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RNA干扰水稻SBE3基因的表达对籽粒淀粉合成及其关键酶活性的影响 被引量:12
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作者 汪结明 张建 +3 位作者 江海洋 朱苏文 范军 程备久 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期313-320,共8页
为探讨RNA干扰水稻SBE3基因的表达对籽粒淀粉合成及其关键酶活性的影响,以水稻品种中花11及以其为受体的转基因株系为材料,分别检测水稻SBE3基因的表达、籽粒发育各时期淀粉合成关键酶活性变化及直链、支链淀粉相对含量。结果表明,导入... 为探讨RNA干扰水稻SBE3基因的表达对籽粒淀粉合成及其关键酶活性的影响,以水稻品种中花11及以其为受体的转基因株系为材料,分别检测水稻SBE3基因的表达、籽粒发育各时期淀粉合成关键酶活性变化及直链、支链淀粉相对含量。结果表明,导入的SBE3基因RNA干扰结构成功地降低了目的基因的表达,并使其酶活性在籽粒发育各时期均显著降低并提前3d达高峰期,且不同株系间具有差异。同时也使不同发育时期籽粒的ADPG-PPase和SSS及DBE活性均不同程度地显著降低,尤其以SSS和ADPG-PPase活性峰值降幅最大。此外,两个转基因水稻株系各时期籽粒直链淀粉含量均显著高于对照,而其成熟籽粒千粒重却显著降低,直链淀粉含量越高,千粒重越低。 展开更多
关键词 水稻 RNA干扰 淀粉分支酶3 淀粉合成 酶活
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RNAi沉默淀粉分支酶sbe3基因对水稻直链淀粉的影响 被引量:10
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作者 陈忠正 郭健 +2 位作者 李斌 文海涛 赵亮 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第7期291-295,共5页
本研究利用RNAi技术,通过RT-PCR方法克隆出水稻淀粉分支酶sbe3基因片断,经两步组装法将sbe3基因片断分别正向、反向组装入pRNAi-ubi,成功构建sbe3基因RNAi转化载体pRNAi-ubi/sbe3。在农杆菌介导下,对粳稻中花11未成熟胚诱导的愈伤组织... 本研究利用RNAi技术,通过RT-PCR方法克隆出水稻淀粉分支酶sbe3基因片断,经两步组装法将sbe3基因片断分别正向、反向组装入pRNAi-ubi,成功构建sbe3基因RNAi转化载体pRNAi-ubi/sbe3。在农杆菌介导下,对粳稻中花11未成熟胚诱导的愈伤组织进行转化,通过PCR、Southern杂交鉴定获得一批转基因植株。半定量RT-PCR鉴定出转化苗T1代种子中sbe3基因表达被明显抑制,但只引起转基因水稻胚乳中直链淀粉含量少量的提高,说明采用RNAi仅沉默sbe3基因对水稻胚乳直链淀粉含量没有显著影响。 展开更多
关键词 水稻 淀粉分支酶3 RNA干涉 直链淀粉
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回交重组自交系中SSⅢ-1、SBE3和PUL基因对稻米蒸煮食味品质的影响 被引量:2
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作者 许顺菊 向珣朝 +4 位作者 康翠芳 龙小林 苏文丽 杨博文 吴家富 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1978-1988,共11页
该研究利用颗粒结合淀粉合成酶基因(Wxb)与可溶性淀粉合成酶Ⅱa基因(SSⅡ-3)均相同的籼型光温敏核不育系‘广占63S’和潜力恢复系CG173R为亲本,经过回交和多代自交,以构建的回交重组自交系(BILs)BC1F10代株系为供试材料,分析各株系的基... 该研究利用颗粒结合淀粉合成酶基因(Wxb)与可溶性淀粉合成酶Ⅱa基因(SSⅡ-3)均相同的籼型光温敏核不育系‘广占63S’和潜力恢复系CG173R为亲本,经过回交和多代自交,以构建的回交重组自交系(BILs)BC1F10代株系为供试材料,分析各株系的基因型组成及其蒸煮食味品质(ECQs)和RVA谱,以解析与品质相关微效基因的遗传效应。