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Decreased osteogenesis of adult mesenchymal stem cel s by reactive oxygen species under cyclic stretch: a possible mechanism of age related osteoporosis 被引量:17
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作者 Jiali Tan Xin Xu +4 位作者 Zhongchun Tong Jiong lin Qiujun Yu Yao Lin Wei Kuang 《Bone Research》 SCIE CAS CSCD 2015年第1期46-51,共6页
Age related defect of the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells(MSCs) plays a key role in osteoporosis. Mechanical loading is one of the most important physical stimuli for osteoblast differentiation.... Age related defect of the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells(MSCs) plays a key role in osteoporosis. Mechanical loading is one of the most important physical stimuli for osteoblast differentiation.Here, we compared the osteogenic potential of MSCs from young and adult rats under three rounds of 2 h of cyclic stretch of 2.5% elongation at 1 Hz on 3 consecutive days. Cyclic stretch induced a significant osteogenic differentiation of MSCs from young rats, while a compromised osteogenesis in MSCs from the adult rats.Accordingly, there were much more reactive oxygen species(ROS) production in adult MSCs under cyclic stretch compared to young MSCs. Moreover, ROS scavenger N-acetylcysteine rescued the osteogenic differentiation of adult MSCs under cyclic stretch. Gene expression analysis revealed that superoxide dismutase 1(SOD1) was significantly downregulated in those MSCs from adult rats. In summary, our data suggest that reduced SOD1 may result in excessive ROS production in adult MSCs under cyclic stretch, and thus manipulation of the MSCs from the adult donors with antioxidant would improve their osteogenic ability. 展开更多
关键词 MSCs Decreased osteogenesis of adult mesenchymal stem cel s by reactive oxygen species under cyclic stretch ROS stem
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Manipulation of spermatogonial stem cells in livestock species 被引量:7
2
作者 Filipp Savvulidi Martin Ptacek +1 位作者 Karina Savvulidi Vargova Ludek Stadnik 《Journal of Animal Science and Biotechnology》 SCIE CAS CSCD 2019年第4期833-850,共18页
We are entering an exciting epoch in livestock biotechnology during which the fundamental approaches(such as transgenesis, spermatozoa cryopreservation and artificial insemination) will be enhanced based on the modern... We are entering an exciting epoch in livestock biotechnology during which the fundamental approaches(such as transgenesis, spermatozoa cryopreservation and artificial insemination) will be enhanced based on the modern understanding of the biology of spermatogonial stem cells(SSCs) combined with the outstanding recent advances in genomic editing technologies and in vitro