Src蛋白激酶的研究进展

类固醇受体辅激活因子(Steroid receptor coactivator, Src)是一种由Src原癌基因编码的非受体型酪氨酸激酶,属于Src家族蛋白激酶(Src-family kinases, SFKs)的核心成员.Src广泛存在于人体细胞中,可调节细胞分裂、运动、黏附、血管生成和存活等多种过程,对维持机体的正常生理功能活动具有重要作用.Src诱导各种恶性细胞的转化,在多种肿瘤细胞中都有发现,可以参与肿瘤的产生、生长、转移等多方面.与Src相关的信号通路异常激活或过表达会导致机体异常,进而导致癌症的产生.本文主要综述了Src的结构、Src的信号通路、Src对癌症治疗的作用及其抑制剂等.

子宫腺肌病患者子宫内膜组织中ER、PR、SRC-3表达变化及意义

目的观察子宫腺肌病(AM)患者子宫内膜组织中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、类固醇受体辅助活化因子3(SRC-3)的表达变化,探讨其临床意义。方法采用组织芯片技术及免疫组化法检测42例AM患者异位内膜组织(异位内膜组)和15例子宫肌瘤患者非瘤区子宫内膜组织(对照内膜组)的ER、PR、SRC-3。结果与对照内膜组比较,异位内膜组ER、PR表达降低,SRC-3表达升高,P均<0.05;对照内膜组增殖期ER、PR、SRC-3表达均高于分泌期(P均<0.05),异位内膜组增殖期、分泌期ER、PR、SRC-3表达无明显差异(P均>0.05);异位内膜组分泌期ER表达低于对照内膜组分泌期(P<0.05)。异位内膜组ER与SRC-3表达呈负相关(r=-0.693,P<0.01)。结论 AM患者子宫内膜组织中ER、PR低表达、SRC-3高表达,三者可能与AM的发生、发展有关。

SRC-3、IGF-1在子宫肌瘤组织中的表达及意义

目的:研究SRC-3、IGF-1蛋白及基因在子宫肌瘤中的表达,探讨其与子宫肌瘤发生发展的关系。方法:采用免疫组织化学SP法、RT-PCR和Western blot分别从细胞、基因及蛋白水平检测SRC-3和IGF-1在子宫肌瘤及瘤旁正常组织中的表达。结果:SRC-3蛋白的阳性表达主要定位于细胞胞浆中,少数位于细胞核。IGF-1蛋白的阳性表达定位于细胞胞浆中。SRC-3、IGF-1蛋白在子宫肌瘤中的阳性表达率(67.65%,80.88%)均显著高于瘤旁正常组织(16.18%,27.94%)(P均<0.05)。SRC-3 mRNA、IGF-1 mR-NA在子宫肌瘤中的表达水平均显著高于瘤旁正常组织(P均<0.05)。子宫肌瘤中SRC-3蛋白的表达与IGF-1蛋白的表达呈正相关(r=0.303,P<0.05)。结论:SRC-3、IGF-1与子宫肌瘤的发生发展有关。SRC-3可能参与调节IGF-1介导的信号传导通路,促进子宫肌瘤的发生发展,有望为子宫肌瘤的临床治疗提供新的研究方向。

严重烧伤早期SRC-3基因敲除小鼠肝脏糖皮质激素受体表达变化的实验研究

目的研究严重烧伤早期SRC-3基因敲除小鼠肝脏糖皮质激素受体表达及核转位的变化。方法以SRC-3基因敲除小鼠为实验组，以野生型小鼠为对照组，以小鼠15％-20％TBSAⅢ度烧伤为实验模型，观察两组在严重烧伤前、烧伤后1、6、12h肝脏GR表达及核转位的变化，同时提取致伤前、致伤后1h以及6h血清标本，观察炎性细胞因子TNF-d及抗炎细胞因子IL-10的变化。结果野生型小鼠致伤后肝脏总蛋白中GR1h即显著下降，6h仍明显低于正常，12h有所恢复。而SRC-3基因敲除小鼠致伤后肝脏总蛋白中GR无明显变化，野生型小鼠和SRC-3基因敲除小鼠致伤后肝脏GR核转位均增加，但SRC-3基因敲除小鼠GR核转位增加更为显著；两组致伤后炎性细胞因子TNF-α均升高，但野生型小鼠升高更为显著，而实验组抗炎细胞因子IL-10的升幅大于对照组。结论严重烧伤对野生型小鼠和SRC-3基因敲除小鼠肝脏GR的影响具有明显的差异，SRC-3的缺失可能减轻了严重创伤早期对GR功能的抑制作用。