结果显示:(1)双亲在焦磷酸化酶大亚基基因(AGPlar)、分支酶基因Ⅲ(SBE3)、脱分支酶基因(PUL)、可溶性淀粉合成酶Ⅰ基因(SSⅠ)和可溶性淀粉合成酶SSⅢ-1基因(SSⅢ-1)的基因位点存在差异。(2)SSⅢ-1、SBE3和PUL基因分别在BC1F10代株系中存在单基因分离,SSⅢ-1和SBE3基因、SSⅢ-1和PUL基因在BC1F10代株系中均存在双基因的分离。(3)不同基因型及其互作与蒸煮食味品质(ECQs)中的表观直链淀粉含量(AAC)、胶稠度(GC)以及RVA谱的部分特征值存在显著或极显著的效应。(4)SSⅢ-1单基因只对AAC有极显著影响;SBE3基因和SSⅢ-1基因互作对AAC有极显著影响,对峰值时间(PeT)、成糊温度(PaT)、GC有显著性影响;PUL基因和SSⅢ-1基因互作对PeT、PaT和回复值(CSV)有极显著影响,对最高粘度(PKV)、热浆粘度(HPV)、崩解值(BDV)、冷浆粘度(CPV)、消减值(SBV)、AAC和GC有显著影响。研究表明,在Wxb和SSⅡ-3基因背景下,参与淀粉合成的微效基因SSⅢ-1与SBE3和SSⅢ-1的互作效应极显著影响水稻AAC,SBE3和SSⅢ-1的互作效应与PUL和SSⅢ-1的互作效应显著影响GC,PUL和SSⅢ-1的互作效应极显著影响PaT,这些发现将对改良稻米品质和加快水稻优质育种具有重要意义。 展开更多
关键词 水稻(Oryza SATIVA L.) 回交重组自交系(BILs) SSⅢ-1基因 sbe3基因 PUL基因
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Effects of Elevated Ozone Concentration on Starch and Starch Synthesis Enzymes of Yangmai 16 Under Fully Open-Air Field Conditions 被引量:3
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作者 ZHANG Ru-biao HU Hai-juan +5 位作者 ZHAO Zheng YANG Dan-dan ZHU Xin-kai GUO Wen-shan ZHU Jian-guo Kazuhiko Kobayashi 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2013年第12期2157-2163,共7页
O3 is not only greenhouse gas but also a primary gaseous contaminant in the atmosphere.It has long-lasting effects on crop growth,yield and quality,and brings a series of ecological and environmental problems.A free-a... O3 is not only greenhouse gas but also a primary gaseous contaminant in the atmosphere.It has long-lasting effects on crop growth,yield and quality,and brings a series of ecological and environmental problems.A free-air controlled enrichment(FACE) system was applied to study the effect of elevated ozone concentration on activities of key enzymes of starch synthesis of Yangmai 16 in 2009-2010.The main-plot treatment had two levels of O 3 :ambient level(A-O 3) and 50% higher than ambient level(E-O 3).The main results were that accumulation rate of amylose,amylopectin and starch were represented in a single peak curve,and their content and accumulation amount rose gradually.The O 3 elevation decreased the