胃癌前病变病证结合动物模型研究进展

中医药在胃癌前病变(precancerous lesions of gastric cancer,PLGC)诊疗中发挥着重要作用,病证结合动物模型是进行PLGC相关实验研究的前提。文章从模型动物选择、胃癌前病变疾病模型和病证结合模型三方面,对近年来PLGC病证结合模型的制备方法进行了归纳分析,介绍了脾胃虚弱、胃阴不足、肝胃气滞、脾胃湿热和胃络瘀血5个常见PLGC病证结合模型的造模方法,并对当前模型制备中存在的问题提出了思考与展望。

基于病证结合探讨常见脾胃病动物模型的构建与评价

动物实验对促进新药研发和明确药理机制具有重要意义,随着中医药现代化发展,病证结合动物实验被越来越多的学者广泛应用,动物模型的构建与评价体系也在逐步完善。脾胃系疾病发病率高,不易治愈,中医药治疗脾胃病具有独特优势,为深入研究中医中药治疗脾胃病的分子机制及药效效果,制备其相关的病证结合动物模型意义重大。单纯西医疾病模型具有一定局限性,病证结合动物模型符合中医辨证论治原则,对脾胃病的病机阐明和新药研发尤为重要。因此,笔者通过对常见脾胃病病证结合动物模型各证候的构建方法和评价系统进行归纳总结,阐述脾胃病病证结合动物模型的发展概况和建立特点,以期解决动物实验模型病证评价指标的关键问题,完善病证造模与测量标准,为研究人员提供参考依据,推动中医药治疗脾胃病进一步发展。

Gastric cancer induced by N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine in rat with ulcers and expressions of ras and c-erbB2 genes

Objective: To observe the series of pathological changes during the development of gastric adenocarcinoma in ulcerative rats induced by N-methyl-N′-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG), and the expression profile of related oncogenic protein.Methods: MNNG was administered in rats with ulcers due to acetic acid treatment to induce gastric cancer, and the protein expressions of ras and c-erbB2 genes in the ulcer were examined immunohistochemically along with pathological examination.Results: The incidence of gastric adenocarcinoma in the model group reaches 40% (6/15), while none of the rats developed cancer in the control group with ulcers.Positive expressions of the proteins of p21ras and c-erbB2 were observed in the tissues undergoing canceration in the 6 rats of model group, but were not observed in the 5 control rats; p53 protein expression, however, failed to be detected in both groups.Conclusion: A new animal model of gastric cancer has been established in rats with gastric ulcer after MNNG treatment, which may facilitate the pharmacological research of gastric cancer.

基于中、西医临床病证特点的胃癌动物模型分析

胃癌死亡率居全球第四,因此对于胃癌发病机制、发展、转移、治疗的研究尤为重要。基于胃癌的中、西医临床特点,本研究对现应用的动物模型进行总结分析,根据中、西医临床诊断特点分析动物模型的临床吻合度。对于模型的评价,西医方面重视病理学、细胞学,其他方面关注较少;中医方面则病证结合胃癌动物模型目前研究较少,主要采用的是“以药测证”的方式进行发病机制、药物研究。本研究在分析胃癌动物模型临床吻合度的同时,分析、总结各种模型的优缺点及应用范围,并提出存在的问题,使胃癌动物模型进一步完善,更加符合临床病证要求,为胃癌的中西医结合的基础研究提供可供参考的动物模型,更好地服务于中、西医的基础研究。

胃癌组织肾筋膜下NOD/SCID小鼠移植瘤模型的建立及其MRI表现

目的采用内镜下活检胃癌组织块肾筋膜下移植法建立NOD/SCID小鼠胃癌异位移植瘤模型,观察其MRI表现,为研究胃癌个体化治疗临床前实验提供适宜的动物模型。材料与方法将2020年12月—2021年2月在兰州大学第二医院经病理及影像确诊的9例晚期胃癌患者内镜下活检的约1 cm3新鲜肿瘤组织种植到NOD/SCID小鼠右侧肾筋膜下。种植后每周行1次MRI检查至发现肾筋膜下成瘤,继续观察4周,采用T2WI序列测量并计算肿瘤体积,然后处死小鼠,取出瘤组织,将游标卡尺测量的肿瘤体积与最后一次MRI测量结果进行对比,并对移植瘤进行病理学检查。结果异位移植瘤T1WI呈等低混杂信号,T2WI呈等高信号,增强后明显不均匀强化,肿瘤向前挤压肾脏变形。MRI与游标卡尺测量肿瘤体积分别为(512.12±25.52)mm^(3)、(506.95±29.24)mm^(3),差异无统计学意义(t=0.808,P=0.436)。病理结果显示移植前后肿瘤组织学保持一致性。结论本研究建立的胃癌异位移植瘤模型保持了原发肿瘤的组织学特性,可活体“再现”人类疾病;MRI能够敏感地发现肾筋膜下是否成瘤,且准确量化肿瘤大小,本模型可作为观察人类胃癌个体化治疗临床前实验的动物模型。

