Pressurized Liquid Extraction of Pigments from Chlamydomonas sp.and Chemical Characterization by HPLC–MS/MS

Pressurized liquid extraction using green solvents(ethanol and water)was applied to extract photosynthetic pigments from the microalgae Chlamydomonas sp.An experimental design is employed to determine the effect of the extraction conditions on the extraction yield and the antioxidant capacity of the different extracts determined using 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl and TEAC tests.All the extracts show significant antioxidant activity in all assays.Besides,in this work,the carotenoid and chlorophyll composition of the Chlamydomonas extracts was analyzed by HPLC–DAD–APCI–MS/MS for the first time,being the main compounds lutein and pheophythin a′.

PSE-HPLC法测定食品中叔丁基羟基茴香醚和2,6-二叔丁基羟基甲苯

目的:建立测定食品中抗氧化剂叔丁基羟基茴香醚(BHA)和2,6-二叔丁基羟基甲苯(BHT)加压溶剂萃取-高效液相色谱法(PSE-HPLC法)。方法:采用正交试验对影响PSE萃取效率的温度、压力、萃取溶剂、萃取时间进行优化,联合HPLC进行测定,并确定分别以BHA提取量、BHT提取量以及总量为评价指标的最优条件。结果:PSE-HPLC法测定BHT和BHA的相对标准偏差(RSD)为0.5%～3.1%,并且在1.0～200.0μg/mL范围内色谱峰面积与组分质量浓度均有很好的线性相关性(r≥0.9997),检出限为0.05μg/mL,在最优条件下的回收率为92.60%～97.80%。结论:PSE-HPLC法简便、快速、效率高,方法的重现性、线性相关性以及检出限理想,适用于食品中BHT和BHA含量及两者总量的同时快速检测。

加压液体提取-自动SPE-UPLC-MS/MS法检测农业土壤中6种吡啶类农药微量残留

以农业土壤为研究对象,建立采用加压液体提取法将样品中啶氧菌酯、氟啶草酮、吡虫啉、啶酰菌胺、氟啶酰菌胺、啶虫脒6种吡啶类农药提取出来,全自动固相萃取法富集、净化,超高效液相色谱-质谱联用仪定量检测的分析方法。取农业土壤样品,风干、粉碎后,过120目筛,准确称取过筛网后的样品10 g,置萃取池中,加硅藻土20 g,用甲醇:丙酮溶剂(V∶V=1∶1)提取,另取规格为500 mg/12 mL HLB固相萃取小柱,置全自动固相萃取仪中,活化完毕后,设定程序,将上述提取液以20 mL/min的流量,过固相萃取柱,最后用20 mL甲醇-乙腈(V∶V=1∶1)洗脱,收集洗脱液,洗脱液氮吹至近干,加甲醇定容至1 mL,涡旋混匀,上液相色谱-质谱仪定性、定量检测。啶氧菌酯、氟啶草酮、吡虫啉、啶酰菌胺、氟啶酰菌胺、啶虫脒6种吡啶类农药在0.001~5.0μg/mL范围内具有良好的线性,相关系数均大于0.995;检测限分别为0.012、0.009、0.024、0.007、0.013、0.005μg/L。三水平加标回收率均在84.4%~105.2%之间;重复性RSD(n=6)分别为2.0%、3.1%、2.3%、2.2%、1.9%和2.3%。实验结果表明,实验建立的方法具有准确、灵敏等优点,适用于农业土壤中微量吡啶类农药残留的检测。

HPLC法测定静态加压溶剂提取马兜铃属植物中马兜铃酸

目的建立并优化从马兜铃药材中提取马兜铃酸和的静态加压溶剂提取方法,考察各因素对提取效率的影响,并测定马兜铃、关木通、青木香和广防己中两成分的量。方法以马兜铃酸和的量为指标,采取单因素考察的方法,分别优化提取溶剂、药材粒径、提取温度、提取压力、提取时间、冲洗体积、循环数目、药材加入量等影响因素。结果优化后的条件为:甲醇提取,药材粉末粒径100～120目,提取温度120℃,提取压力10.3MPa,静态提取时间10min,冲洗体积40%,1个循环,药材加入量1.00g。结论本法可一次将马兜铃酸和从马兜铃等4种药材中完全提取,显示了良好的适用性。经比较,该法比传统的超声和索氏提取方法提取效率更高,节约溶剂,省时省力;静态加压溶剂法更适合于青木香中马兜铃酸的提取。

