MCS+血细胞分离机在自体外周血造血干细胞采集中的应用

目的探讨MCS+血细胞分离机在外周血干细胞采集中的使用和故障处理.方法总结我科自2002年1月至2004年12月共收治81例患者,采用MCS+血细胞分离机进行165次外周血干细胞采集,分析采集成功率、不良反应发生率和故障处理等情况.结果 81例病人中90%为使用G-CSF后3～4天开始采集.68例患者进行股静脉插管采集,占84.0%;13例经肘正中静脉穿刺采集,占16.0%.采集过程最长6.3小时,最短4.2小时,平均4.8小时.按照累计采集物CD34+细胞总数>2.0×106/kg为采集成功标准,81例患者中78例需要连续2次采集,另有3例患者3次连续采集.单次采集处理血量为7326±627.3ml,采集物为87±18.4ml.81例患者165次采集中有10次出现ACD-A过敏反应(6.1%).采集中1例患者出现终产品袋出口处被血凝块堵塞,2例患者出现插管血流不畅,血流速度低于20ml/min,机器无法进行正常运转,故障发生率1.82%,上述情况经及时处理,未造成严重不良反应,均顺利完成采集.结论采用MCS+血细胞分离机进行外周血干细胞采集方法可靠,平均2次采集可达到临床治疗要求.

脂肪间充质干细胞的分离培养、多向分化及其应用前景

脂肪组织几乎遍布于动物体全身,在整个生命过程中有极强的可塑性.近年研究表明,运用相似的分离方法,可从人、小鼠、大鼠、兔和猪等物种脂肪组织中分离获得脂肪间充质干细胞.与骨髓来源的间充质干细胞相比,它具有相似的表面标记和分化潜能;在合适的诱导条件下,这种细胞能分别向3个胚层的细胞分化,如成肌细胞、心肌细胞、软骨细胞、成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞、血管内皮细胞和肝细胞等;脂肪间充质干细胞具有来源丰富,取材安全方便和扩增速率高的特点,使其在细胞治疗和组织工程方面具有更广阔的应用前景.

造血干细胞动员及采集的影响因素

目的研究影响外周血干细胞的动员及采集因素。方法35例血液病患者予以化疗+粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员,15例正常供者予以G-CSF动员。用Cobe Spectra血细胞分离机采集外周血干细胞。结果外周血造血干细胞的有效动员与被动员者的年龄、性别、体表面积、采集的循环血量及骨髓是否曾经累及无关,而与动员所应用的化疗的种类相关;以环磷酰胺(CTX)为主的化疗+G-CSF动员优于柔红霉素+阿糖胞苷(DA)+G-CSF(P<0.01);CTX为主的化疗+G-CSF动员产品单个核细胞与中剂量阿糖胞苷+G-CSF动员无统计学差异,CD34+含量则CTX组显著优于DA组(P<0.05);中剂量阿糖胞苷+G-CSF动员与DA+G-CSF动员方案相比较,两组无统计学差异(P>0.05)。结论外周血造血干细胞的有效动员与动员所应用的化疗种类相关,CTX为主的化疗+G-CSF动员效果最佳,蒽环类药物动员效果相对较差并动员前尽量减少使用。