accumulation rate of amylose,amylopectin and starch amylase,reduced the accumulation amount of amylopectin and starch,and decreased the content of amylopectin and starch,but increased the content of amylose.With the increase of O 3 concentration,the enzyme activity of grain granule-bound starch synthase(GBSS),soluble starch synthase(SSS) and starch branching enzyme(SBE) decreased after anthesis.The activities of GBSS and SSS had highly significant correlations with amylose,amylopectin and starch accumulation rate,and the activity of SBE had significant correlations with these items.So the O 3 elevation decreased the activity of key enzymes of starch synthesis,which led to the variation of starch synthesis. 展开更多
关键词 O3 FACE WHEAT starch activity of enzymes
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小麦胚乳14-3-3蛋白的表达及其与淀粉体淀粉合成酶的互作 被引量:5
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作者 宋健民 戴双 +5 位作者 李豪圣 刘爱峰 程敦公 楚秀生 Ian J TETLOW Michael J EMES 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1445-1450,共6页
从小麦胚乳中克隆了14-3-3基因,并将其分别插入pET29c和pET41c质粒,用热激法转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RP,得到高效表达的蛋白,但融合蛋白主要以包涵体的形式存在。可溶性的融合蛋白可直接通过S-蛋白琼脂糖树脂纯化。包涵体经8mo... 从小麦胚乳中克隆了14-3-3基因,并将其分别插入pET29c和pET41c质粒,用热激法转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RP,得到高效表达的蛋白,但融合蛋白主要以包涵体的形式存在。可溶性的融合蛋白可直接通过S-蛋白琼脂糖树脂纯化。包涵体经8molL-1尿素溶解变性,稀释复性后,结合到S-蛋白琼脂糖树脂上,也得到纯化的融合蛋白。复性后的融合蛋白对蔗糖合酶活性表现抑制作用,说明包涵体14-3-3融合蛋白恢复活性。将结合14-3-3融合蛋白的S-蛋白琼脂糖树脂作为诱饵与小麦胚乳淀粉体提取液进行亲和杂交,与14-3-3蛋白特异互作的淀粉合成酶结合到S-蛋白琼脂糖树脂上,Western检测结果表明,淀粉体淀粉合酶I(SSI)、淀粉合酶II(SSII)、淀粉分支酶Iia(SBEIIa)、淀粉分支酶Iib(SBEIIb)和ADP焦磷酸化酶大亚基(SH2)与14-3-3蛋白存在互作,而淀粉分支酶I(SBEI)、淀粉磷酸化酶(SP)、D-酶(DE)和ADP焦磷酸化酶小亚基(BT2)不能与14-3-3蛋白结合,说明小麦胚乳14-3-3蛋白对淀粉体淀粉合成具有一定的调控作用。 展开更多
关键词 小麦14-3-3蛋白 表达 淀粉合成酶 蛋白互作
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玉米淀粉分支酶SBEⅡb基因RNA干涉表达载体的构建和转化 被引量:7
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作者 项艳 张永凤 +3 位作者 江海洋 韩国民 朱苏文 程备久 《激光生物学报》 CAS CSCD 2006年第3期288-293,共6页