ROS/SRC/FAK信号通路在膀胱癌疾病进展中的作用机制研究

目的观察活性氧(ROS)/类固醇受体共激活因子(SRC)/黏着斑激酶(FAK)信号通路对膀胱癌疾病进展的影响。方法收集2019年6月—2020年12月同济大学附属同济医院泌尿外科经膀胱镜活检、膀胱部分切除的膀胱癌组织标本69份,同时取癌旁组织作为对照,免疫组化检测组织中SRC、FAK蛋白阳性表达,并比较其在不同病理分化程度、浸润程度中的差异。以膀胱癌T24细胞为研究对象,分为对照组(细胞正常培养)、ROS清除剂N,N’-二甲基硫脲(DMTU)干预组(DMTU浓度20μmol/L)、DMTU+SRC激酶抑制剂(PP2)干预组(DMTU浓度20μmol/L,PP2浓度5μmol/L)。ROS检测试剂盒检测细胞中ROS水平;Transwell实验检测细胞迁移、侵袭情况;蛋白免疫印迹(WB)检测细胞中SRC、磷酸化SRC(p-SRC)、FAK、磷酸化FAK(p-FAK)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、钙蛋白酶2(calpain2)蛋白表达情况。结果SRC阳性表达于细胞膜上,FAK阳性表达于细胞浆中,与癌旁组织比较,膀胱癌组织中SRC、FAK阳性比例升高(χ^(2)/P=44.357/0.000、15.019/0.030)。浸润性膀胱癌组织中SRC、FAK表达阳性率高于非浸润性膀胱癌(χ^(2)/P=18.200/0.000、4.681/0.030)。与对照组比较,DMTU干预组ROS相对含量降低(P<0.05),细胞迁移、侵袭数量及细胞中p-SRC/SRC、p-FAK/FAK、MMP-9、calpain2蛋白水平升高(P<0.05);与DMTU干预组比较,DMTU+PP2干预组ROS相对含量升高(P<0.05),细胞迁移、侵袭数量及细胞中SRC、p-SRC/SRC、p-FAK/FAK、MMP-9、calpain2蛋白水平降低(P<0.05)。结论抑制ROS可激活SRC/FAK信号通路,从而增强膀胱癌细胞迁移、侵袭,加重疾病进展。

严重烧伤对SRC-3基因敲除小鼠肝脏NF-κB表达及核转位的影响

目的研究烧伤对SRC3基因敲除小鼠转录因子NFκB表达及核转位的影响。方法以SRC3基因敲除小鼠为实验组,以野生型小鼠为对照组,以小鼠15%～20%TBSAⅢ度烧伤为实验模型,观察两组在严重烧伤前、烧伤后1、6、12h肝脏总蛋白NFκB、IκBα表达及核蛋白NFκB转位情况。结果野生型小鼠致伤后肝脏总蛋白中NFκB各时相点除伤后6h有所下降外(P<0.05),其余相差不显著,而SRC3基因敲除小鼠致伤后肝脏总蛋白中NFκB有增加的趋势;野生型小鼠致伤后肝脏NFκB核转位明显增加(P<0.01),6h达到峰值,而SRC3基因敲除小鼠致伤后肝脏NFκB核转位亦有所增加,但明显低于野生型小鼠(P<0.01);野生型小鼠致伤后肝脏总蛋白中IκBα表达变化不明显(P>0.05),而SRC3基因敲除小鼠致伤后肝脏总蛋白中IκBα表达伤后1h明显下降(P<0.01),之后均高于正常(P<0.01)。结论严重创伤后SRC3基因敲除小鼠NFκB的表达及核转位与野生型小鼠有明显的差异,SRC3的缺失可能部分抑制了NFκB对创伤应激的调控作用。

