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噬菌体TM4、Guo1和D29对静止期结核菌裂解作用初步研究 被引量:5
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作者 柳岩 江莉莎 +2 位作者 姚义勇 曹俊 郭述良 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期28-32,共5页
目的研究噬菌体TM4、Guo1、D29能否裂解静止期结核菌。方法采用密闭培养至对数生长期的结核分枝杆菌构建静止期结核菌模型;采用药敏检测、金胺o-尼罗红荧光染色和电镜观察作为检测模型方法;采用most probable number(MPN)法计数作为裂... 目的研究噬菌体TM4、Guo1、D29能否裂解静止期结核菌。方法采用密闭培养至对数生长期的结核分枝杆菌构建静止期结核菌模型;采用药敏检测、金胺o-尼罗红荧光染色和电镜观察作为检测模型方法;采用most probable number(MPN)法计数作为裂解作用的检测指标。结果密闭培养11个月的静止期结核菌模型构建成功;经不同处理后,MPN计数结果为对照组1100,Guo1组23,TM4组23,D29组600,RFP组673,INH组887;与对照组相比,Guo1组和TM4组菌量明显减少(P<0.01,P<0.01),D29组菌量减少不明显(P=0.05);与RFP组相比,Guo1组和TM4组菌量亦明显减少(P<0.05,P<0.05),D29组菌量减少不明显(P>0.05);Guo1组和TM4组菌量无差异。结论噬菌体TM4和Guo1能够裂解静止期结核菌,噬菌体D29不能裂解静止期结核菌,噬菌体TM4和Guo1裂解能力无差别。 展开更多
关键词 噬菌体 静止期结核菌 裂解 结核病
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噬菌体TM4复苏结核休眠菌的初步研究 被引量:8
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作者 甘易玲 郭述良 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期13-16,22,共5页
目的探索噬菌体TM4对结核休眠菌复苏的作用。方法采用密闭培养对数生长期结核菌构建休眠菌模型;采用药敏检测和透射电子显微镜(电镜)观察作为模型检测方法;采用菌落计数和电镜观察作为复苏的检测指标。结果密闭培养180 d休眠菌模型构建... 目的探索噬菌体TM4对结核休眠菌复苏的作用。方法采用密闭培养对数生长期结核菌构建休眠菌模型;采用药敏检测和透射电子显微镜(电镜)观察作为模型检测方法;采用菌落计数和电镜观察作为复苏的检测指标。结果密闭培养180 d休眠菌模型构建成功;培养3 d复苏促进因子(Rpf)E组管底菌量多于空白组和TM4组,培养8 d噬菌体TM4组管底菌量多于空白组,后续观察见TM4组和Rpf E组管底菌量均较前有所增加。混合液培养第1日时,空白组、TM4组和Rpf E组的菌落计数均为0;培养第6日时,菌落计数分别是0、0.7×102和2×104CFU/mL;培养第14日时,菌落计数分别是3.4×10、1.68×107和2.1×109CFU/mL。培养第17日时,电镜观察发现混合物TM4组有大量薄壁结核菌、部分厚壁结核休眠菌和结核菌细胞碎片,Rpf E组满视野薄壁的结核菌,空白组含大量厚壁的结核休眠菌和少数薄壁结核菌。结论噬菌体TM4能够复苏结核休眠菌。 展开更多
关键词 噬菌体Tm4 结核休眠菌 复苏 结核病
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The Role of Innate Immune Cells in the Response of Heat-Treated Mycobacterium tuberculosis (M.tb) Antigens Stimulating PBMCs 被引量:3
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作者 ChaoWang JunLi +3 位作者 HuaixinZheng HaimingWei RuijunZhang BaiqingLi 《Cellular & Molecular Immunology》 SCIE CAS CSCD 2004年第6期467-470,共4页
The proliferation response of γδT cells to the antigen from heat-treated Mycobacterium tuberculosis H37Ra (M.tb Ag)was used as a good model in γδT cell research.From preliminary research it is found that activated... The proliferation response of γδT cells to the antigen from heat-treated Mycobacterium tuberculosis H37Ra (M.tb Ag)was used as a good model in γδT cell research.From preliminary research it is found that activated NK cells positively elevated γδT cells proliferation after simulating PBMCs with M.tb Ag.To investigate different behaviors of NK cells,γδNKT cells,γδT cells and relationships between these cell subsets,activation and proliferation of different cell subsets of PBMCs in response to M.tb Ag were analyzed.We demonstrated that NK cells,γδNKT cells and γδT cells could be activated after stimulation with M.tb Ag.γδNKT cells and γδT cells proliferated while the number of NK cells decreased after 11 day-simulation with M.tb Ag.Meanwhile,at the early time of stimulation the cytotoxicity of PBMCs was enhanced.Cellular & Molecular Immunology. 2004;1(6):467-470. 展开更多
关键词 tuberculosis m.tb Ag NK cell NKT cell γδT cell
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Controlling strategy of dormant Mycobacterium tuberculosis 被引量:3
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作者 Gan Yiling Guo Shuliang 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2014年第18期3316-3321,共6页