同时扩增与收获脐带血来源造血干细胞及间充质干细胞的研究

目的为利用生物反应器,实现脐带血(Umbilical cord blood,UCB)来源的造血干细胞(Hematopoietic stem cells,HSCs)与间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)的同时扩增与收获。方法为在不添加血清、只添加细胞因子组合(SCF15ng·mL-1,FL5ng·mL-1,TPO6ng·mL-1,IL-315ng·mL-1,G-CSF1ng·mL-1,GM-CSF5ng·mL-1)及海藻酸钙壳聚糖胶珠包被基质细胞支持的条件下,采用玻璃包被的聚苯乙烯(Glass coated styrene copolymer,GCSC)微载体与生物反应器相结合的策略,考察了UCB-HSCs与UCB-MSCs在转瓶及旋转壁式生物反应器(Rotating wall vessel bioreactor,RWVB)内的共培养。结果RWVB中的扩增效果最佳,12天内有核细胞(Nuclear cells,NCs)扩增了3.7±0.3倍;集落形成细胞(Colony-forming units in culture,CFU-Cs)扩增了5.1±1.2倍;CD34+CD45+CD105-(HSCs)细胞扩增了5.2±0.4倍;CD34-CD45-CD105+(MSCs)细胞扩增了13.9±1.2倍。培养结束后,通过自由沉降的方法分离UCB-HSCs和粘附在GCSC微载体表面的UCB-MSCs。同时,细胞多向诱导分化及免疫表型分析结果显示,粘附在GCSC微载体表面上的细胞能够向骨、软骨及脂肪细胞分化;并能够表达间质细胞相关表面标志CD13,CD44,CD73和CD105,而不表达造血细胞的相关表面标志CD34,CD45及HLA-DR,与骨髓MSCs相一致。结论为添加细胞因子、基质细胞及微载体支持的条件下,在生物反应器内能够实现UCB-HSCs和UCB-MSCs的同时扩增与收获。

39例无偿捐献外周造血干细胞供者的护理

总结报道对39例无偿捐献外周血干细胞供者的护理方法:无关供者39名,经检查与患者HLA-A、B、DRB1 3个位点6个等位基因全相合,外周造血干细胞动员后,经肘静脉采集干细胞。造血干细胞采集前后充分讲解相关的移植知识,解除供者及其家属的恐惧紧张心理;采集中严密观察不良反应,本组7例出现明显的口角麻木等枸椽酸盐中毒反应,14例出现疲劳、困倦;采集后做好对供者的健康回访。结果39例供者均接受外周造血干细胞采集,采集效果满意,保证了外周造血干细胞移植的顺利进行。

探讨外周血干细胞采集过程中最佳补钙方法

目的:探寻预防和治疗外周血干细胞(PBSC)采集过程中低钙血症的最佳补钙方法。方法:对175例正常健康供者行222例次PBSC采集,按补钙方法不同将222例次采集分为口服组(60例次),静脉推注组(71例次)和静脉滴注组(91例次)。观察采集过程中供者低钙血症的症状,并检测采集物中有核细胞和CD34+细胞的量。结果:口服组低钙血症发生率及严重程度均明显高于静脉推注组和静脉滴注组(P<0.05)。而静脉推注组与静脉滴注组在低钙血症发生率和严重程度方面差异无统计学意义(P>0.05)。3组采集物中有核细胞数和CD34+细胞数差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:静脉滴注补钙方法预防和治疗PBSC采集过程中的低钙血症效果好,操作方便,且不影响采集效果。

单个核细胞绝对计数对恶性血液病患者自体外周血干细胞采集结果及时机选择的意义

目的探讨一种快速、简捷判断恶性血液病自体外周血干细胞最佳采集时机的方法。方法 37例次行自体外周血干细胞移植(auto-PBSCT)的不同类型恶性血液病患者,以化疗+粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员,采集前进行外周血白细胞(WBC)、单个核细胞(MNC)比例测定及其绝对计数,以血细胞分离机进行外周血干细胞采集,应用流式细胞术(FCM)监测CD34+细胞计数。结果采集产品的MNC中位数为1.76×108/kg,CD34+细胞中位数为1.35×106/kg;MNC绝对计数是产品MNC和CD34+细胞总量的唯一相关指标,而外周血WBC计数和MNC比例与采集产品MNC和CD34+细胞总量无关。进一步分析提示MNC绝对计数达10×108/L单次采集效率提高,中位CD34+细胞采集量达1×106/kg以上,可作为启动采集的阈值。结论外周血MNC的绝对计数能快速、简便地动态监测外周造血干细胞的变化,为外周血造血干细胞最佳采集时机的判断提供了一种快捷、经济的参考方法。

供体外周血干细胞采集中不良反应原因分析及对策

笔者对65例造血干细胞移植的供者,在进行外周血干细胞采集过程中所出现的不良反应,如血流通路障碍、过敏反应、枸橼酸盐中毒反应等进行综合分析,并采取相应的护理对策,包括心理护理,预防用药,保证整个管道系统连接紧密,安装正确,保证采集血管充盈,密切观察患者反应等,所有病例均顺利完成外周血干细胞采集。