SRC-3基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定

目的 繁殖和鉴定SRC-3基因敲除小鼠。方法 将所引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖 ,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子 -3种基因型 ,提取每只小鼠尾部基因组DNA ,用PCR法进行鉴定 ,一旦获得雄性纯合子 ,就将其与雌性杂合子交配 ,依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结果 SRC -3杂合子小鼠的饲养和繁殖均获得成功 ,亦获得了较多的基因敲除纯合子小鼠。结论 正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从杂合子中获得SRC-

SRC-1蛋白缺失对严重烧伤小鼠肝脏NF-κB表达及核转位的影响

目的研究类固醇受体辅活化子-1（SRC-1）基因敲除小鼠严重烧伤早期肝脏核因子-kB（NF-kB）表达及核转位的变化。方法以SRC1基因敲除小鼠为实验组，以野生型小鼠为对照组，以小鼠15％～20％TBSAⅢ度烧伤为实验模型，观察两组在严重烧伤前及烧伤后1、6、12h肝脏总蛋白NF-kB表达及伤后核转位的变化，同时提取致伤前、致伤后1、6h血清标本，观察炎性细胞因子TNF-a、IL-1β、IL-6的变化。结果与野生型小鼠相比，SRC-1基因敲除小鼠严重烧伤后肝脏总蛋白NF-kB水平有所增加，而野生型小鼠有所下降。从核转位的情况来看，SRC-1基因敲除小鼠致伤后NF-kB的入核能力明显强于野生型小鼠，6h差别最大。两组致伤后炎性细胞因子TNF-a、IL-1β、IL-6均升高，但SRC1基因敲除小鼠升高更为显著。结论SRC1蛋白对严重烧伤具应激性保护作用，缺失SRC1蛋白使NF—kB功能增强更显著，致炎性细胞因子TNF-a、IL-1β、IL-6更大量产生，使整体伤情征象更重。

SRC-1基因在小鼠神经干细胞分化过程中的变化

目的观察类固醇受体辅助活化因子-1(SRC-1)基因在小鼠神经干细胞(NSCs)体外培养分化过程中表达的变化。方法用机械分离和酶消化法从1~3 d小鼠大脑皮质获取NSCs原代细胞,体外培养获神经球,传代并消化,经血清诱导神经球细胞分化。形态学、细胞免疫荧光实验观察神经球形态、Nestin表达鉴定NSCs;抗体分别标记神经元、星形胶质细胞,检测细胞分化d 3、9的细胞类型。RT-qPCR和免疫印迹法检测细胞分化d 0、3、9 SRC-1基因mRNA和蛋白的表达。结果新生小鼠大脑皮质获取的细胞,体外培养能扩增形成神经球,Nestin阳性表达。NSCs分化d 3主要为神经元,d 9主要为星形胶质细胞。与NSCs分化d 0相比,SRC-1表达在分化d 3明显升高,在分化d 9明显降低。 结论 成功分离并获取新生小鼠皮质NSCs。在NSCs分化中,SRC-1表达量有明显变化,分布依次为神经元>NSCs>星形胶质细胞。

肝癌组织中SRC-3的表达及其与肝癌临床病理特征的关系

目的探讨肝癌组织中类固醇受体共激活因子-3(SRC-3)表达及其与肝癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学染色和RT-PCR检测80例肝癌组织和癌旁组织中SRC-3蛋白和mRNA表达水平。结果肝癌组织中SRC-3蛋白阳性表达率为56.25%,明显高于癌旁组织的8.75%,差异有统计学意义(P<0.05)。58例肝癌组织中SRC-3 mRNA呈高水平转录,癌旁组织仅有12例出现高水平转录,肝癌组织中SRC-3 mRNA转录水平较癌旁组织明显升高(P<0.05)。合并乙型肝炎病毒(HBV)感染肝癌患者SRC-3蛋白表达阳性率为63.49%,明显高于未合并HBV感染肝癌患者的29.41%,差异有统计学意义(P<0.05);甲胎蛋白(AFP)<400 ng·m L-1肝癌患者SRC-3蛋白表达阳性率为76.19%,明显高于AFP≥400ng·m L^(-1)肝癌患者的49.15%,差异有统计学意义(P<0.05);高分化肝癌患者SRC-3蛋白表达阳性率为88.24%,明显高于中、低分化患者的47.62%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SRC-3的高表达与肝癌的疾病进展关系密切,可能成为潜在的肝癌分子标志物或治疗靶点。