N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍复合法构建胃癌前病变气虚血瘀证大鼠模型

目的建立胃癌前病变(PLGC)气虚血瘀证病证结合大鼠模型。方法将30只SD大鼠分为正常对照组(14只)和模型组(16只),模型组采用N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)联合饥饱失常、乙醇灌胃、氨水自由饮用、雷尼替丁饲料喂养五因素复合造模法建立PLGC大鼠模型。观察大鼠表征进行证候判定,检测大鼠体质量、24 h进食量和24 h饮水量,HE染色观察胃组织病理变化。结果与正常对照组比较,模型组大鼠出现活动度减少、倦怠嗜卧、眼球黯红、毛枯黄无泽、大便不成形、唇青紫、舌黯红、尾部瘀点等表征;第6周开始体质量明显下降(P<0.01),24 h进食量和饮水量明显减少(P<0.05,P<0.01);胃黏膜腺体排列紊乱,可见大量杯状细胞,细胞浆嗜碱性,细胞核大、深染、不规则,黏膜肌层浸润破坏。结论MNNG复合造模法可成功复制PLGC气虚血瘀证大鼠模型,本研究可为构建PLGC中医证候模型提供新方法。

采用OB胶粘贴法建立人胃癌裸鼠原位种植转移模型

背景与目的建立理想的动物肿瘤移植模型是进行肿瘤防治研究的重要前提,目前公认的胃癌造模的方法为采用完整组织块的“皮下移植法”、“胃囊法”,但传统的造模方法目前尚存在操作复杂、成活率低等缺点,本研究拟采用“OB胶粘贴法”更简便地建立人胃癌裸鼠原位移植模型。方法以反复接种传代于裸鼠皮下的SGC鄄7901人胃癌细胞株建立的移植瘤组织块为材料,将其用生物吻合“OB胶”原位粘贴于裸鼠胃壁,并与传统“胃囊法”、“皮下移植法”比较观察移植肿瘤的生长情况、移植成功率和自发转移的发生率。结果“OB胶粘贴法”组原位移植成功率为100%,局部淋巴结转移率为100%,肺转移发生率为62.5%,肝转移发生率为87.5%,腹膜转移发生率为87.5%,较之胃囊法(分别为100%、100%、50.0%、50.0%和33.3%),除腹膜转移率升高外,远处脏器转移差异无显著性,但成活率高。皮下移植组未发生局部浸润及远处转移。结论“OB胶粘贴法"能更简便地建立人胃癌高转移模型,重现临床转移过程。

重组人内皮抑素对裸鼠胃癌瘤株生长的影响

目的 探讨重组人内皮抑素 (rhES)对胃癌裸鼠瘤株生长的影响。方法 随机将 12只胃癌荷瘤裸鼠分为实验组与对照组。对照组瘤周注射生理盐水 0 .1ml ,实验组瘤周注射rhES 2mg/kg ,1次 /d ,连用 10d。自用药开始 ,每 5d测量肿瘤体积 ,直至用药结束后 5d ,检测肿瘤组织VEGF ,bFGF ,PDGF ,VEGF c ,VEGFR 3 ,FVIIIAg ,PCNA和bcl 2及肿瘤细胞凋亡指数 (AI) ;计算抑瘤率 ,肿瘤缩小率 ;分析对照组与实验组AI ,肿瘤体积及微血管密度以及实验组治疗前后肿瘤体积差异的显著性。结果 用药前实验组肿瘤体积与对照组差别无统计学意义。用药后实验组肿瘤体积迅速减小 ;用药后 5d肿瘤体积与对照组相比明显缩小 (P =0 .0 0 0 1)。实验组肿瘤用药后较用药前明显缩小 (P =0 .0 0 15 )。抑瘤率为91.2 % ,肿瘤缩小率为 5 3 .5 %。实验组VEGF ,bFGF ,VEGF c ,VEGFR 3 ,bcl 2及PDGF表达强度均低于对照组 ;实验组AI高于对照组相 (P =0 .0 0 0 0 ) ;MVD低于对照组相 (P =0 .0 0 2 2 ) ;HE染色坏死区多于对照组。结论 rhES可减少肿瘤血管生成 ,增加肿瘤细胞凋亡 ,抑制肿瘤生长。