cell culture systems. The general aim of this review is to outline comprehensively the promising applications of SSC manipulation that could in the nearest future find practical application in livestock breeding. Here, we will focus on 1) the basics of mammalian SSC biology;2) the approaches for SSC isolation and purification;3) the available in vitro systems for the stable expansion of isolated SSCs;4) a discussion of how the manipulation of SSCs can accelerate livestock transgenesis;5) a thorough overview of the techniques of SSC transplantation in livestock species(including the preparation of recipients for SSC transplantation,the ultrasonographic-guided SSC transplantation technique in large farm animals, and the perspectives to improve further the SSC transplantation efficiency), and finally, 6) why SSC transplantation is valuable to extend the techniques of spermatozoa cryopreservation and/or artificial insemination. For situations where no reliable data have yet been obtained for a particular livestock species, we will rely on the data obtained from studies conducted in rodents because the knowledge gained from rodent research is translatable to livestock species to a great extent. On the other hand, we will draw special attention to situations where such translation is not possible. 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 Genome editing LIVESTOCK TRANSGENESIS Long-term culture systems Male GERMLINE stem cells Recipient preparation Sertoli celLS Spermatogonial stem celLS Ultrasonographic-guided CANNULATION
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Complement activation in the context of stem cells and tissue repair 被引量:2
3
作者 Ingrid U Schraufstatter Sophia K Khaldoyanidi Richard G DiScipio 《World Journal of Stem Cells》 SCIE CAS 2015年第8期1090-1108,共19页
The complement pathway is best known for its role in immune surveillance and inflammation. However,its ability of opsonizing and removing not only pathogens,but also necrotic and apoptotic cells,is a phylogenetically ... The complement pathway is best known for its role in immune surveillance and inflammation. However,its ability of opsonizing and removing not only pathogens,but also necrotic and apoptotic cells,is a phylogenetically ancient means of initiating tissue repair. The means and mechanisms of complement-mediated tissue repair are discussed in this review. There is increasing evidence that complement activation contributes to tissue repair at several levels. These range from the chemo-attraction of stem and progenitor cells to areas of complement activation,to increased survival of various cell types in the presence of split products of complement,and to the production of trophic factors by cells activated by the anaphylatoxins C3 a and C5 a. This repair aspect of complement biology has not found sufficient appreciation until recently. The following will examine this aspect of complement biology with an emphasis on the anaphylatoxins C3 a and C5 a. 展开更多