小鼠腹腔巨噬细胞趋化和吞噬功能中SRC-3的作用研究

目的探讨类固醇受体辅活化子(SRC)-3蛋白在脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞趋化和吞噬功能中的作用。方法健康SPF级雌性野生型(SRC-3+/+)小鼠、SRC-3基因敲除(SRC-3-/-)小鼠各5只,分别分离和原代培养腹腔巨噬细胞,并相应分为SRC-3+/+组和SRC-3-/-组。收集并调整细胞浓度为1×106/ml,接种于6孔板,1 ml/孔,给予10μg/ml LPS刺激,分别在刺激前(0 h)、刺激后4 h和12 h收集腹腔巨噬细胞。通过Western blot测定腹腔巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)的表达,并通过transwell趋化实验和中性红吞噬实验,分别测定腹腔巨噬细胞的趋化指数(CI)和吞噬功能。结果 LPS诱导前两组腹腔巨噬细胞TLR4的蛋白表达和CI差别无统计学意义,但SRC-3-/-组的吞噬功能显著低于SRC-3+/+组(P<0.01);无论是SRC-3+/+组,还是SRC-3-/-组,LPS诱导4 h和12 h后,两组腹腔巨噬细胞TLR4的表达和CI均显著增高(P<0.01),但在相应时间点,SRC-3-/-组与SRC-3+/+组相比差别无统计学意义。LPS刺激4 h后,两组吞噬功能均显著增加(P<0.01),但SRC-3-/-组增加的程度显著低于SRC-3+/+组(P<0.01);相反,LPS刺激12 h后,两组吞噬功能均受到不同程度的抑制(P<0.05或P<0.01),且SRC-3-/-组较SRC-3+/+组抑制的程度更低(P<0.01)。结论 SRC-3调节腹腔巨噬细胞的先天性免疫功能可能与吞噬功能有关,而与其趋化功能无关。

应用RNA干扰技术阻断LNCap细胞SRC-1基因的表达及意义

目的：利用RNA干扰（RNA i）技术,阻断前列腺癌LNCap细胞中类固醇受体共激活分子（SRC-1）的表达,并研究SRC-1基因沉默后对LNCap细胞的影响。方法：将设计好的siRNA,用脂质体法转染LNCap细胞,通过Q-PCR、蛋白免疫印迹检测SRC-1的表达变化,并用CCK-8法检测细胞生长情况的变化。结果：转染SRC-1siRNA 24 h后的前列腺癌LNCap细胞中SRC-1 mRNA的量与空白对照组相比较下降了约35%,转染48 h后下降了约77%,差异具有统计学意义（P〈0.05）。转染24~48 h后LNCap细胞中SRC-1蛋白的表达量（24 h为0.359±0.034;48 h为0.257±0.065）与阴性对照组（24 h为0.782±0.078;48 h为0.766±0.043）、转染试剂组（24 h为0.840±0.013;48 h为0.786±0.051）和空白对照组（24 h为0.816±0.065;48 h为0.805±0.107）相比较明显减少（P〈0.05）。转染24、48、72、96 h后LNCap细胞的生长抑制率分别为25%、52%、55%和60%。结论：SRC-1与LNCap细胞的生长相关。SRC-1在激素非依赖性前列腺癌中的高表达可能参与了前列腺癌雄激素非依赖性的转变过程。抑制SRC-1的表达可能成为临床治疗激素依赖性前列腺癌的方法之一。