多因素诱导构建大鼠胃癌模型

目的探寻一种构建动物胃癌模型成功率较高的方法,为胃癌发生转移的实验研究提供可靠的动物模型。方法在饮水中添加致癌剂MNNG、增溶剂吐温20及维生素D3喂饲大鼠,并应用高张盐水间歇辅以刺激。结果24周见黏膜层溃疡及增生,28周见黏膜内及黏膜下癌,32周见癌组织侵入肌层甚至浆膜层。结论在常规应用致癌剂MNNG的基础上,多因素刺激大鼠的胃黏膜可成功诱发大鼠胃癌,且诱癌率较高。

针刺足三阳经穴对胃黏膜损伤家兔生长抑素受体基因表达影响的比较

目的 :比较针刺足三阳经对胃黏膜损伤的保护作用及对生长抑素受体基因表达的影响 ,探讨经脉脏腑相关的特异性。方法 :乙醇灌胃造成家兔胃溃疡模型后 ,采用经络刺激仪进行针刺。治疗结束后用放射免疫及PC PCR法测定胃黏膜表皮生长因子 (EGF)、生长抑素 (SS)及生长抑素受体 (SSR1mRNA )表达。 结果 :模型组EGF含量较正常组明显降低 ;胃黏膜损伤指数、SS含量及SSR1mRNA表达则显著升高 (P <0 0 1)。与模型组比较 ,胃经组EGF明显升高 ,胃黏膜损伤指数、SS含量及SSR1mRNA表达显著降低 (P <0 0 1)。但胆经及膀胱经组与模型组比较上述指标未得到改善 ,与胃经组比较差异有非常显著性意义 (P <0 0 1)。结论 :针刺足三阳经以胃经组对家兔胃黏膜损伤保护作用最强 。

珍香胶囊对裸鼠原位移植的人胃癌的抗癌作用

目的 :了解珍香胶囊对裸鼠原位移植的人胃癌的疗效 ,为临床试验提供科学依据。方法 :用珍香胶囊分别对人胃低分化腺癌SGC 790 1以及人胃高分化腺癌MKN 2 8裸鼠原位移植模型进行治疗。实验分 5组 :珍香胶囊高浓度组 (480 0mg/kg·bw)、中浓度组 (2 40 0mg/kg·bw)、低浓度组 (12 0 0mg/kg·bw)以及阳性对照组 (丝裂霉素C 1mg/kg·bw)和阴性对照组 (生理盐水 )。珍香胶囊灌胃给药 ,每天 2次 ,连续给药 40次 ,丝裂霉素C皮下注射给药 ,每 2天 1次 ,共给药 10次。实验以荷人胃癌裸鼠的生命延长率、胃指数、血清唾液酸 (SA)含量作为疗效评价指标。实验重复 3次。结果 :①珍香胶囊高、中、低三剂量对荷人胃癌SGC 790 1裸鼠生命延长率分别为 5 7.78%～ 72 .0 3% (P <0 .0 1) ,42 .2 2 %～ 5 6 .5 9% (P <0 .0 1)、2 8.13%～ 33.79%(P <0 .0 1) ,阳性对照丝裂霉素C对荷人胃癌SGC 790 1裸鼠生命延长率为 5 2 .5 8%～ 6 0 .0 2 % (P <0 .0 1) ;②经珍香胶囊高、中剂量治疗后 ,荷人胃癌MKN 2 8裸鼠的胃指数、血清SA含量显著减少 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 )。结论 :在裸鼠可耐受的剂量下 ,珍香胶囊对裸鼠原位移植的人胃低分化腺癌SGC 790 1以及人胃高分化腺癌MKN 2 8均有明显的抗癌作用 ,且随着剂量增加 ,其抗癌疗效增?

兔移植性肝癌伴门静脉癌栓模型的制作

目的 探讨兔移植性肝癌伴门静脉癌栓模型的制作方法及相关病理特征。材料与方法 新西兰大白兔36只 ,分为 2组 ,采用经皮门静脉穿刺或剖腹门静脉插管的方法 ,直接种植VX2瘤株于兔门静脉内。分别于术后2～ 5周行B超、CT及门静脉造影 ,并分期处死后进行病理检查 ,观察肿瘤生长的影像学与病理特征。结果 两种方法接种的成功率分别为 89%、94 % ;术后 2周瘤体直径≤ 1 .0cm ,局限于门静脉分支内 ,3周肿瘤直径 >1 .0cm且向肝内生长 ,4～ 5周肿瘤在肝内呈弥漫性生长、癌栓累及门静脉主干或一级分支。结论 以VX2瘤株直接种植于兔门静脉能成功地制作肝癌伴门静脉癌栓模型 。