关键词 COMPLEMENT ACTIVATION EMBRYONIC and ADULT stem cel
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原代人脐带间充质干细胞培养方法的研究 被引量:9
4
作者 王菲 周洪 +3 位作者 郭昱成 苏晓霞 李昂 赵小鹏 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第19期3042-3047,共6页
背景:如何获得大量稳定活力好的细胞是人脐带间充质干细胞培养的难点。目的:通过组织块法、酶消化法和酶解组织块法3种细胞培养方法比较,筛选出最佳的人脐带间充质干细胞的培养方式。方法:分离新鲜脐带10根,分别采用组织块法、酶消化法... 背景:如何获得大量稳定活力好的细胞是人脐带间充质干细胞培养的难点。目的:通过组织块法、酶消化法和酶解组织块法3种细胞培养方法比较,筛选出最佳的人脐带间充质干细胞的培养方式。方法:分离新鲜脐带10根,分别采用组织块法、酶消化法、酶解组织块法3种方式培养人脐带间充质干细胞,比较3种方式原代人脐带间充质干细胞爬出所需时间、细胞培养成功率、绘制细胞增殖曲线,利用流式细胞仪检测细胞表面标志,并进行多项分化能力检测。结果与结论:酶解组织块培养法原代人脐带间充质干细胞爬出所需时间与酶消化法无显著差异,但明显短于组织块法(P<0.01),原代人脐带间充质干细胞培养成功率显著高于其他两组,人脐带间充质干细胞增殖情况3组无显著性差异,酶解组织块培养法培养的第3代人脐带间充质干细胞其细胞表面标志及多项分化能力符合间充质干细胞的特性。酶解组织块培养法能缩短原代人脐带间充质干细胞爬出时间,显著提高原代人脐带间充质干细胞的成功率。 展开更多
关键词 干细胞 脐带脐血干细胞 间充质干细胞 人脐带间充质干细胞 原代细胞 细胞培养 组织块法 酶消化法 陕西省自然科学基金
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成人脂肪间充质干细胞的定向成骨诱导 被引量:7
5
作者 郭艳萍 陶常波 +4 位作者 张爱君 李雪阳 沈才齐 李政道 金培生 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第19期2987-2992,共6页
背景:脂肪分离可获得大量的间充质干细胞并成功向骨、软骨、脂肪、心肌等多个方向诱导分化。目的:建立成人脂肪间充质干细胞体外分离培养、成骨分化方法,并探讨脂肪间充质干细胞作为骨组织工程的种子细胞的前景。方法:通过胶原酶消化法... 背景:脂肪分离可获得大量的间充质干细胞并成功向骨、软骨、脂肪、心肌等多个方向诱导分化。目的:建立成人脂肪间充质干细胞体外分离培养、成骨分化方法,并探讨脂肪间充质干细胞作为骨组织工程的种子细胞的前景。方法:通过胶原酶消化法从成人脂肪中分离间充质干细胞,进行体外培养,流式细胞仪检测细胞表面标记物,CCK8检测细胞活性,成骨诱导液诱导干细胞向骨细胞分化,BCIP/NBT比色法染色检测碱性磷酸酶,茜素红染色检测钙结节形成,RT-PCR检测碱性磷酸酶,骨桥蛋白表达变化。结果与结论:利用脂肪抽吸液成功培养出脂肪间充质干细胞,且能稳定传代,增殖能力旺盛;流式细胞仪检测证实有特定的间充质干细胞表面标记物表达;成骨诱导脂肪间充质干细胞后呈典型的成骨细胞形态;碱性磷酸酶染色阳性,茜素红染色后可见钙结节形成,成骨诱导培养0,3,7,14,21,28 d,RT-PCR定量检测结果证实碱性磷酸酶、骨桥蛋白阳性表达。说明用酶消化法可以从人脂肪中分离得到脂肪间充质干细胞;脂肪间充质干细胞可向骨细胞诱导分化,阳性表达骨桥蛋白,碱性磷酸酶,是一种优良的骨组织工程的种子细胞。 展开更多
关键词 干细胞 脂肪干细胞 培养 诱导 脂肪间充质干细胞 成骨分化 组织工程骨 颅骨缺损 碱性磷酸酶 骨桥蛋白
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富血小板纤维蛋白释放转化生长因子β1对骨髓间充质干细胞体外增殖的影响 被引量:6
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作者 陈诚 李淑慧 +3 位作者 张文丽 李一鸣 周晶 吴佩玲 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第45期7233-7238,共6页
背景:骨髓间充质干细胞是组织修复的理想细胞,能否提高其体外增殖的能力是促进组织修复的关键因素。目的:观察转化生长因子β1对骨髓间充质干细胞体外增殖的影响。方法:兔耳中央动脉抽血,离心制备富血小板纤维蛋白,置于新鲜的DMEM培养液... 背景:骨髓间充质干细胞是组织修复的理想细胞,能否提高其体外增殖的能力是促进组织修复的关键因素。目的:观察转化生长因子β1对骨髓间充质干细胞体外增殖的影响。方法:兔耳中央动脉抽血,离心制备富血小板纤维蛋白,置于新鲜的DMEM培养液中,分别于37℃下静置7,14,21,28 d,收集富血小板纤维蛋白析出液,检测析出液中转化生长因子β1质量浓度。抽取兔骨髓进行体外培养骨髓间充质干细胞,将收集的富血小板纤维蛋白析出液配制成条件培养液作用于骨髓间充质干细胞,观察其对骨髓间充质干细胞增殖的影响。结果与结论:转化生长因子β1质量浓度随着时间的递增而增高,21-28 d是质量浓度增长最快阶段,在28 d时达到高峰;同一刺激浓度下,骨髓间充质干细胞增殖在0至1 d降低,1至2 d明显升高,2至3 d为平缓期,骨髓间充质干细胞增殖速度最快的是150 ng/L组。实验证实了富血小板纤维蛋白析出液中转化生长因子β1的质量浓度随着时间的增加而增高,含有不同质量浓度转化生长因子β1的条件培养基对骨髓间充质干细胞增殖起到不同的促进作用,骨髓间充质干细胞在含有质量浓度为150 ng/L转化生长因子β1的条件培养基中培养两三天时,增殖速度为最快。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 富血小板纤维蛋白 细胞因子 转化生长因子Β1 增殖 牙槽骨缺损 TRANSFORMING growth factor BETA1