应用聚合酶链式方应技术扩增玉米淀粉分支酶第20外显子155 bp的基因片段,并将其正向和反向克隆到pUCCRNA i载体上。利用pHMW.GUS与pCAMB IA1300作为桥梁载体,构建了含胚乳特异启动子和潮霉素筛选基因的RNA干涉表达载体pCAMB IA1300+HMW... 应用聚合酶链式方应技术扩增玉米淀粉分支酶第20外显子155 bp的基因片段,并将其正向和反向克隆到pUCCRNA i载体上。利用pHMW.GUS与pCAMB IA1300作为桥梁载体,构建了含胚乳特异启动子和潮霉素筛选基因的RNA干涉表达载体pCAMB IA1300+HMW+2F。通过三亲杂交将pCAMB IA1300+HMW+2F表达载体转化到根癌农杆菌LBA4404,对玉米自交系178进行遗传转化,通过抗性筛选和PCR检测,获得了4株PCR阳性苗。 展开更多
关键词 淀粉分支酶基因 小干涉RNA 表达载体的构建 玉米 农杆菌介导
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水稻sbe1启动子驱动的反义sbe-GUS融合基因在转基因水稻中的表达 被引量:5
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作者 刘巧泉 陈秀花 +3 位作者 陆美芳 于恒秀 王宗阳 顾铭洪 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 2003年第4期332-336,共5页
为研究水稻基因启动子对外源基因在转基因水稻中表达的影响 ,构建了由sbe1启动子引导的反义sbe GUS融合基因。经农杆菌介导 ,将不同的融合基因导入水稻中 ,定量测定转基因水稻植株不同组织中的GUS酶活力。结果表明 ,sbe1启动子可驱动反... 为研究水稻基因启动子对外源基因在转基因水稻中表达的影响 ,构建了由sbe1启动子引导的反义sbe GUS融合基因。经农杆菌介导 ,将不同的融合基因导入水稻中 ,定量测定转基因水稻植株不同组织中的GUS酶活力。结果表明 ,sbe1启动子可驱动反义sbe GUS融合基因在转基因水稻植株的胚乳中高效表达 ,而在颖壳、胚和茎叶等组织中的表达活性较弱。证实sbe1启动子在驱动外源基因的表达上表现有明显的组织特异性。 展开更多
关键词 水稻 淀粉分支酶 基因表达 GUS活性
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应用RNA干扰技术降低玉米支链淀粉含量 被引量:50
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作者 柴晓杰 王丕武 +1 位作者 关淑艳 徐亚维 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期625-630,共6页
为了调控玉米淀粉的生物合成过程,克隆了玉米淀粉分支酶(starchbranchingenzymes,SBE)基因,构建高效的siRNA表达体系,通过花粉管通道法将其导入玉米自交系。PCR扩增和Southern杂交结果证明,目的基因已被整合到基因组中,且能够遗传。Nort... 为了调控玉米淀粉的生物合成过程,克隆了玉米淀粉分支酶(starchbranchingenzymes,SBE)基因,构建高效的siRNA表达体系,通过花粉管通道法将其导入玉米自交系。PCR扩增和Southern杂交结果证明,目的基因已被整合到基因组中,且能够遗传。Northern杂交分析表明,该目的基因在转基因植株中能正常转录并导致内源SBEmRNA含量下降。对转基因植株淀粉分支酶活性和淀粉含量测定结果表明,分支酶活性明显地低于对照,相差最多的低85%;总淀粉含量与对照之间基本没有差异,但直链淀粉的含量提高了约50%。 展开更多
关键词 淀粉分支酶基因 小干扰RNA 克隆
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玉米淀粉分支酶基因片段的克隆和植物表达载体的构建 被引量:6
9
作者 柴晓杰 王丕武 +1 位作者 关淑艳 徐亚维 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期158-161,共4页