胃黏膜保护剂对实验性胃溃疡愈合质量的影响

目的:探讨胃黏膜保护剂对实验性胃溃疡愈合质量的影响。方法:建立实验性乙酸致大鼠胃溃疡模型,成模3 d后分5组,即模型组、对照组、替普瑞酮组、奥美拉唑组、替普瑞酮与奥美拉唑联合治疗组(简称联合治疗组)。给药治疗14 d,取其标本,评估再生黏膜组织学及功能成熟度,以判定溃疡愈合质量。结果:奥美拉唑组和联合治疗组溃疡指数最小,溃疡抑制率最高。替普瑞酮组和联合治疗组大鼠再生黏膜厚度增加、囊状扩张腺体数目减少,肉芽组织炎症细胞浸润数量减少、微血管数量增加、胶原面积增加,黏膜中性黏液和氨基己糖分泌增多,血浆PGE2分泌增多,免疫组化染色中黏膜局部EGFR、bFGF阳性细胞表达增强。结论:制酸剂和胃黏膜保护剂均能促进溃疡愈合,胃黏膜保护剂替普瑞酮能明显提高溃疡再生黏膜组织学和功能成熟度,促进高质量的溃疡愈合,若与奥美拉唑联合使用效果更佳。

沙土鼠幽门螺杆菌感染胃炎、胃溃疡动物模型的建立及除菌治疗前后炎症和细胞增殖的变化

目的通过Ｈｐ的接种，建立沙土鼠Ｈｐ感染模型，再现同一病变，并观察除菌治疗前后炎症细胞浸润及细胞增殖的变化，研究Ｈｐ的致病过程．方法用组织化学、免疫组织化学及电镜检测病理组织学变化．结果Ｈｐ感染早期２ｗｋ以幽门粘膜为中心可见大量炎性细胞浸润，随着感染时间的增加，炎症越来越重．感染３ｍｏ后幽门部小弯附近可见溃疡出现．感染的早期以中性粒细胞浸润为主的急性炎症改变，随着感染的持续转变为以淋巴细胞浸润为主的慢性炎症改变及淋巴滤泡的广泛形成．并可见大量的肥大细胞存在，提示肥大细胞在Ｈｐ感染中起着重要作用，但作用机制不清．炎症处的ＢｒｄＵ标识率明显多于非炎症处，除菌治疗后炎症细胞及ＢｒｄＵ标识率明显减低，提示三联疗法是完全有效的消化性溃疡的治疗剂．结论Ｈｐ可感染沙土鼠导致胃炎、胃溃疡发生，其病理改变与人类类似，沙土鼠是Ｈｐ感染理想的动物模型．

结构型与诱生型一氧化氮合酶在大鼠胃溃疡模型中的表达和活性变化

目的研究结构和诱生型一氧化氮合酶(iNOS和eNOS)在大鼠胃溃疡模型中的表达和活性变化,以探讨它们在溃疡病理中的表达规律及所起的作用.方法采用乙酸胃腔内注射方法制备大鼠胃溃疡模型,采集溃疡诱导后1 h～15 d的溃疡基底、边缘和正常胃组织标本,采用RT-PCR方法和Westernblot方法测定组织中iNOS和eNOS的nRNA表达及蛋白水平,采用测定组织匀浆液转化L[3H]-精氨酸成L-[3H]一瓜氨酸的能力的方法检测标本的总NOS和iNOS活性.结果乙酸诱导的大鼠胃溃疡模型溃疡基底在1 d～3 d出现自限性的iNOS的高表达和活性,这一时间与炎症高峰出现时间相一致,正常胃组织检测不到iNOS的表达,溃疡愈合期的iNOS表达和活性较低.eNOS的表达和活性水平在整个过程中相对稳定.结论机体在损伤后能够自限性诱导和调节iNOS的表达,而主要来源于iNOS活性的NO在胃溃疡的损伤和炎症到愈合的病理过程中起到重要作用.