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小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及饲养层制备 被引量:10
7
作者 胡三强 王妍妍 +1 位作者 马永宾 胡嘉波 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第45期7306-7311,共6页
背景:建立一种既可以大量制备,又易于保存并保持较高活性的饲养层细胞是人胚胎干细胞培养研究的重要环节。目的:建立昆明小鼠胚胎成纤维细胞的最佳分离培养方法,评价其用于人胚胎干细胞饲养层研究的可行性。方法:用不同浓度胰蛋白酶分... 背景:建立一种既可以大量制备,又易于保存并保持较高活性的饲养层细胞是人胚胎干细胞培养研究的重要环节。目的:建立昆明小鼠胚胎成纤维细胞的最佳分离培养方法,评价其用于人胚胎干细胞饲养层研究的可行性。方法:用不同浓度胰蛋白酶分步消化法体外分离和培养昆明小鼠胚胎成纤维细胞,观察其生物学特性,制备胚胎成纤维细胞饲养层,检测人胚胎干细胞在饲养层上培养的生长状态。结果与结论:制备昆明小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的最佳胎龄为13.5 d。不同浓度胰蛋白酶分步消化法制备的胚胎成纤维细胞生长状态好,获得的成纤维细胞纯度高,增殖活跃。冻存2周,1,3,6个月内复苏的细胞存活率差异无显著性意义。小鼠胚胎成纤维细胞在第2-4代增殖旺盛,第5代以后细胞增殖活力明显下降。人胚胎干细胞在小鼠胚胎成纤维细胞长期传代后呈典型的未分化形态,碱性磷酸酶和过碘酸-雪夫染色均为阳性。结果表明建立的昆明小鼠胚胎成纤维细胞饲养层分离培养法可为人胚胎干细胞扩增提供稳定、优质的饲养层细胞。 展开更多
关键词 干细胞 培养 人胚胎干细胞 小鼠胚胎成纤维细胞 饲养层 国家自然科学基金
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骨髓间充质干细胞与磷酸钙骨水泥复合物修复兔关节软骨缺损 被引量:7
8
作者 周常艳 周庆焕 +2 位作者 边竟 陈克 陈文 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2015年第8期1195-1199,共5页
背景:前期实验已成功将骨髓间充质干细胞接种于磷酸钙骨水泥支架,并证实其具有良好的机械强度和生物相容性。目的:观察新西兰大白兔骨髓间充质干细胞体外培养后与磷酸钙骨水泥复合修复关节软骨缺损的可行性。方法:选取18只新西兰兔用电... 背景:前期实验已成功将骨髓间充质干细胞接种于磷酸钙骨水泥支架,并证实其具有良好的机械强度和生物相容性。目的:观察新西兰大白兔骨髓间充质干细胞体外培养后与磷酸钙骨水泥复合修复关节软骨缺损的可行性。方法:选取18只新西兰兔用电钻制成股骨滑车部5 mm的骨-软骨缺损模型,随机选择15只兔于骨缺损处左侧植入单纯磷酸钙骨水泥材料作为对照组,于右侧植入骨髓间充质干细胞与磷酸钙骨水泥复合物作为实验组,另3只兔不植入任何材料作为空白组。分别于4,8,16周各时间点处死兔取材,进行X射线摄片、组织形态学观察及生物力学检测。结果与结论:术后4,8,16周各组骨缺损均有不同程度的骨再生,实验组新骨形成的速度和数量均优于其他组,组织学观察到实验组的成骨细胞及骨小梁出现均早于其他组。术后16周实验组骨标本抗弯曲能力的最大负荷、最大应力和破坏能量均明显高于对照组(P<0.05)。结果表明骨髓间充质干细胞复合磷酸钙骨水泥材料修复骨缺损可促进骨组织再生,恢复骨的刚度和强度,有望作为一种新型人工骨材料。 展开更多
关键词 生物材料 软骨生物材料 磷酸钙骨水泥 骨髓间充质干细胞 骨缺损 生物力学 骨再生
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角质细胞生长因子及氯化锂诱导毛囊干细胞定向分化中的信号通路 被引量:6
9
作者 杨斌 邓立欢 +3 位作者 李秉航 吴小莹 丁榆德 董雪 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第19期3060-3068,共9页
背景:毛囊干细胞的增殖分化受到自身基因及外来信号的共同作用,Wnt/β-catenin信号通路在毛囊毛发发育中起重要作用,但详细机制尚未明确。目的:探讨在角质细胞生长因子及氯化锂干预下,Wnt/β-catenin信号通路在人毛囊干细胞向毛囊乳突... 背景:毛囊干细胞的增殖分化受到自身基因及外来信号的共同作用,Wnt/β-catenin信号通路在毛囊毛发发育中起重要作用,但详细机制尚未明确。目的:探讨在角质细胞生长因子及氯化锂干预下,Wnt/β-catenin信号通路在人毛囊干细胞向毛囊乳突细胞或表皮细胞定向分化中的作用及与其他信号分子的相互关系。方法:获取毛囊隆突区干细胞进行培养,检测其生长曲线,观察1×106 L-1、1×107 L-1、1×108 L-1和1×109 L-1培养的毛囊干细胞在不同时间点的增殖效应;使用免疫荧光染色法对毛囊干细胞及其分化细胞进行鉴定。分别以0,0.5,1.5,10,25 mmol/L氯化锂及0,10,25,50,100μg/L角质细胞生长因子诱导毛囊干细胞分化,对比各组细胞的增殖效应,探索促毛囊干细胞分化的最佳氯化锂及角质细胞生长因子浓度。使用RT-PCR检测未处理对照组、10 mmol/L氯化锂组和10μg/L角质细胞生长因子组干预后3,5,7,9 d细胞的β-catenin、APC、GSK-3β、Axin和Lef1的mRNA转录水平。结果与结论:分离培养的毛囊干细胞在体外经多次传代后仍具有很强的增殖能力和多向分化潜能,随氯化锂浓度升高,细胞增殖效应减弱;而随角质细胞生长因子组质量浓度增高细胞增殖能力增强。含有氯化锂的K-SFM条件培养基中毛囊干细胞形态改变明显,各组间有明显差别,氯化锂>10 mmol/L时分化比例高,β-catenin表达量增高;而含有角质细胞生长因子K-SFM条件培养基中毛囊干细胞向表皮细胞分化,β-catenin变化不明显。提示氯化锂在促毛囊干细胞分化中,激活Wnt/β-catenin信号通路,抑制降解复合物重要成分GSK-3β的表达下降,促使β-catenin在细胞浆表达增加并转入核内,增加靶基因转录,促使毛囊干细胞向毛囊细胞方向分化。氯化锂>10 mmol/L是促毛囊干细胞分化的最佳浓度,但增殖效应减弱。角质细胞生长因子可促进毛囊干细胞向表皮分化,可促进毛囊干细胞增殖和迁移,促进创面再上皮化及创面愈合。氯化锂和角质细胞生长因子促毛囊干细胞定向分化的作用机制可能为激活Wnt/β-catenin信号通路,促使β-catenin表达改变,从而激活Wnt信号通路中Lef介导相关靶基因的转录。 展开更多