类固醇受体辅活化子-3对严重烧伤小鼠肠黏膜屏障功能损伤的影响

目的探究类固醇受体辅活化子-3(SRC-3)对严重烧伤小鼠肠黏膜屏障功能损伤的影响。方法2022年1―4月将SPF级雌性SRC-3基因敲除(SRC-3-/-)小鼠作为对实验组(n=36),并以野生型(SRC-3+/+)小鼠作为对照组(n=36),两组小鼠均诱导建立背部30%体表总面积(TBSA)Ⅲ度烧伤模型。在烧伤后第1、3、5天时,荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖(FITC-dextran)灌胃检测肠道通透性,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平和血浆二胺氧化酶(DAO)活性以及内毒素(ET)水平,苏木精-伊红(HE)和阿尔新蓝-过碘酸-希夫(AB-PAS)染色评估肠黏膜损伤和杯状细胞黏液分泌情况,免疫组织化学(IHC)染色检测黏蛋白2(Muc2)的表达,蛋白质印迹法检测肠黏膜中Muc2、IL-6和TNF-α蛋白表达。结果在烧伤后第1、3、5天时,与对照组(SRC-3+/+小鼠)相比,实验组SRC-3-/-小鼠血清FITC-dextran浓度[(1156.21±107.65)μg/L比(685.14±79.36)μg/L、(1425.81±115.36)μg/L比(743.72±82.29)μg/L、(1613.27±120.94)μg/L比(824.35±85.44)μg/L]、血浆DAO活性和ET水平、肠黏膜损伤评分、PAS+杯状细胞数量、血清和肠黏膜中IL-6、TNF-α水平显著升高,AB+杯状细胞数量、肠黏膜中Muc2表达水平显著降低(P<0.05)。结论SRC-3缺失可以在严重烧伤后损害杯状细胞的分化成熟,减少肠黏液的合成与分泌,加重肠黏膜屏障功能障碍。

BAP-SRC-1融合蛋白的表达及其在药物代谢酶调控研究中的应用

目的获得活性表达的细菌碱性磷酸酶(bacterial alkaline phosphatase,BAP)基因和人甾体受体辅活化因子-1(steroid recep- tor coactivator-1,SRC-1)的融合蛋白,应用于辅活化因子与核受体的结合研究。方法从Escherichia coli JM83基因组和人肝总RNA中分别扩增获得BAP基因和SRC-1的186个氨基酸对应的基因序列(简称SRC186)。用重组技术,构建BAP-SRC186- pET28a融合基因表达载体,在Escherichia coli Rosetta(DE3)中,以IPTG低温诱导表达。以对硝基苯磷酸盐(p-nitrophenyl-phos- phate,PNPP)为底物进行活性测定。活性表达的BAP-SRC186融合蛋白被应用于辅活化因子与核受体的结合研究。结果获得可溶性融合蛋白BAP-SRC186。该融合蛋白的BAP比活为(0.176±0.013 4)μmol·min-1·mg(pro)-1 在利福平存在的情况下,BAP-SRC186能与孕烷X受体配体结合域(pregnane X receptor ligand binding domain,PXRLBD)发生利福平剂量依赖性的相互作用,作用强度通过BAP的显色反应可方便地检测结论BAP融合蛋白与核受体的结合研究为药物代谢酶调控的体外研究开辟了新的思路。

SRC-1对异位内膜雌激素调控的CXCL12表达的影响

目的研究子宫内膜异位症患者的异位内膜中类固醇激素受体辅活化子-1(SRC-1)和趋化因子配体12(CXCL12)的表达水平,从而了解SRC-1对异位子宫内膜雌激素(E2)调控的CXCL12表达的影响。方法 2014年9月—2016年9月,方便选择在苏州大学附属第一医院妇科因内异症接受手术治疗,术后标本证实为内异症的15例患者的异位内膜及同期放置宫内节育器的无内异症且月经周期正常的健康妇女10名的正常内膜,应用实时荧光定量RT-PCR方法比较正常子宫内膜和异位子宫内膜在月经的增生期和分泌期SRC-1和CXCL12m RNA表达水平。ELISA检测沉默异位内膜SRC-1的表达对雌激素诱导异位内膜基质细胞表达CXCL12的影响。结果正常子宫内膜基质细胞中SRC-1和CXCL12的表达呈现周期性变化,而异位内膜这两种因子的表达并没有周期性的改变。异位内膜SRC-1和CXCL12m RNA的表达与正常内膜相比明显升高。沉默异位内膜SRC-1表达后,E2诱导的CXCL12表达下降50.04%(P<0.05)。结论类固醇激素受体辅活化子调控异位内膜表达CXCL12的作用中,SRC-1是雌激素的主要辅激活化子。

