甜叶菊中甜菊素提取工艺研究

建立了从甜叶菊中提取药用辅料甜菊素的方法。以甜菊素的收率和含量为考察指标,采用L9(34)正交实验优化了乙醇提取工艺参数,提取液进一步纯化,并对其纯化步骤进行了优化和评价。实验结果表明,最佳提取工艺条件为90%的乙醇(v/v)回流提取3次,第1次用8倍量乙醇提取2h,第2次用6倍量乙醇提取1.5h,第3次用5倍量乙醇提取1h;再经膜过滤,滤液以0.3BV/h的流速先后经过阳、阴离子交换树脂,分别用50%乙醇(v/v)溶液洗脱,最后用80%乙醇(v/v)醇沉24h,可得质量分数达95.0%以上的甜菊素。该工艺稳定可行,适合于工业化大生产。

甜菊素中总甜菊糖苷的定量分析方法之比较

甜菊糖苷在药用辅料中被称为甜菊素,其总甜菊糖苷的定量分析依据中国药典的容量分析法;而在食品应用中,总甜菊糖苷的定量分析依据国标GB8270-2014的反相HPLC法。两类方法的检测原理和结果不尽相同,因而会给实际应用带来困扰。本文分别采用容量分析法、正相HPLC法和反相HPLC法测定七种市售甜菊素和一种葡萄糖基甜菊糖苷中的总甜菊糖苷含量;并以红外光谱分析上述甜菊糖样品和其他合成甜味剂。实验结果表明,个别市售甜菊素中可能有外加其他甜味剂。分别依据药典和国标的方法分析所试样品的总甜菊糖苷含量,依据药典所得结果相对依据国标所得结果基本为负偏差,最大相对偏差可达-16.04%。容量分析法因为其最终结果以斯替夫苷当量计算,所以比较适用于测定平均分子量接近斯替夫苷分子量的产品;而液相色谱法由于考虑了11种甜菊糖苷,与实际结果将较为接近。建议用反相HPLC法检测甜菊素中总甜菊糖苷的含量。

甜菊素对RANKL诱导的破骨细胞分化和功能的影响

目的探讨甜菊素在体外对破骨细胞活性的影响及其作用机制。方法原代单核细胞提取自成年C57BL/6小鼠肱骨和股骨中,采用CCK-8法检测甜菊素对正常细胞存活率的影响,TRAP染色研究甜菊素对RANKL诱导的破骨细胞生成的作用;运用靶点预测和分子对接技术寻找甜菊素的潜在作用靶点,并采用Western blot法验证甜菊素对预测靶点表达的影响;采用RT-qPCR、Western blot等方法研究甜菊素对NF-κB通路中关键蛋白IκBα、破骨细胞溶骨相关基因(Acp5,V-ATpase-d2,CTSK)和调节分化相关转录因子(NFATc-1,c-Fos)表达的影响。结果10μmol/L甜菊素能够抑制破骨细胞生成(P<0.01),而且几乎无细胞毒性(P>0.05);甜菊素与AKR1B1结合较稳定,而且能抑制AKR1B1下游通路相关蛋白IκBα的表达及破骨细胞溶骨相关基因、调节分化相关转录因子的表达(P<0.01)。结论甜菊素在体外对破骨细胞活性有较好的抑制作用,具有被开发为治疗破骨细胞溶骨功能亢进导致的骨质疏松药物的前景。

金振口服液矫味工艺研究

目的研究金振口服液矫味的最佳方法。方法通过L9(34)正交试验,以胆红素质量浓度变化率为指标,对活性炭吸附去除水牛角与人工牛黄提取液臭味的方法进行优化;采用模糊数学综合评价法对不同矫味剂配方进行评价。结果最佳吸附条件:水牛角与人工牛黄合并提取液调pH值7.0,温度50℃,加0.25%活性炭,搅拌10 min;最佳矫味剂配方:每1 000 mL金振口服液中加入乙基麦芽酚15.0 mg、CMC-Na 5.0 g、甜菊素1.0 g、桔子香精0.5 g。结论本实验所得到的矫味配方为金振口服液的进一步规模化生产提供重要参考。