单次大容量采集自体外周血干细胞行APBSCT治疗恶性淋巴瘤

目的:探讨恶性淋巴瘤患者自体外周血干细胞(PBSC)的单次大容量采集方法及其效果。方法:根据7 例恶性淋巴瘤患者动员后外周血的单个核细胞数(MNC)、分离采集过程中收集的干细胞混悬液的混浊程度及病人的状况,采用Cobe-Spectra血细胞分离仪按患者全血容量(TBV)的3个循环单次分离并采集外周血的干祖细胞,计数MNC及CD34+胞数,冻存10-14 d后行自体外周血干细胞移植(APBSCT)术,观察造血重建的情况。结果:7例患者单次大容量采集到的MNC及CD34+平均细胞数分别为7.25×108/kg和5.57×106/kg,采集过程中有1例患者出现较重的肢端及口唇麻木感,余6例均无其他明显不适,采集顺利。行APBSCT术后中性粒细胞≥0.5×109/L及血小板≥20×109/L的平均天数分别为+8.9 d和+8.7 d。结论:部分恶性淋巴瘤患者可单次大容量采集到足够量的干祖细胞,且采集过程是安全的,行APBSCT术后造血重建迅速。

自体外周血干细胞移植治疗重症肌无力的造血干细胞动员和采集初步研究

目的 探讨外周血干细胞移植 (PBSCT)治疗重症肌无力 (MG)的造血干细胞动员和采集的有效性。方法 MG患者 1例 ,用环磷酰胺 (CTX) +粒细胞集落刺激因子 (G CSF)联合动员 ,用细胞分离机采集外周血干细胞 ;用流式细胞测定动员后CD+ 3 4 细胞数和用体外半固体甲基纤维素培养法测定单核细胞集落形成单位 (GM CFU)数 ;用相对评分法评估造血干细胞移植后患者的临床疗效。结果 动员后单核细胞 (MNC)为8 0 8× 10 8/kg、GM CFU数为 7× 10 5/kg ,或集落数为 81× 10 5/MNC和CD+ 3 4 细胞数为 1 0 9× 10 6/kg。相对评分法患者的临床疗效为 7/ 8分。结论 CTX +G CSF能有效地动员外周血干细胞 ,可以为移植提供足够数量的造血干细胞数。

三种补钙方法在预防外周血造血干细胞采集中枸橼酸盐中毒的效果比较

目的 探讨最佳的补钙方法以预防外周血造血干细胞(PBSC)采集中的枸橼酸盐中毒(CI).方法 对141例自体患者或异体供者进行了166例次的PBSC采集,按补钙方法不同将患/供者随机分为三组,即口服组(66例次):采集中每小时服1次10%葡萄糖注射液20 ml+10%葡萄糖酸钙20 ml,整个过程口服3～4次;静注组(52例次):采集中每小时静脉缓慢注射1次10%葡萄糖注射液20 ml+10%葡萄糖酸钙10 ml,整个采集过程应用3～4次;静滴组(50例次):采集中静脉持续滴注10%葡萄糖注射液350 ml+10%葡萄糖酸钙30 ml,速度为25～30滴/min,出现CI症状时稍加快滴速.采集中密切观察并记录CI发生情况.结果 口服组CI发生率为28.1%,其中轻度12例次,中度6例次,无重度中毒者,出现CI的平均时间为开始采集后122 min;静注组CI的发生率为18.2%,其中轻度7例次,中度1例次,无重度中毒者,出现CI的平均时间为开始采集后134 min;静滴组CI的发生率为10.0%,均为轻度中毒者,出现CI的平均时间为开始采集后172 min.三组间的CI发生率(χ2=6.612,P＜0.05)及CI程度(χ2=7.290,P＜0.05)的分布比较差异均有统计学意义,其中以静滴组CI的发生率最低、程度最轻,而CI发生时间差异无统计学意义(χ2=1.427,P＞0.05).结论 静脉滴注葡萄糖酸钙是预防造血干细胞采集中枸橼酸盐中毒的最佳方法,其疗效佳和安全性好,值得临床推广应用.