HPLC fingerprint-oriented preparative separation of major flavonoids from safflower extract by preparative pressurized liquid chromatography

The aim of this study was to rapidly isolate the major effective flavanoids from the extract of safflower（Carthamus tinctorius） using ODS medium pressure liquid chromatography（MPLC） and semi-preparative HPLC, guided by a developed fingerprint. Twelve compounds were isolated and their structures were elucidated as kaempferol 3-O-β-D-rutinoside（1）, kaempferol 3-O-β-D-glucoside（2）, rutin（3）, quercetin 3-O-β-D-glucoside（4）, 6-hydroxykaempferol 3,6,7-tri-O-β-D-glucoside（5）, 6-hydroxykaempferol 3-O-β-D-glucoside（6）, 6-hydroxykaempferol 6,7-di-O-β-D-glucoside（7）, 6-hydroxykaempferol 3-O-β-Drutinoside（8）, 6-hydroxykaempferol 3,6-di-O-β-D-glucosyl 7-O-β-D-glucuronide（9）, isosafflomin C（10）, safflomin C（11） and hydroxysafflor yellow A（12） by spectroscopic analysis and comparing with the literature. Our results demonstrated that preparative pressurized liquid chromatography combined with HPLC fingerprint guide is an efficient tool to isolate the target compounds quickly.

基质固相分散-加压溶剂萃取法测定土壤中多环芳烃

建立基质固相分散(MSPD)辅助加压溶剂萃取(PLE)-高效液相色谱法测定土壤中16种多环芳烃的方法.土壤样品与弗罗里硅土混匀后装入萃取池,在15 MPa、120℃萃取条件下,丙酮∶二氯甲烷(1∶1,V∶V)作为萃取溶剂,静态提取5min,应用高效液相色谱法荧光检测-二极管阵列检测串联,采用外标法对其进行定量分析.结果表明:16种多环芳烃线性关系良好,相关系数均大于0.9994,利用荧光检测器与二极管阵列检测器的方法检出限分别为0.04—0.8μg·L-1、0.6—20μg·L-1,在低、中、高3个水平下的加标回收率在78.4%—105.8%范围内,测定结果的相对标准偏差为1.2%—4.1%(n=5).

固相萃取富集高压液相色谱分析饮用水中的苯并(a)

本文以高压液相色谱仪作为样品分析手段，对Ｃ１８键合相吸附剂富集饮用水中苯并（ａ）芘回收效率的影响因素逐一进行系统研究。实验结果显示，在优化的样品富集和样品分析条件下，该方法具有快速、安全、高效和低耗等优点，在绝对进样量００２５～０３ｍｇ之间，线性良好，方法最低检出限为０５ｎｇ／Ｌ，同时准确度和精密度也得到很好地控制。另外，该方法在自来水及其源水的样品分析中获得了良好的结果。

水中痕量多环芳烃(PAHs)类环境污染物检测方法的研究

对水中多环芳烃（ＰＡＨｓ）检测方法进行了系统研究，采用固相萃取技术进行样品前处理，以取代传统的液液萃取，并建立了优化的ＰＡＨｓ液相色谱分析条件。

快速溶剂萃取-高效液相色谱法测定莎稗磷残留

建立了快速溶剂萃取-高效液相色谱法测定土壤、大米中莎稗磷残留量的分析方法。样品经快速溶剂萃取,旋转蒸发,SPE-C18柱净化后,在流动相为甲醇∶水=70∶30,C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,230 nm,流速1.0 mL.min-1条件下分析测定。结果表明：以甲醇为萃取剂、选择50%的冲池体积选、于100℃萃取10 min,循环1次,10 mL洗脱液进行洗脱的条件下,回收率在90.2%~98.3%,相对标准偏差小于2.89%,检出限为0.1 mg.L-1,线性范围为0.2~10.0 mg.L-1。研究表明该方法操作简单,灵敏度高,干扰小,可满足莎稗磷农药残留检测的要求。

