不同抑制剂和激活剂对菠萝茎蛋白酶酶学特性的影响

菠萝蛋白酶作为一种典型的巯基类蛋白酶,具有稳定性差、易失活的特性。本文通过研究多种抑制剂和激活剂对菠萝茎蛋白酶活力、动力学参数及光谱特性等的影响,总结其构效变化规律,试图解释菠萝蛋白酶失活及激活机理。结果表明:抑制剂与激活剂作用下菠萝茎蛋白酶的CD图谱均表现为α-螺旋度降低,β-折叠、β-转角以及无规卷曲含量不同程度提高,但抑制剂作用下螺旋降低,折叠与卷曲的升高程度更明显。此外,抑制剂与激活剂作用下菠萝茎蛋白酶的紫外差吸收光谱也显示差异,激活剂作用下主要表现为230nm以下的二级结构变化,而抑制剂除上述变化外,还显示生色基团Trp、Tyr、Phe的暴露吸收,表明抑制剂作用下酶分子构象变化更剧烈。本文可为菠萝茎蛋白酶的改性研究提供理论基础。

菠萝茎蛋白酶的纯化及酶活力受超声处理影响的机理

对菠萝茎蛋白酶进行纯化和鉴定,并研究酶活力受超声处理影响的机理。采用羧甲基纤维素柱层析纯化、PAGE鉴定纯度,测定纯化的酶经超声波处理后的酶活性、动力学参数以及紫外和荧光光谱。柱层析分离出3个蛋白峰区域,其中第二蛋白峰经电泳鉴定纯度较高。酶经超声处理后Km变小,Vm也减小;紫外吸收光谱不变,而差示光谱出现了明显的正峰和负峰,荧光发射光谱基本不变。羧甲基纤维素柱层析对菠萝茎蛋白酶纯化效果较好,超声处理可能通过改变菠萝茎蛋白酶的构象从而改变酶活力。

海藻酸钠-壳聚糖共固定化菠萝茎蛋白酶的研究

以海藻酸钠、壳聚糖为材料共固定化菠萝茎蛋白酶,并对固定化条件以及固定化酶的酶学特性进行了研究。通过单因素及正交实验确定固定化酶的最佳条件为:酶用量0.4mg/g、海藻酸钠浓度3.0%、壳聚糖浓度1.0%、CaCl2浓度5.5%、固化时间90min。固定化后的酶重复使用4次后,相对酶活力仍保留80%以上,固化效果较好。同时,固定化酶最适反应温度和热稳定性提高,反应pH向碱性偏移,酶学特性得到了改善。