关标准法规规定。重点阐述了SC/T3215—2014《盐渍海参》主要技术参数制修订的内容和依据,主要包括感官要求和水分、蛋白质、盐分等理化指标,指出新标准中规定,盐渍海参蛋白质含量为一级品≥12%、二级品≥9%、合格品≥6%;盐分含量为一级品≤20%、二级品≤22%、合格品≤25%;水分含量规定为≤65%;附盐含量不超过3.0%。研究发现,《盐渍海参》新标准从保障市场公平合理和维护消费者权益的指导思想出发,标准科学、合理和可行性强,有助于规范盐渍海参的生产,有利于提高产品质量,也便于技术监督管理等部门的管理和监督,建议在生产企业、市场监管人员及广大消费者中积极宣贯本标准。本研究可为企业和检测部门正确理解和运用SC/T3215—2014《盐渍海参》提供参考。

不同开奶配方应用于极低出生体重儿的临床研究

目的研究不同奶方用于极低出生体重早产儿开奶对生长发育和喂养耐受性的影响。方法根据开奶奶方,86例胎龄<34周、出生体重<1 500 g的早产儿分为标准早产儿配方奶喂养组(SPF组,n=31)、深度水解蛋白奶喂养组(eHF组,n=27)和母乳喂养组(对照组,n=28),比较各组早产儿生长指标、喂养情况、血生化、住院时间及喂养不耐受、败血症、坏死性小肠结肠炎、宫外生长迟缓(EUGR)的发生率。结果SPF组、eHF组和对照组三组间院内体重、头围及身长增长速率、住院时间和出院时EUGR发生率的比较差异无统计学意义(P>0.05);SPF组和eHF组胎便转黄时间明显短于对照组(P<0.01);SPF组的足量喂养时间明显短于eHF组和对照组(P<0.01),而后二者无显著差别;SPF组血清前白蛋白水平显著低于eHF组和对照组(P<0.01);SPF组和eHF组的出院Hb水平显著高于对照组(P<0.01);eHF组出院时血嗜酸性粒细胞百分比水平明显低于SPF组(P<0.01);各组喂养不耐受、败血症、坏死性小肠结肠炎的发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论eHF和SPF均可用于<34周的极低出生体重早产儿开奶,且不增加EUGR发生率。

基因及蛋白质符号的规范编排

科技期刊中基因符号、蛋白质符号使用频率很高 ,但也较难掌握。目前不少学术期刊生物和医学论文中的基因符号、蛋白质符号的用法存在不规范的现象。根据有关命名系统 ,探讨常用基因符号。

某市市售婴儿配方奶粉中蛋白质和微量元素的监测及评价

目的 :为更好了解和更加客观评价市售婴儿奶粉的质量以保障婴儿食品的营养和卫生质量 ,为婴儿食品标准的进一步修订提出参考意见。方法 :参照国标方法 ,重点测试 31份婴儿配方奶粉的蛋白质以及 K、 Na、 Ca、 Mg、 Fe、 Cu、Zn等 7种微量元素。结果 :所有产品的卫生学指标都符合国家标准 ,但蛋白质和部分微量元素的达标情况不甚乐观 ,产品合格率只有 71%。另外 ,由于 3个婴儿配方奶粉标准不一致 ,可导致评价结果有差异。结论 :该市售婴儿配方奶粉的卫生学状况良好 ,但蛋白质和微量元素等营养素指标的达标情况不理想。应进一步完善和修订我国婴儿食品标准以符合市场的发展和尽快与国际接轨。

中美澳乳品蛋白质检测标准的比对研究

蛋白质是乳品中的主要成分。各国现行标准中检测乳品中蛋白质的主要方法有:凯氏定氮法、近红外光谱分析、紫外吸收法等。本文通过检索中国、美国、澳大利亚三国对乳品蛋白质检测做出规定的现行标准,对查阅到的美国和澳大利亚标准进行翻译,并对上述三国关于乳品中蛋白质的检测标准进行技术比对,力求为制定合理有效的中国乳品蛋白质含量检测标准奠定有力的基础。