关键词 干细胞 诱导 毛囊干细胞 氯化锂 角质细胞生长因子 Wntβ-catenin信号通路 国家自然科学基金
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微球化人脐带Wharton胶间充质干细胞移植裸鼠皮下构建异位软骨 被引量:7
10
作者 杨建华 刘舒云 +6 位作者 赵鹏 卢世璧 张莉 黄靖香 赵斌 许文静 郭全义 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第8期1179-1184,共6页
背景:软骨细胞外基质具有众多的信号分子蛋白和因子,其成分和特性最接近天然软骨组织,因而其很可能是构建组织工程软骨的最理想原料。目的:探讨海藻酸钙-软骨细胞外基质混合凝胶微球复合人脐带Wharton胶间充质干细胞在裸鼠皮下异位构建... 背景:软骨细胞外基质具有众多的信号分子蛋白和因子,其成分和特性最接近天然软骨组织,因而其很可能是构建组织工程软骨的最理想原料。目的:探讨海藻酸钙-软骨细胞外基质混合凝胶微球复合人脐带Wharton胶间充质干细胞在裸鼠皮下异位构建组织工程软骨的可行性。方法:制备软骨细胞外基质微丝悬液,将人脐带Wharton胶间充质干细胞接种于海藻酸钙-软骨细胞外基质混合凝胶微球中体外培养后植入裸鼠背部皮下(实验组),以人脐带Wharton胶间充质干细胞混合于单纯藻酸盐凝胶微球作为对照组,于4周后取材进行大体和组织学苏木精-伊红、甲苯胺蓝、番红O及Ⅱ型胶原免疫组化观察。结果与结论:体外培养时微球中干细胞呈球形软骨细胞样形态,生长、增殖情况良好;实验组术后第4周取材可见外形呈类软骨样组织块,甲苯胺蓝、番红O及Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性,镜下观察可见大量类软骨样细胞及类软骨陷窝样结构,植入的混合凝胶微球周围组织无明显炎症反应;对照组显示微球部分降解,周围仅有少量炎症细胞及淋巴细胞。结果可见海藻酸钙-软骨细胞外基质具有良好的组织相容性,复合干细胞形成的微球植入裸鼠皮下可以构建为类软骨样组织。 展开更多
关键词 生物材料 软骨生物材料 人脐带Wharton胶 间充质干细胞 藻酸盐 软骨细胞外基质 国家自然科学基金
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骨膜复合骨髓间充质干细胞和软骨细胞体内移植修复软骨缺损 被引量:5
11
作者 刘吉斌 侯连东 +2 位作者 于强 白毅 王彦东 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2015年第3期364-369,共6页
背景:以往主要采用磨削灌洗、钻孔、微骨折技术等对软骨缺损组织进行修复,但多数技术被认为具有一定的局限性,只能减轻患者疼痛或仅短期有效。近年来越来越多的研究表明,软骨组织工程修复技术对于软骨再生及修复具有重要意义。目的:观... 背景:以往主要采用磨削灌洗、钻孔、微骨折技术等对软骨缺损组织进行修复,但多数技术被认为具有一定的局限性,只能减轻患者疼痛或仅短期有效。近年来越来越多的研究表明,软骨组织工程修复技术对于软骨再生及修复具有重要意义。目的:观察自体骨膜复合骨髓间充质干细胞和软骨细胞修复兔膝关节髁间窝软骨缺损的效果。方法:取新西兰大白兔28只,随机均分为两组,建立双侧膝关节髁间窝关节软骨缺损模型,实验组左侧植入自体骨膜与骨髓间充质干细胞-软骨细胞复合物,右侧不植入任何材料作为空白对照;对照组左侧植入自体骨膜,右侧不植入任何材料作为空白对照。术后第8,12周,取膝关节软骨缺损部位新生组织,行大体、组织学观察及Wakitani评分。结果与结论:术后12周,实验组修复组织表面基本光滑,与周围软骨色泽极其相近,出现大量软骨细胞及软骨陷窝,形成软骨基质,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈阳性,甲苯胺蓝染色较深;对照组修复组织仍为白色,新生修复组织局部凹陷,表面欠光滑,质地较硬,仅有极少量软骨细胞,甲苯胺蓝染色较浅,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈阴性,无软骨基质形成;空白对照组软骨缺损塌陷,表面不规则,修复组织为纤维组织,甲苯胺蓝染色较浅。表明自体骨膜复合骨髓间充质干细胞与软骨细胞移植能够较好修复关节软骨缺损。 展开更多
关键词 生物材料 软骨生物材料 骨膜 软骨缺损 骨髓间充质干细胞 软骨细胞
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Ⅰ型胶原修饰纯钛片促进人脂肪间充质干细胞增殖 被引量:4
12
作者 叶川 马敏先 +7 位作者 张弢 汤晋 孙博 杨龙 任厚相 孙琦 杨静 张俊标 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第25期4032-4037,共6页