梯度洗脱HPLC法测定盐酸氨溴索口服溶液中甜味剂含量

目的:建立高效液相色谱法测定盐酸氨溴索口服溶液中4种甜味剂(安赛蜜、糖精钠、阿司帕坦、甜菊糖/甜菊素)的方法,并在2011年度国家药品质量评价性抽验工作中,按照所建方法对盐酸氨溴索口服溶液中的4种甜味剂进行测定和评价。方法:采用Agilent SB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm)柱,流动相A为0.02 mol.L-1磷酸二氢铵缓冲液(pH 4.4),流动相B为乙腈,流速1.0 mL.min-1,线性梯度洗脱,检测波长为200 nm(糖精钠、阿司帕坦、甜菊糖/甜菊素)和226 nm(安赛蜜)。结果:安赛蜜、糖精钠、阿司帕坦和甜菊糖/甜菊素分离完全,各辅料均无干扰,线性范围分别为0.00561～0.225 mg.mL-1(r=1.0000)、0.00106～0.106 mg.mL-1(r=1.0000)、0.00522～0.209 mg.mL-1(r=0.9999)和0.00517～0.296 mg.mL-1(r=1.0000);检测限分别为0.4 ng,0.4 ng,1.6 ng和15.5 ng;定量限分别为1.3 ng,1.5 ng,5.2 ng和51.7 ng;平均加样回收率(n=6)分别为98.8%(RSD=0.5%),99.5%(RSD=0.3%),100.6%(RSD=0.2%),99.1%(RSD=1.1%)。结论:本法具有较高的选择性,结果稳定,通过测定甜味剂的含量可监控制剂生产过程中辅料投料是否与处方一致。

两种掩味剂对苦参水煎液的掩味作用考察

目的：考察甜菊素及新橙皮苷二氢查尔酮对苦味药水提液的抑苦效果。方法：以苦参水煎液为研究载体，采用经典人群口尝评价方法，考察苦参水煎液加入不同质量分数掩味剂前后苦度值的变化情况。结果：甜菊素质量分数在0．075％～0．675％时，可使苦参水煎液苦度级别由Ⅳ逐步下降至Ⅲ，苦度值下降了0．58～1．26，下降比例14．0％～30．5％，至0．675％时抑苦效果最强，更高质量分数时抑苦效果无显著增加；新橙皮苷二氢查尔酮质量分数在0．003％～0．081％时，可使苦参水煎液的苦度级别由Ⅳ下降至Ⅲ，苦度值下降0．44～1．50，下降比例10．65％～36．32％；药液下降的苦度值与掩味剂质量分数的对数均成正比。结论：2种掩味剂对苦参水煎液的掩味效果不够理想，但均能在一定程度上降低苦参水煎液的苦度。

丹苓颗粒的成型工艺

目的:确定丹苓颗粒的最佳成型工艺。方法:以成型率、吸湿率、休止角、溶化性以及矫味剂的添加为试验指标,筛选丹苓颗粒的最佳补料和配比,并测定该工艺所得成品的临界相对湿度。结果:最佳成型工艺为浸膏∶微晶纤维素∶茯苓药粉(7∶2∶1),并添加颗粒的0.5%甜菊素此时制出的颗粒成型率高、溶解度好、吸湿率低、流动性好、口感较佳。且该制剂的临界相对湿度为75%。结论:本法确定成型工艺较好,可为其生产提供依据。

反相高效液相色谱法测定枯草杆菌二联活菌颗粒中甜菊糖苷的含量

目的建立反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定枯草杆菌二联活菌颗粒中甜菊糖苷的含量。方法选用Agi Lent Zobax SB-C18（250 mm×4.6 mm,5μm）为色谱柱,线性梯度洗脱,流动相为乙腈-0.002 mol/L磷酸溶液;检测波长为210 nm;流速1.0 ml/min;进样量10μl;柱温30℃。结果甜菊糖苷的线性范围为5.160~103.2 g/ml（r=0.9999,n=7）;提取回收率为99.04%（RSD为0.6%,n=6）。结论本法操作简便、准确,可用于枯草杆菌二联活菌颗粒的质量控制。