Objective This study aimed to review the available literatures on control of latent tuberculosis (TB) infection and propose a new control strategy to shorten the course of TB chemotherapy. Data sources The data used... Objective This study aimed to review the available literatures on control of latent tuberculosis (TB) infection and propose a new control strategy to shorten the course of TB chemotherapy. Data sources The data used in this review were mainly obtained from articles listed in PubMed. The search terms were "therapy (treatment) of tuberculosis; "therapy (treatment) of latent TB infection; and "vaccine of TB." Study selection Articles regarding treatment and vaccine of TB were selected and reviewed. Results The most crucial reason causing the prolonged course of TB chemotherapy is the dormant state of Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis). Nevertheless, there are, to date, no effective drugs that can directly kill the dormant cells of M. tuberculosis in clinical therapy. In accordance with the growth cycle of dormant M. tuberculosis in the body, the methods for controlling dormant M. tuberculosis include direct killing with drugs, prevention of dormant M. tuberculosis resuscitation with vaccines, and resuscitating dormant M. tuberculosis with preparations or drugs and then thoroughly killing these resuscitated M. tuberculosis by using anti-TB therapy. Conclusions The comprehensive analysis of the above three methods suggests that the drugs directly killing dormant cells are in clinical trials, TMC207 is the most beneficial for controlling TB. Because the side effect of vaccines is less and their action period is long, prevention of dormant cells resuscitation with vaccines is promising. The last control method makes it probable that when a huge number of active cells of M. tuberculosis have been killed and eradicated after 1-month short chemotherapy, only a strong short-term subsequent chemotherapy can completely kill and eradicate the remaining M. tuberculosis. This control strategy is expected to significantly shorten the course of TB chemotherapy and bring a new change and breakthrough in TB treatment. 展开更多
关键词 latent tuberculosis infection dormant cells of m. tuberculosis CONTROL THERAPY
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Construction of multivalent DNA vaccines for Mycobacte-rium tuberculosis and its immunogenicity 被引量:4
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作者 CAI Hong PAN Yi +2 位作者 LI Guoli ZHUANG Yuhui ZHU Yuxian 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2002年第19期1589-1593,共5页
The coding regions of Ag85B MPT-64, and ESAT-6 secreted proteins were cloned initially into the eu-karyotic expression vector pJW4303, then transformed to E. coli Top 10 strain for plasmid DNA extraction and further a... The coding regions of Ag85B MPT-64, and ESAT-6 secreted proteins were cloned initially into the eu-karyotic expression vector pJW4303, then transformed to E. coli Top 10 strain for plasmid DNA extraction and further analysis. Plasmids containing the right insertion were se-quenced to confirm their identity. COS7 cells were trans-fected with a mixture containing serially diluted plasmid DNA encoding three secreted proteins and Lipofectin (Gibco). The supernatants and pellets prepared from various cell lines were run on SDS-PAGE gel and the expression of these proteins in COS7 cells were demonstrated by immunoblot using polyclonal or monoclonal antiserum of M.TBH37Rv. 21 days after first vaccination of C57BL-6 mice by all three recombinant eukaryotic expressing vectors, antibody titer for Ag85B reached 1:3200. 21 days after second vaccination, the antibody titer reached 1:102400. The highest antibody levels induced by multivalent vaccines after the second injection were equal to or even greater than the 展开更多
关键词 m. tuberculosis SECRETED PROTEINS DNA vaccines immu-nogenicity HUmORAL and cell-mediated responses.