白介素-6经SRC-1诱导卵巢癌细胞对他莫昔芬耐药的机制研究

目的研究白介素-6(IL-6)诱导下卵巢癌细胞对他莫昔芬(TAM)产生耐药的分子机制。方法应用不同质量浓度的IL-6处理A2780细胞,应用编码正义IL-6 cDNA和反义IL-6 cDNA的质粒分别转染A2780细胞和CAOV-3细胞,RT-PCR和Western Blot法检测外源性和内源性IL-6对卵巢癌细胞类固醇受体共激活因子-1(SRC-1)和SRC-3的mRNA和蛋白表达的影响。应用编码SRC-1的质粒和SRC-1 shRNA分别转染A2780细胞和CAOV-3细胞,Western Blot法检测SRC-1的蛋白表达,MTT法检测SRC-1的蛋白表达对细胞TAM敏感性的影响。结果外源性和内源性过表达IL-6均可明显促进A2780细胞SRC-1的mRNA和蛋白表达,而对SRC-3表达无影响;抑制IL-6表达可下调CAOV-3细胞SRC-1的mRNA和蛋白水平,而对SRC-3表达无影响。过表达SRC-1的A2780细胞对TAM的耐药性增加,抑制SRC-1表达的CAOV-3细胞对TAM的敏感性增加。结论IL-6可能通过促进SRC-1的表达进而活化雌激素受体信号通路,诱导卵巢癌细胞对TAM耐药。

子宫内膜异位症组织SRC-1、ER与PR表达及意义

目的探讨类固醇受体辅活化因子-1(SRC-1)、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)在卵巢子宫内膜异位症(EMs)病人在位和异位内膜中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学SABC法,对45例EMs病人在位和异位内膜及42例对照组正常内膜中的SRC-1、ER、PR进行染色,并利用图像分析系统测定其灰度值。结果SRC-1在在位内膜中的表达显著高于异位内膜和对照组内膜,差异有显著性(t=8.210、7.260,P<0.05);SRC-1在在位内膜增殖期和分泌期中的表达强度均显著高于相应期别的异位内膜及对照组内膜(F=58.641、7.650,q=4.162～12.052,P<0.01)。ER、PR在异位内膜增殖期的表达均显著低于同期对照组及在位内膜组(F=65.08、59.42,q=11.661～14.500,P<0.01);对照组内膜中SRC-1、ER、PR在增殖期表达显著高于分泌期(t=5.909～10.183,P<0.01)。SRC-1、ER、PR在EMs的表达与rAFS分期差异均无显著性(t=1.352～1.838,P>0.05)。在位内膜中SRC-1与ER的表达强度呈正相关(r=0.779,P<0.05)。结论SRC-1、ER、PR在在位和异位内膜中的表达异常可能与EMs的发生发展有关。

