肝癌微环境中肝星状细胞活化及Stefin B的表达

探讨肝癌微环境中肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)的活化与Stefin B表达情况。采用不同浓度TGF-β_1(5、10和20 ng/m L)、不同浓度肝癌细胞条件培养液(25%、50%和75%)以及TGF-β_1与肝癌细胞条件培养液混合的方法分别处理HSC,免疫细胞化学染色法和Western blotting法检测α-SMA和Stefin B蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖。结果:TGF-β_1与肝癌细胞条件培养液分别单独作用或共同作用时,HSC的α-SMA表达均升高且细胞出现活化,细胞增殖能力均增强;Stefin B在TGF-β_1单独作用时表达下调,而在肝癌细胞条件培养液单独作用及TGF-β_1与肝癌细胞条件培养液共同作用时显著升高。结果表明:肝癌微环境能够促进HSC活化及Stefin B表达。

Stefin B调控巨噬细胞极化对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化的影响

目的探讨stefin B(CSTB)调控巨噬细胞极化对肝癌细胞增殖迁移侵袭及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法诱导人单核细胞系THP-1极化成未分化巨噬细胞(M0)、经典活化的巨噬细胞(M1)、替代性活化的巨噬细胞(M2)和肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophage,TAM);构建慢病毒stefin B(LV-CSTB)及对照空载体病毒(LV-NULL),感染各亚型巨噬细胞,ELISA法检测IL-10和IL-12分泌;病毒感染各亚型巨噬细胞后的上清分别制备成条件培养液用于培养MHCC97H细胞,CCK-8法、划痕法和小室法分别检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力,RT PCR和Western blotting法分别检测细胞E-cadherin、N-cadherin、β-catenin及Twist的mRNA和蛋白表达。结果LV-CSTB感染M0、M2、TAM亚型细胞的上清中IL-10明显增加,感染M1后上清中IL-12明显增加;LV-CSTB感染M0、M2、TAM亚型的条件培养液作用时,MHCC97H细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显增强,E-cadherin的mRNA和蛋白表达明显下降,N-cadherin、β-catenin(M0除外)及Twist的mRNA和蛋白表达明显上升。结论Stefin B调控巨噬细胞M0向M2亚型极化,stefin B介导M0、M2、TAM促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭及EMT。

喉癌患者外周血Cathepsin B、L及Stefin A水平检测的意义

目的探讨喉癌患者外周血组织蛋白酶B(Cathepsin B)、组织蛋白酶L(Cathepsin L)及内源性抑制剂(Stefin A)表达水平的变化与临床诊断和预后的关系。方法收集我院确诊的喉癌患者及正常对照者血清,酶联免疫吸附测定法(Elisa)检测60例喉癌患者及30位正常对照者血清中Cathepsin B、L及Stefin A水平。结果喉癌患者血清中CathepsinB、L水平显著高于正常对照者(P<0.01),二者表达水平呈显著正相关(r=0.434 1,P<0.05);Stefin A水平显著低于正常对照者(P<0.01),但与Cathepsin B、L无显著相关性。结论喉癌患者血清中存在高水平的Cathepsin B、L及低水平的Stefin A,提示检测血清中Cathepsin B、L及Stefin A含量可协助诊断及判断预后。