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结核杆菌感染T细胞介导免疫应答研究的新进展 被引量:6
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作者 白旭华 霍万学 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第1期75-79,共5页
结核病对免疫学家构成了巨大的挑战,因为它是一种慢性传染性疾病,病原体具有持久性特点。在对人和动物进行实验时,检测到结核分枝杆菌适应性免疫应答的特点之一为感染早期T细胞免疫应答延迟。新近研究揭示了此种延迟应答的机制:通过结... 结核病对免疫学家构成了巨大的挑战,因为它是一种慢性传染性疾病,病原体具有持久性特点。在对人和动物进行实验时,检测到结核分枝杆菌适应性免疫应答的特点之一为感染早期T细胞免疫应答延迟。新近研究揭示了此种延迟应答的机制:通过结核杆菌抑制免疫细胞(CD4+和CD8+T细胞及DC)凋亡延迟应答,通过特异性Treg细胞抑制作用延迟应答。结核杆菌慢性感染期间存在IFNγ信号调节网络和ESAT-6抗原的慢性刺激作用,抗原特异性PD-1+CD4+T细胞具有高度增殖分化为更多终末效应性T细胞的潜能,以此可调节和维持免疫应答。深入了解抗原特异性T细胞调节与维持适应性免疫应答的机制,有益于抗结核疫苗的设计和研制。 展开更多
关键词 结核杆菌 T细胞 免疫应答
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用PCR方法定向突变结核分枝杆菌glmU基因
7
作者 张文利 辛毅 马郁芳 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第10期1861-1864,共4页
目的:结核分枝杆菌glmU基因是分枝杆菌生长必需基因,其编码产物具有乙酰基转移酶活性和尿嘧啶转移酶活性,参与细胞壁前体物UDP-乙酰葡糖胺(UDP-GlcNAc)的生物合成,研究其空间结构可以定向设计酶抑制剂。方法:利用PCR方法定向突变结核分... 目的:结核分枝杆菌glmU基因是分枝杆菌生长必需基因,其编码产物具有乙酰基转移酶活性和尿嘧啶转移酶活性,参与细胞壁前体物UDP-乙酰葡糖胺(UDP-GlcNAc)的生物合成,研究其空间结构可以定向设计酶抑制剂。方法:利用PCR方法定向突变结核分枝杆菌glmU基因,并用大肠杆菌BL21(DE3)高表达m-GlmU蛋白。结果:获得了定向突变的结核分枝杆菌glmU基因,m-glmU。纯化的m-GlmU蛋白仍具有乙酰基转移酶活性和尿嘧啶核苷转移酶活性。结论:纯化的m-GlmU蛋白为进一步研究其稳定性、测定其空间结构提供了物质基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 细胞壁 UDP—GlcNAc GlmU
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分枝杆菌聚阿拉伯半乳糖的结构和生物合成过程及其应用意义 被引量:1
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作者 张文利 马郁芳 《现代生物医学进展》 CAS 2008年第9期1759-1762,共4页
聚阿拉伯半乳糖(Arabinogalactan,AG)是分枝杆菌细胞壁的主要组成成分,对于维持分枝杆菌细胞壁的完整具有重要意义。AG由衔接双糖、聚阿拉伯糖及聚半乳糖组成,连接方式各异、结构复杂。AG的合成是以UDP-GlcNAc、dTDP-Rha、UDP-Galf、多... 聚阿拉伯半乳糖(Arabinogalactan,AG)是分枝杆菌细胞壁的主要组成成分,对于维持分枝杆菌细胞壁的完整具有重要意义。AG由衔接双糖、聚阿拉伯糖及聚半乳糖组成,连接方式各异、结构复杂。AG的合成是以UDP-GlcNAc、dTDP-Rha、UDP-Galf、多聚异戊二烯磷酸阿拉伯糖(DPA)为糖基供体,其中参与糖基供体形成及AG合成的酶是研发抗结核新药的作用靶点,而由此研发出的新药对治疗结核病具有高度专一性且对人类无毒性副作用。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 细胞壁 聚阿拉伯半乳糖