应用聚合酶链式反应技术(PCR)扩增了玉米淀粉分支酶的cDNA基因片段,并将其克隆到pMD18-Tvector载体上,对重组子进行了PCR检测和限制性内切酶分析,测定了DNA全序列。结果表明:克隆片段全长为935bp。将反义+正义基因片段插入到pBI12135S... 应用聚合酶链式反应技术(PCR)扩增了玉米淀粉分支酶的cDNA基因片段,并将其克隆到pMD18-Tvector载体上,对重组子进行了PCR检测和限制性内切酶分析,测定了DNA全序列。结果表明:克隆片段全长为935bp。将反义+正义基因片段插入到pBI12135S启动子下,构建成表达质粒pCJSBE2b。通过花粉管通道法将其导入玉米自交系,获得了转基因植株。 展开更多
关键词 淀粉分支酶基因 PCR 克隆 CDNA 玉米
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植物支链淀粉生物合成研究进展 被引量:26
10
作者 高振宇 黄大年 钱前 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 2004年第5期489-495,共7页
植物支链淀粉占贮存淀粉的70%~80%,是决定植物果实或种子品质的关键成分。对植物支链淀粉生物合成途径及其代谢酶基因的研究,可大大推动支链淀粉结构的改造和在食品工业上的应用。该文介绍了植物支链淀粉的结构组成,详细阐述了参与... 植物支链淀粉占贮存淀粉的70%~80%,是决定植物果实或种子品质的关键成分。对植物支链淀粉生物合成途径及其代谢酶基因的研究,可大大推动支链淀粉结构的改造和在食品工业上的应用。该文介绍了植物支链淀粉的结构组成,详细阐述了参与支链淀粉生物合成的三类酶,即淀粉分支酶(starch branching enzyme,SBE)、可溶性淀粉合酶(soluble starch synthase,SSS)和淀粉脱支酶(starch debranching enzyme,SDBE)的编码基因、酶学特性及其在支链淀粉合成中的作用,并就植物支链淀粉的合成模型加以探讨。同时提出了该研究领域尚待解决的问题,对其应用前景作了展望。 展开更多
关键词 植物支链淀粉 淀粉分支酶 可溶性淀粉合 淀粉脱支酶
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玉米淀粉分支酶基因的克隆和反义载体的构建 被引量:4
11
作者 柴晓杰 王丕武 +1 位作者 张君 关淑艳 《玉米科学》 CAS CSCD 2004年第2期105-107,共3页
应用聚合酶链式反应技术穴PCR雪扩增了玉米淀粉分支酶的cDNA基因片段,并将其克隆到pMD18-Tvector载体上,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析,并测定了DNA全序列。结果表明:克隆片段全长为1698bp。将该基因反向插入到pCAMBIA1301的Ca... 应用聚合酶链式反应技术穴PCR雪扩增了玉米淀粉分支酶的cDNA基因片段,并将其克隆到pMD18-Tvector载体上,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析,并测定了DNA全序列。结果表明:克隆片段全长为1698bp。将该基因反向插入到pCAMBIA1301的CaMV35S启动子之后,构建了反义表达载体。 展开更多
关键词 玉米淀粉分支酶 CDNA 反义载体 聚合酶链式反应技术 PCR 克隆
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木薯分支酶活性测定及同工酶电泳技术应用初探 被引量:1
12
作者 闵义 胡新文 +1 位作者 符少萍 郭建春 《热带作物学报》 CSCD 2010年第6期958-964,共7页
淀粉分支酶(Starch branching enzyme,SBE)是唯一引入α-1,6糖苷键分支点,催化支链淀粉形成的酶,影响淀粉分支程度及淀粉粒的精细结构。本文以3个亲缘关系较远的高产木薯品种(SC124、SC8、Arg7)为材料,利用SBE同工酶电泳及酶活性检测观... 淀粉分支酶(Starch branching enzyme,SBE)是唯一引入α-1,6糖苷键分支点,催化支链淀粉形成的酶,影响淀粉分支程度及淀粉粒的精细结构。本文以3个亲缘关系较远的高产木薯品种(SC124、SC8、Arg7)为材料,利用SBE同工酶电泳及酶活性检测观察木薯块根支链淀粉增长较快时期SBE活性变化动态,结合支链淀粉含量检测分析木薯淀粉同工酶表达特点与支链淀粉积累的关系。结果表明:种植后140d至180d为木薯单株支链淀粉含量快速增加时期;SC124和SC8支链淀粉积累量早于Arg7达到高峰;Arg7各个时期的支链淀粉含量及SBE活性均表现最高。同工酶分析表明,木薯分支酶有SBE-I和SBE-II两个基因位点:SBE-Ι至少有3个等位基因位点(SBE-Ιa、SBE-Ιb、SBE-Ιc),品种间具有多态性;SBE-II为单一条带,但活性大小在品种间和发育不同阶段有差异。初步判定等位基因位点SBE-Ιc和SBE-II可能对SBE酶活性和支链淀粉含量贡献较大。 展开更多