高效液相色谱-串联质谱法测定多种食品和饲料中的胶霉毒素

建立了加压溶剂萃取结合全自动固相萃取技术-高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-mass spectrometry,HPLC-MS/MS)测定玉米和小麦等禾谷食品、猪的肌肉和肝脏等动物源食品及猪和鸡的饲料中胶霉毒素的液相色谱串联质谱法。前处理时依次采用加压溶剂萃取(pressurized liquid extraction,PLE)和全自动固相萃取(automated solid phase extraction,ASPE)技术,乙腈/水(50/50,V/V)为玉米、小麦及饲料样品的加压溶剂萃取液,乙腈/正己烷(60/40,V/V)为猪的肌肉和肝脏样品的加压溶剂萃取液,甲醇/水(85/15,V/V)为所有样品的全自动固相萃取洗脱液。HPLC-MS/MS检测,基质匹配工作曲线外标法定量。结果表明,不同样品中胶霉毒素在0.2~100μg/L范围内具有良好的线性关系,相关系数R2≥0.995 8;不同样品中的胶霉毒素最低检出限在0.09~0.15μg/kg,最低定量限在0.23~0.31μg/kg;添加不同浓度水平的胶霉毒素,平均回收率为81.8%~95.4%,变异系数≤13.2%。

鸡肝散药效成分木犀草素在大鼠体内的排泄研究

目的：建立RP—HPLC法测定大鼠尿、粪便、胆汁中鸡肝散药效成分——木犀草素的含量，研究木犀草素在SD大鼠中的排泄情况。方法：给SD大鼠灌胃鸡肝散提取物后，于不同时间段采集尿样、粪便、胆汁，经处理后，以苷元木犀草素为目标物，分别测定其在不同时间段尿样、粪便、胆汁中的浓度。结果：尿样、粪便、胆汁中木犀草素的方法回收率为98．00％～106．00％，提取回收率为85．00％～108．00％，日内及日间精密度均小于10．00％。木犀草素的总累积排泄率约为37％（测得尿中约11％；粪便和胆汁中各约26％）。结论：建立的大鼠尿、粪便、胆汁中木犀草素的含量测定方法具有灵敏、准确，专属性强等特点。

超高压提取蓝莓渣花色苷的工艺优化及其抗氧化活性

本文旨在优化蓝莓渣花色苷的超高压提取工艺并考察其抗氧化活力。本文以蓝莓渣为原料,采用单因素实验和Box-Behnken响应面分析法对蓝莓渣花色苷的提取工艺进行优化,以维生素C(VC)为阳性对照,通过DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率和FRAP铁离子还原能力的测定,评估蓝莓渣花色苷的体外抗氧化活性,并采用高效液相色谱法(HPLC)对蓝莓渣花色苷组分进行分析。结果表明:蓝莓渣花色苷的最佳提取工艺条件为:提取压力400 MPa,提取时间9 min,乙醇浓度60%,料液比1:20 g/mL,此条件下花色苷的提取量为5.93±0.06 mg/g,与传统溶剂浸提法(CSE)、超声波辅助提取法(USE)相比,超高压辅助提取(UPE)法的提取效果更好,花色苷提取量分别提高25.11%、10.02%;蓝莓渣花色苷对DPPH·清除能力最强,与同浓度的VC相比,无显著性差异(P>0.05);其对·OH的清除率以及FRAP铁离子还原能力则显著弱于同浓度VC(P<0.05);HPLC分析结果表明,蓝莓渣花色苷包含13种花色苷单体,其中锦葵色素-3-半乳糖苷含量最高。因此,超高压辅助提取是一种高效的蓝莓渣花色苷提取方法,且蓝莓渣花色苷因其较强的抗氧化活性具有较好的应用价值。