补肾壮骨颗粒对去势大鼠骨密度和SRC-3及PGC-1α表达的影响

目的研究补肾壮骨颗粒对去势大鼠骨密度和血清、骨髓组织中类固醇受体辅助激活因子3(SRC-3)及过氧化物酶体增殖物活化受体γ协同刺激因子-1α(PGC-1α)表达的影响。方法将40只大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、阿仑膦酸钠组,每组10只。模型组、中药组、阿仑膦酸钠组均建立去卵巢骨质疏松模型,造模4 d后,中药组给予补肾壮骨颗粒2.5 mg/kg灌胃,阿仑膦酸钠组给予阿仑膦酸钠7 mg生药/kg灌胃,假手术组和模型组给予10 mL/kg生理盐水灌胃。连续干预12周后取血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测4组大鼠血清SRC-3及PGC-1α水平;处死大鼠,运用小动物双能X射线骨密度仪测量4组大鼠股骨离体骨密度(BMD),实时荧光定量PCR法检测4组大鼠骨髓组织中SRC-3 mRNA及PGC-1αmRNA表达量。结果模型组、中药组、阿仑膦酸钠组血清SRC-3、PGC-1α水平及SRC-3 mRNA、PGC-1αmRNA表达量均明显低于假手术组(P均<0.05),中药组均明显高于模型组和阿仑膦酸钠组(P均<0.05);阿仑膦酸钠组SRC-3 mRNA表达量明显高于模型组(P<0.05),而血清SRC-3、PGC-1α水平和PGC-1αmRNA表达量与模型组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。中药组和模型组大鼠骨密度均明显低于假手术组(P均<0.05),中药组和阿仑膦酸钠组骨密度均明显高于模型组(P均<0.05),中药组与阿仑膦酸钠组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论补肾壮骨颗粒可能通过提高去势大鼠血清及骨髓组织中SRC-3和PGC-1α分子及基因表达水平而促进骨形成,从而提高骨密度。

骨质疏松椎体压缩性骨折患者SRC-3、PGC-1α水平与骨密度的相关性

目的:探讨骨质疏松椎体压缩性骨折(OVCF)患者血清SRC-3、PGC-1α的水平及其与骨密度(BMD)的相关性。方法:将2014年5月~2016年5月我院骨科收治的64例OVCF患者作为观察组,同期匹配选择64例骨质疏松症且未合并骨折者作为对照A组及64例健康体检者作为对照B组。X线骨密度仪测定患者的腰椎骨密度,ELISA法测定患者血清SRC-3、PGC-1α的水平。结果:观察组患者的BMD值低于对照A组和对照B组,差异有统计学意义(P<0.05),对照A组的BMD值低于对照B组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者的血清SRC-3、PGC-1α水平分别为(0.186±0.056)ng/m L、(1.84±0.53)ng/m L,均低于对照A组[(0.347±0.068)ng/m L、(2.95±0.47)ng/m L]和对照B组[(0.713±0.072)ng/m L、(4.88±0.71)ng/m L],差异均有统计学意义(P<0.05),对照A组的SRC-3和PGC-1α水平均低于对照B组,差异有统计学意义(P<0.05)。OVCF患者的BMD值与血清SRC-3和PGC-1α水平均呈正相关(r=0.437,0.526,P<0.05)。结论:OVCF患者的血清SRC-3和PGC-1α水平较低,且BMD与其密切相关,SRC-3和PGC-1α可能参与了OVCF的病理生理过程。

姜黄素调节Na/K-ATPase/Src信号通路保护LLC-PK1细胞缺氧复氧损伤

目的:阐明姜黄素作为Na/K-ATPase(NKA)不完全促进剂,通过影响NKA/类固醇受体辅助活化因子(steroid receptor coactivator,Src)受体复合物的活化保护细胞免于缺氧复氧损伤。方法:通过酶筛选实验明确姜黄素对NKA活性和构型的影响,利用缺氧复氧模型模拟细胞氧化应激损伤。姜黄素预保护猪肾上皮LLC-PK1细胞1 h后进行缺氧1 h复氧3 h处理,检测胞外乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力、细胞活力以及Src、p-Src、细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinases,Erk)、p-Erk蛋白表达情况。结果:姜黄素能够抑制NKA活性,通过促进Src和Erk1/2磷酸化激活NKA/Src信号通路,但乌本苷存在时姜黄素会增加NKA活性,抑制NKA/Src信号通路过度激活。姜黄素预保护能减轻LLC-PK1细胞氧化应激损伤,降低LDH活力,增加细胞活力,并减少Src、Erk磷酸化蛋白表达。结论:姜黄素对NKA/Src信号通路具有双向调节作用,姜黄素可以通过对NKA/Src信号通路的调节保护细胞免于缺氧复氧损伤。