背景:钛及钛合金在人工关节、骨折固定、口腔种植等临床领域应用最多,但在这些领域都存在骨量不足的复杂病例,干细胞研究的深入为骨缺损提供了促进新骨生成的解决方案,钛和干细胞的生物相容性以及钛表面改性优化等问题已引起重视。目的... 背景:钛及钛合金在人工关节、骨折固定、口腔种植等临床领域应用最多,但在这些领域都存在骨量不足的复杂病例,干细胞研究的深入为骨缺损提供了促进新骨生成的解决方案,钛和干细胞的生物相容性以及钛表面改性优化等问题已引起重视。目的:观察Ⅰ型胶原修饰纯钛片后能否改善其与人脂肪间充质干细胞的生物相容性。方法:实验分为2组,修饰组用Ⅰ型胶原修饰纯钛片,未修饰组为未用Ⅰ型胶原修饰的纯钛片,分别将第6代人脂肪间充质干细胞种植于两组钛片上。分别计算细胞种植于两组钛片上1,2,4 h贴壁细胞的数量,比较两组细胞的黏附率。MTT比色法比较细胞种植于两组钛片上2,4,6,8 d细胞在钛片上的增殖情况。比较细胞种植于两组钛片上3,6,9 d细胞的DNA和蛋白含量。将人脂肪间充质干细胞分别接种于修饰组和未修饰组钛片,细胞种植于两组钛片上6 d时,电镜扫描观察细胞在两组钛片上的生长情况。结果与结论:修饰组的细胞黏附率在培养1,2 h时高于未修饰组(P<0.05)。MTT比色法显示,修饰组和未修饰组细胞的吸光度值均随培养时间延长而增高,培养第4,6,8天修饰组吸光度值较未修饰组明显升高(P<0.05)。培养第6,9天,修饰组的DNA和蛋白含量均高于未修饰组(P<0.05)。电镜扫描观察显示,培养第6天,修饰组在细胞贴壁数量、贴壁细胞基质分泌情况明显好于未修饰组。结果证实,Ⅰ型胶原修饰纯钛片的表面活性及生物相容性较好,可促进人脂肪间充质干细胞增殖。 展开更多
关键词 生物材料 材料相容性 Ⅰ型胶原 生物相容性 生物材料 人脂肪间充质干细胞 细胞贴壁率 流式 细胞增殖 体外 DNA含量 蛋白含量 国家自然科学基金
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血管内皮生长因子基因转染的人脂肪干细胞具有较强的增殖和分化能力 被引量:7
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作者 陈犹白 张启旭 +4 位作者 Charles E.Butler 吴叶文 张丽萍 董江陵 韩岩 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期352-356,361,共6页
目的研究过表达血管内皮生长因子(VEGF)对人脂肪干细胞(hADSC)的细胞表型、增殖能力和多向分化潜能的影响。方法利用脂质体法将pIRES2-EGFP-VEGF质粒转染第2代hADSC,对照组为脂质体空载体。免疫荧光染色验证转染成功,流式细胞术检测两... 目的研究过表达血管内皮生长因子(VEGF)对人脂肪干细胞(hADSC)的细胞表型、增殖能力和多向分化潜能的影响。方法利用脂质体法将pIRES2-EGFP-VEGF质粒转染第2代hADSC,对照组为脂质体空载体。免疫荧光染色验证转染成功,流式细胞术检测两组细胞表型的差异,MTT法检测细胞增殖能力,诱导其成脂和成骨分化并进行油红O和茜素红染色。结果转染组可见EGFP和VEGF的表达,对照组无EGFP表达。两组细胞均高表达CD29、CD44、CD90,低表达CD31、CD45。转染组hADSC的增殖能力显著强于对照组,且诱导分化后的脂滴和钙结节的数量和面积均显著高于对照组。结论过表达VEGF可增强hADSC的增殖能力,促进其成脂和成骨分化,但并未显著改变细胞表型。 展开更多
关键词 人脂肪干细胞(hADSC) 血管内皮细胞生长因子 转染 增殖 分化
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瓦楞状组织工程骨支架对种子细胞接种和成骨的影响 被引量:4
14
作者 曾宪利 杨春露 +6 位作者 李江 徐湲 王硕 吴鹏 王翠芳 丁艳丽 郑新丽 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第25期3953-3960,共8页
背景:不同形状工程骨支架负载种子细胞修复骨缺损的研究效果评价不一,而负载细胞数量的多少是影响疗效的重要因素之一,目前该方面研究证据不多。目的:自制瓦楞状组织工程骨支架和其他3种形状的支架,比较4种不同形状支架负载种子细胞的数... 背景:不同形状工程骨支架负载种子细胞修复骨缺损的研究效果评价不一,而负载细胞数量的多少是影响疗效的重要因素之一,目前该方面研究证据不多。目的:自制瓦楞状组织工程骨支架和其他3种形状的支架,比较4种不同形状支架负载种子细胞的数量,以及瓦楞状组织工程骨支架体内成骨时凹槽的优势及特点。方法:①体外实验:将体积和样本数相同的4组支架分为单纯瓦楞状支架组、无瓦楞支架组、圆柱状支架组和带中空管柱状支架组,分别以相同密度、相同容积的成骨诱导兔骨髓间充质干细胞悬液接种于支架表面,孵育、培养、消化、收集,进行细胞计数、吸光度值检测以及碱性磷酸酶和茜素红染色。②体内实验:将兔随机分为重组人骨形态发生蛋白2/瓦楞状自固化磷酸钙人工骨组,瓦楞状自固化磷酸钙人工骨组和松质骨组,将体积相同的3组支架植入兔L_(5-6)两侧横突间,植入后4,8,12周行大体、组织学观察。结果与结论:体外实验显示,瓦楞状工程骨支架上滴注的细胞液能充分停留在表面,由于表面瓦楞状凹槽和液体的表面张力以及支架本身的无孔隙性使得细胞液不向培养皿流失,每个样本平均消化下来的正常形态的细胞数量高于其他3组(P<0.05),吸光度值差异无显著性意义(P>0.05)。体内实验显示,各时间点重组人骨形态发生蛋白2/瓦楞状自固化磷酸钙人工骨组的成骨量比瓦楞状自固化磷酸钙人工骨组明显多(P<0.05),与松质骨组之间比较差异无显著性意义(P>0.05)。结果证实,实验自制的瓦楞状工程骨支架的形状特点有利于种子细胞负载,从数量上保证了接种种子细胞的有效性,可促进支架大量成骨和段状骨缺损的愈合。 展开更多
关键词 生物材料 骨生物材料 瓦楞状 骨组织构建 自固化磷酸钙人工骨 重组人骨形态发生蛋白2 凹槽 组织工程骨支架 骨髓间充质干细胞 接种 静态接种法 成骨
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骨髓间充质干细胞移植治疗四肢骨折骨不连:实验成果与转化应用 被引量:11
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作者 杨俊丽 韩霞 孙明启 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第45期7337-7341,共5页