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38kD抗原特异TCR基因修饰T细胞的抗结核抗原活性研究
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作者 罗微 张笑冰 +5 位作者 黄永塔 郝佩佩 姜振民 温茜 周明乾 马骊 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第18期1657-1665,共9页
抗原特异T细胞受体(Tcell receptor,TCR)基因修饰T细胞已被应用于肿瘤、病毒感染过继免疫治疗研究,取得了鼓舞人心的结果,但在结核上未见报道.本研究利用结核分枝杆菌38kD抗原刺激人CD4+,CD8+T细胞,通过分析刺激前后T细胞TCR互补决定区3... 抗原特异T细胞受体(Tcell receptor,TCR)基因修饰T细胞已被应用于肿瘤、病毒感染过继免疫治疗研究,取得了鼓舞人心的结果,但在结核上未见报道.本研究利用结核分枝杆菌38kD抗原刺激人CD4+,CD8+T细胞,通过分析刺激前后T细胞TCR互补决定区3(complementarity determining region 3,CDR3)谱型,从CD4+,CD8+T细胞中分别筛选出38kD抗原特异的TCR Vα11,Vβ8和Vα3,Vβ8基因家族T细胞,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增获得其α,β链全长基因并插入逆转录病毒载体,构建重组载体pMX-β8-IRES-α11-GFP(pβ8α11)和pMX-β8-IRES-α3-GFP(pβ8α3),分别转染初始CD4+,CD8+T细胞,检测其体外抗结核抗原活性.结果显示,TCR基因修饰的CD4+,CD8+T细胞均表达外源性TCR,不仅能特异性识别抗原,且介导免疫效应功能,表明结核抗原特异TCR基因修饰的T细胞具有应用于多药耐药结核患者过继细胞免疫治疗的可能. 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 38kD抗原 T细胞受体 基因修饰
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HIV和结核分枝杆菌共同感染的免疫学机制 被引量:7
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作者 张馨赟 蒋卫民 《中国艾滋病性病》 CAS 2014年第4期295-297,302,共4页
人类免疫缺陷病毒(HIV)和结核分枝杆菌共感染是全球性公共卫生重大问题,结核分枝杆菌和HIV均是在细胞内复制的病原体,通过损伤细胞免疫而造成持续感染。随着免疫学的进展,人们逐渐了解HIV和结核分枝杆菌共感染的一些临床特点及免疫学机... 人类免疫缺陷病毒(HIV)和结核分枝杆菌共感染是全球性公共卫生重大问题,结核分枝杆菌和HIV均是在细胞内复制的病原体,通过损伤细胞免疫而造成持续感染。随着免疫学的进展,人们逐渐了解HIV和结核分枝杆菌共感染的一些临床特点及免疫学机制。树突状细胞(DCs)通过高水平表达主要组织相容性复合物II(MHC II)类分子、协同分子及黏附分子,诱导免疫激活,促使T细胞增殖。HIV和结核分枝杆菌感染后树突状细胞功能受损,导致Th1/Th2及Treg/Th17(help T cell,辅助性T细胞;Regulatery T cell,调节性T细胞)平衡打破,进一步降低了细胞毒性T细胞(CTL)清除结核分枝杆菌和HIV的能力。随着HIV和结核分枝杆菌共感染免疫机制研究的不断深入,人们对HIV合并结核分枝杆菌感染的诊治水平将不断提高。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒 结核分枝杆菌 树突状细胞 细胞毒性T细胞
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