加压溶剂提取-HPLC法同时测定老鹰茶中7个黄酮类化合物

目的:建立老鹰茶药材中黄酮类成分的含量测定方法。方法:运用加压溶剂提取技术和HPLC-DAD对4批不同产地的老鹰茶药材进行分析。色谱条件:Agilent ZORBAXSB-C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以水-甲醇为流动相梯度洗脱,流速1.0mL.min-1,检测波长350nm,柱温30℃。结果:7个黄酮(金丝桃苷、异槲皮苷、山柰酚-3-O-β-D-半乳糖苷、槲皮苷、紫云英苷、槲皮素和山柰酚)在一定浓度范围内线性关系良好(r>0.999);具有较好的精密度(日内精密度与日间精密度分别为3.9%和4.6%);回收率在91.6%～105.6%之间。不同产地老鹰茶药材黄酮类成分含量明显不同。结论:该方法可用于老鹰茶中黄酮类成分的定量分析。

加压溶剂提取-HPLC法测定北沙参中6种香豆素类化合物

目的建立高效液相色谱法测定不同产地北沙参中6种香豆素类化合物。方法用加压溶剂提取技术和高效液相色谱法对北沙参药材进行分析。色谱柱:Kinetex core-shell-C_(18)column(50 mm×4.6 mm,2.6μm),流动相:乙腈-水梯度洗脱,流速:0.4 mL·min^(-1),柱温:30℃,检测波长:310 nm,进样量:20μL。考察该方法的专属性、标准曲线和定量下限、精密度与回收率、稳定性以及重现性。结果北沙参中6种主要香豆素类成分,骨脂素、花椒毒素、佛手柑内酯、欧前胡素、cnidilin和异欧前胡素分离良好,分别在0.50~10.00,1.00~20.00,0.32~6.40,0.25~5.00,0.05~1.00,0.17~3.50μg·mL^(-1)质量浓度内线性关系良好(r≥0.999 2),且回收率较高(均在92.8%~99.2%内)。不同产地北沙参药材中香豆素类成分含量存在明显差异。结论用加压溶剂提取和高效液相色谱法能快速、有效地分析北沙参中6种香豆素类成分,方法准确可靠,重复性好,结果稳定,可作为该药材质量控制的方法。

西洋参高效液相色谱特征研究

目的:建立西洋参药材中皂苷类成分和炔醇类成分的特征色谱。方法:运用加压溶剂提取技术和HPLC-DAD-MS对10批西洋参药材进行分析。色谱条件:Prevail C18rocket柱(33mm×7mm,3.0μm),水-乙腈梯度洗脱,流速2.5mL.min-1,检测波长203nm,柱温30℃。结果:从西洋参药材中鉴定了11个化学成分,包括9个皂苷类成分(人参皂苷Rg1、Re、Rg2、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd及三七皂苷K)和2个炔醇类成分(人参环氧炔醇和人参炔醇)。并用主成分分析和聚类分析的方法对这10批西洋参药材的色谱数据进行分析,其中7批西洋参药材的化学成分较为相似。结论:该方法有助于西洋参药材的全面质量评价。

改进的静态液相微萃取-高效液相色谱法测定奶粉中双酚A的含量

用空的圆珠笔芯水平放置的方式保护静态液相微萃取的一滴溶剂,并由此建立了静态液相微萃取(S-LPME)与高效液相色谱(HPLC)测定奶粉中双酚A的分析方法。考察了萃取溶剂、萃取溶剂体积、萃取时间对液相微萃取的影响,并且对HPLC操作条件进行了优化。该方法双酚A在0.10～3.0μg/L范围内线性关系良好,检出限(S/N=3)为0.050μg/L,平均回收率为95.8%,RSD=2.12%(n=5),奶粉中双酚A的平均含量为0.7371μg/g。该方法价廉、省时、环境友好、操作简便、准确可靠,适用于奶粉及其他包装食品中双酚A含量的测定。