背景:利用骨髓间充质干细胞在特定的诱导条件下可分化为成骨细胞的特性,直接在骨折骨不连部位进行自体骨髓间充质干细胞移植,这一新技术受到广大骨科临床医师的关注。目的:总结分析采用骨髓间充质干细胞移植治疗四肢骨折骨不连的临床疗... 背景:利用骨髓间充质干细胞在特定的诱导条件下可分化为成骨细胞的特性,直接在骨折骨不连部位进行自体骨髓间充质干细胞移植,这一新技术受到广大骨科临床医师的关注。目的:总结分析采用骨髓间充质干细胞移植治疗四肢骨折骨不连的临床疗效。方法:检索1998至2014年西文生物医学期刊文献数据及CNKI数据库有关骨髓间充质干细胞移植治疗四肢骨折骨不连的文献,英文检索词为"bone marrow stem cells(BMSCs),stem cell transplantation(SCT),nonunions,tissue engineering",中文检索词为"骨髓间充质干细胞,干细胞移植,骨不连"。排除内容重复和缺乏原创性文献,保留36篇文献做进一步分析。结果与结论:将骨髓间充质干细胞移植到骨不连断端骨组织,可诱导其分化为成骨细胞来修复骨不连、骨缺损,为临床应用奠定了理论基础。骨髓间充质干细胞具有明确的骨缺损修复能力,众多研究表明采用骨髓间充质干细胞移植治疗四肢骨折骨不连是安全、有效的。 展开更多
关键词 干细胞 移植 骨不连 骨髓间充质干细胞 干细胞移植术 骨组织工程
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人脂肪干细胞促进小鼠随意型皮瓣血管的新生 被引量:5
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作者 曹菁 姜南 +2 位作者 徐扬阳 朱梦琳 杨柳 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第19期2993-2998,共6页
背景:脂肪干细胞是从脂肪组织中分离提取的一种具有多向分化潜能的干细胞,对缺血性疾病的治疗有积极作用。目的:观察局部移植人来源脂肪干细胞对小鼠随意型皮瓣成活能力及血管新生效应的影响。方法:体外经分离、培养及传代健康成人脂肪... 背景:脂肪干细胞是从脂肪组织中分离提取的一种具有多向分化潜能的干细胞,对缺血性疾病的治疗有积极作用。目的:观察局部移植人来源脂肪干细胞对小鼠随意型皮瓣成活能力及血管新生效应的影响。方法:体外经分离、培养及传代健康成人脂肪干细胞。于SPF小鼠背部设计蒂在头侧的随意型皮瓣设为实验组,随后于皮瓣蒂部、中部、远端分3次注射脂肪干细胞悬液、并设置以同法注射等量PBS的小鼠作对照组。移植后7 d,计算各组皮瓣成活率。移植后14 d,取皮瓣组织,随机作冰冻切片CD31免疫荧光染色,荧光显微镜下观察皮瓣组织微血管分布情况,并对CM-Dil标记的脂肪干细胞示踪;ELISA法检测皮瓣组织中血管内皮生长因子水平;Western blot法检测皮瓣组织中基质细胞衍生因子1蛋白的表达。结果与结论:与对照组相比,实验组小鼠背部随意皮瓣成活率明显提高,皮瓣组织中微血管数目明显增多,血管内皮生长因子分泌水平明显升高,基质细胞衍生因子1蛋白表达明显增多(P<0.05)。结果证实,人脂肪干细胞局部移植到随意型皮瓣后,可上调血管内皮生长因子和基质细胞衍生因子1的表达,促进皮瓣的血管新生。 展开更多
关键词 干细胞 脂肪干细胞 外科皮瓣 细胞移植 血管新生 细胞因子 细胞培养
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滑膜间充质干细胞与软骨细胞三维条件下混合培养向软骨细胞的分化 被引量:5
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作者 宁晓婷 邵博 +7 位作者 龚忠诚 刘慧 凌彬 克热木·阿巴斯 林兆全 杨萌 尹小朋 胡露露 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第34期5434-5440,共7页
背景:软骨细胞通过自分泌及旁分泌的作用可以为滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化提供所需的生长因子及微环境,三维条件下更有利于细胞的黏附增殖与分化。目的:观察滑膜间充质干细胞与软骨细胞混合培养于壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料中向... 背景:软骨细胞通过自分泌及旁分泌的作用可以为滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化提供所需的生长因子及微环境,三维条件下更有利于细胞的黏附增殖与分化。目的:观察滑膜间充质干细胞与软骨细胞混合培养于壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料中向成软骨细胞分化的能力。方法:取SD大鼠滑膜组织及软骨组织,用酶消化法获得滑膜间充质干细胞及软骨细胞分别进行培养。取第3代滑膜间充质干细胞及第2代软骨细胞,将二者以1∶2的比例混合培养负载于壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料21 d,进行激光共聚焦扫描及免疫组织化学检测。结果与结论:培养72 h后,扫描电镜观察细胞黏附于支架材料表面,并可见细胞分泌大量基质成分。培养21 d后,激光共聚焦扫描可见细胞在支架表面分布均匀,逐层扫描后细胞逐渐减少。免疫组织化学检测可见基质能被Ⅱ型胶原染色,细胞染色呈现棕黄色。结果表明壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料提供三维生长空间,利用软骨细胞分泌生长因子及细胞间的相互作用可以诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化。 展开更多
关键词 生物材料 软骨生物材料 滑膜间充质干细胞 软骨细胞 混合培养 生长因子 软骨形成 壳聚糖 Ⅰ型胶原 国家自然科学基金
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不同浓度透明质酸水凝胶的细胞相容性 被引量:9
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作者 李凯 吕少一 +3 位作者 周建业 商青青 邵自强 胡盛寿 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第16期2927-2934,共8页