关键词 木薯 淀粉分支酶 同工酶电泳 酶活性
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不同成熟度分类采收装炕对上部烟叶品质及酶活性的影响
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作者 高相彬 苏新宏 +9 位作者 常建波 马浩波 王勇军 王建安 王俊 刘芳 马京民 陈彦春 韦凤杰 王志军 《贵州农业科学》 CAS 2022年第5期42-47,共6页
【目的】探明上部4~6片不同成熟度烟叶分棚次装炕对烤后烟叶品质及酶活性影响,以期为三门峡及类似烟区的生产应用提供科学依据。【方法】以云烟87为试验材料,上部烟叶按成熟度设上部6片叶混合采收统一编杆后单独装炕于烤房中间棚次(CK)... 【目的】探明上部4~6片不同成熟度烟叶分棚次装炕对烤后烟叶品质及酶活性影响,以期为三门峡及类似烟区的生产应用提供科学依据。【方法】以云烟87为试验材料,上部烟叶按成熟度设上部6片叶混合采收统一编杆后单独装炕于烤房中间棚次(CK)、上3片叶单独采收统一编杆后单独装于烤房下棚(T_(1))和下3片叶单独采收统一编杆后单独装于烤房上棚(T_(2))3个处理,研究其上部烟叶品质及酶活性的影响。【结果】各处理淀粉含量在干球温度38℃稳温终止前快速下降,42℃稳温终止前缓慢下降,随后趋于稳定;总糖和还原糖含量变化趋势基本一致,前期快速升高,CK和T_(1)在42℃稳温开始时略有下降,随后上升,CK和T_(2)在47℃稳温开始时达最大值;蛋白质含量变化趋势与淀粉类似,但整个时期内均以T_(1)含量最高;烟碱含量呈双峰曲线变化,在38℃稳温开始时达第1个峰值,随后降低,CK和T_(2)在42℃稳温终止时达到第2个峰值后开始降低,T_(1)在47℃稳温开始时达第2个峰值后开始降低;α-淀粉酶和中性蛋白酶活性均呈单峰曲线,分别在42℃稳温开始和终止时达峰值,随后降低,峰值后T_(1)均高于CK和T_(2)。【结论】上部6片叶一次采收、分成熟度编杆后装炕,有利于协调烘烤过程中不同成熟度烟叶的温湿度环境和调控烟叶淀粉、总糖等主要化学成分的含量以及关键酶活性的代谢进程,适于在三门峡及类似烟区推广应用。 展开更多
关键词 烤烟 上部6片叶 3片叶 3片叶 淀粉 蛋白质 酶活性
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两阶段温度控制策略以及助剂促进淀粉分支酶的胞外表达 被引量:1
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作者 王驰 李柱 +4 位作者 李才明 顾正彪 洪雁 程力 李兆丰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期19-24,共6页
为了促进重组淀粉分支酶在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis WB600)中的胞外表达,对重组淀粉分支酶在摇瓶水平上进行了发酵优化。首先,以胞外酶活力为指标,先后考察了初始培养基、pH、培养温度和培养时间4种因素对胞外表达的影响;... 为了促进重组淀粉分支酶在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis WB600)中的胞外表达,对重组淀粉分支酶在摇瓶水平上进行了发酵优化。首先,以胞外酶活力为指标,先后考察了初始培养基、pH、培养温度和培养时间4种因素对胞外表达的影响;然后,通过两阶段温度策略和助剂的添加进一步提高胞外表达水平。结果表明,当发酵培养基为TB、pH为7.5时,25℃培养24h后胞外酶活力达到19.9U/mL;同时,菌体生长最适温度和酶分泌的最适温度是不一致的,通过两阶段温度控制策略(即0—12h控制温度30℃,12h后温度调至25℃),胞外酶活力与单一温度条件下的最高水平(25℃)相比提高了1.4倍,达到了47.1U/mL;在此基础上,进一步添加0.05%的吐温-80,将胞外酶活进一步提高40%,达到65.8U/mL。 展开更多
关键词 淀粉分支酶 胞外表达 两阶段温度控制策略 发酵优化
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