背景:水凝胶呈半凝固的胶体状态,可以实现细胞的三维立体培养,消除普通培养皿中出现的"接触抑制"现象,从而提高培养效率,透明质酸水凝胶作为三维培养基质在干细胞和组织工程研究领域的应用已有报道。目的:探讨透明质酸水凝胶... 背景:水凝胶呈半凝固的胶体状态,可以实现细胞的三维立体培养,消除普通培养皿中出现的"接触抑制"现象,从而提高培养效率,透明质酸水凝胶作为三维培养基质在干细胞和组织工程研究领域的应用已有报道。目的:探讨透明质酸水凝胶浓度的改变对其基本性能以及对大鼠骨髓间充质干细胞三维培养形态和增殖的影响。方法:制备4,8,12g/L的透明质酸水凝胶,观察其凝胶时间、溶胀率、降解速率以及黏弹性;用这3种浓度透明质酸水凝胶包封骨髓间充质干细胞进行三维培养,并以普通培养皿的二维培养作对照。通过激光扫描共焦显微镜观察不同培养条件下骨髓间充质干细胞的形态,采用细胞计数法描绘骨髓间充质干细胞在不同浓度透明质酸水凝胶内的生长曲线。结果与结论:对于4-12g/L的透明质酸水凝胶,其浓度越大,凝胶时间越短,溶胀率越低,降解速率越慢,水凝胶弹性强度越大(P<0.05)。激光扫描共焦显微镜见骨髓间充质干细胞在透明质酸水凝胶内呈立体圆球形,与二维培养时呈现的梭形明显不同;同时,细胞计数结果显示骨髓间充质干细胞在透明质酸水凝胶内的增殖率高于二维培养,并以8g/L透明质酸水凝胶的促增殖作用最明显(P<0.05)。可见不同浓度的透明质酸水凝胶性能存在差异,对大鼠骨髓间充质干细胞的生长、增殖也有影响,8g/L的透明质酸水凝胶更适合大鼠骨髓间充质干细胞的三维培养。 展开更多
关键词 生物材料 材料生物相容性 组织工程 透明质酸水凝胶 机械性能 骨髓间充质干细胞 三维培养 增殖 性能
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C57小鼠脂肪及骨髓间充质干细胞生物学特性的比较 被引量:3
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作者 张荣耀 毕晓娟 +4 位作者 马艳 段显琳 薛文婧 王一淳 江明 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第19期3023-3029,共7页
背景:研究发现,脂肪源干细胞具有和骨髓间充质干细胞一样的贴壁和形成成纤维样克隆特性,并具有向骨、脂肪、软骨等多系分化的能力。目的:比较C57小鼠脂肪源间充质干细胞和骨髓间充质干细胞的生物学特点。方法:在无菌的条件下分别从C57... 背景:研究发现,脂肪源干细胞具有和骨髓间充质干细胞一样的贴壁和形成成纤维样克隆特性,并具有向骨、脂肪、软骨等多系分化的能力。目的:比较C57小鼠脂肪源间充质干细胞和骨髓间充质干细胞的生物学特点。方法:在无菌的条件下分别从C57小鼠的脂肪和骨髓中获取脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞。体外分离、培养并将脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞传至第3代,进行细胞形态、表面标记、生长动力学分化潜能测定和Notch信号相关基因的检测。结果与结论:脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞形态学相似,第3代的脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞均表达CD29、CD105、Sca-1,不表达CD34、CD133,但骨髓间充质干细胞还表达CD45;生长曲线和细胞克隆分析显示脂肪间充质干细胞的增殖速度明显比骨髓间充质干细胞快;脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞均可向成骨、成脂、成软骨诱导分化,脂肪间充质干细胞更易向成骨诱导;Notch相关基因检测显示脂肪源干细胞的Jagged-1表达水平明显比骨髓间充质干细胞低,而Hes-1的表达水平脂肪源干细胞明显高于骨髓间充质干细胞的表达水平。提示脂肪间充质干细胞比骨髓间充质干细胞扩增能力更强,更易向成骨分化,可能与Hes-1表达水平有关。 展开更多
关键词 干细胞 脂肪干细胞 间充质干细胞 脂肪源间充质干细胞 骨髓间充质干细胞 生物学特性 诱导分化
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同种异体脱钙骨与骨髓间充质干细胞关节腔内共培养:与同腔软骨性状的对比 被引量:4
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作者 徐斌 周亮 +1 位作者 王英明 钱三祥 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第8期1165-1171,共7页
背景:临床发现膝关节内游离体能长期存在于关节腔内并能保持一定的软骨组织学特性和生理学特性,因此大胆提出假设:关节腔环境可能是软骨细胞生长、发育的较佳环境并提出"腔内培养,腔内移植"的理念。目的:观察兔骨髓间充质干... 背景:临床发现膝关节内游离体能长期存在于关节腔内并能保持一定的软骨组织学特性和生理学特性,因此大胆提出假设:关节腔环境可能是软骨细胞生长、发育的较佳环境并提出"腔内培养,腔内移植"的理念。目的:观察兔骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨基质体外培养或关节腔内培养组织工程软骨与同腔软骨的性状差异。方法:实验分3组进行,体外培养组将经成软骨诱导的乳兔骨髓间充质干细胞与成年兔脱钙骨基质体外复合培养;腔内培养组将经成软骨诱导的乳兔骨髓间充质干细胞与成年兔脱钙骨基质以筋膜包裹,复合培养于成年新西兰兔膝关节腔内,以同腔内正常软骨为对照。结果与结论:培养12周后:①体外培养组苏木精-伊红染色见软骨细胞少量增生,胞核蓝染;甲苯胺蓝染色见软骨细胞排列无序,少量周围基质包绕;Masson染色阳性区域小,细胞排列无序;Ⅱ型胶原免疫组织化学见软骨细胞胞浆及胞外基质少量黄色颗粒。②腔内培养组苏木精-伊红染色见软骨细胞增生,胞核蓝染;甲苯胺蓝染色见软骨细胞成串排列,软骨陷窝形成,周围基质包绕;Masson染色阳性,软骨细胞多,基质蓝染,按一定应力方向排列;Ⅱ型胶原免疫组织化学见细胞外基质中出现较多棕黄色颗粒,Ⅱ型胶原染色阳性。说明骨髓间充质干细胞与同种异体脱钙骨基质复合物可在体外及膝关节腔内培养出组织工程软骨,关节腔内培养的软骨比体外培养的软骨更接近正常软骨。 展开更多
关键词 生物材料 软骨生物材料 骨髓间充质干细胞 同种异体脱钙骨 组织工程软骨 关节腔
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