人胃癌细胞悬液裸小鼠原位移植模型建立及其部分生物学特性

目的 建立人胃癌裸小鼠原位移植模型 ,观察其部分生物学特性。方法 用人胃低分化腺癌细胞 (SGC- 790 1)悬液种植于裸小鼠胃壁 ,观察原位移植瘤的生长情况、移植成功率和自发转移的发生率。结果 原位移植成功率 (成瘤率 )为 6 7%。移植瘤的局部淋巴结转移率 85 % ,远处淋巴结转移率 5 0 % ,肝转移发生率为 30 %。荷瘤鼠的中位生存期为 16周 ,晚期出现消瘦和全身衰竭。结论 该裸小鼠原位移植模型具有人胃癌自然生长过程的特点 ,但还不能达到理想的肿瘤移植

CIK细胞对人原发性胃恶性淋巴瘤生长及肝转移的抑制作用

目的建立人原发性胃恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植肝转移模型,探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对胃恶性淋巴瘤生长及其肝转移的抑制作用。方法取原发性胃恶性淋巴瘤患者手术切除的新鲜组织标本,采用外科原位移植技术移植到裸小鼠胃壁黏膜下层,建立人原发性胃恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植肝转移模型。应用采血机分离出健康人、胃恶性淋巴瘤患者外周血单个核细胞(PBMC),进行体外培养,通过加入重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)、重组人白细胞介素-2(rhIL-2)和抗CD3单克隆抗体(anti-CD3McAb)刺激,分别制备出CIK细胞和淋巴因子活化的杀伤细胞(LAK)。用CIK和LAK细胞实验治疗胃恶性淋巴瘤,对比观察不同来源的两种免疫效应细胞抑制其生长及肝转移的疗效。结果成功建立了人原发性胃恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植肝转移模型。在连续给药20天(0.3ml/d)后,健康人LAK细胞组(2×1010/ml)、健康人CIK细胞组(2×1010/ml)、胃淋巴瘤患者CIK细胞组(1×1010/ml)和胃淋巴瘤患者CIK细胞组(2×1010/ml)的抑瘤率分别为39.28%、53.57%、40.38%、56.42%。生理盐水对照组、健康人LAK细胞组、健康人CIK细胞组、胃淋巴瘤患者CIK细胞组(1×1010/ml)和胃淋巴瘤患者CIK细胞组(2×1010/ml)的肝转移率分别为100.0%、62.5%、50.0%、62.5%、37.5%。结论人原发性胃恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植肝转移模型可用于胃恶性淋巴瘤的发病机制、侵袭、转移及实验治疗的研究。健康人LAK细胞、健康人CIK细胞和胃恶性淋巴瘤患者CIK细胞均具有抑制胃恶性淋巴瘤生长和抗肝转移的作用,且患者来源的CIK细胞抗瘤作用最强。

转染人乳头瘤病毒的宫颈癌U14移植同系小鼠后的生长特性和转移规律

目的 :探讨转染人乳头瘤病毒 (HPV)的小鼠宫颈癌U1 4移植同系小鼠后生长特性和转移规律。方法 :用电穿孔法及阳离子脂质体将HPV 1 6型的早期基因E6 ,E7分别转染小鼠宫颈癌U1 4,筛选、鉴定表达E6 ,E7的转化细胞即E6 +U1 4,E7+U1 4,然后分别经皮下和腹腔移植于同系小鼠 ,观察其生长特性和转移规律。结果 :皮下移植野生型U1 4,E6 +U1 4及E7+U1 4后 ,出瘤时间分别为 5～ 7d ,1 1～ 1 4d及 8～ 1 0d (P <0 .0 5 ) ;平均生存期分别为 2 9d ,43 .3d及 3 5d ;淋巴转移率分别为 90 % ,3 0 %及 40 % ;肺转移率分别为 6 0 % ,1 0 %及 2 0 %。腹腔内移植后 ,荷瘤小鼠平均寿命分别为 1 4.2d ,2 0 .6d及 1 8.3d ;未发现淋巴和肺转移。结论 :转染HPV的小鼠宫颈癌U1 4移植同系小鼠后 ,显示出与移植野生型不同的生长特性和转移规律。该模型为研究以HPVE6 ,E7为靶的免疫或其他方法治疗宫颈癌提供了有价值的动物模型。

脱乙酰壳聚糖对大鼠胃溃疡的抑制和修复作用

目的 :采用胃溃疡动物模型探讨脱乙酰壳聚糖对胃溃疡的抑制及修复作用。方法 :Wistar大鼠分别建立束水应激型 (4 0只 )、乙酸烧伤型 (32只 )和胃黏膜损伤型 (32只 )胃溃疡模型 ,胃溃疡模型动物随机分为对照组 (0 .5 % CMC 10 m L- 1 · kg- 1 )与实验组 (脱乙酰壳聚糖 组 :10 0 g· L- 1 · kg- 1 ;脱乙酰壳聚糖 组 :5 0 g· L- 1 · kg- 1 ;雷尼替丁组 :3g· L- 1 · kg- 1 ) ,按上述药物剂量灌胃给药 ,观察溃疡指数和溃疡面积。结果 :束水应激型溃疡大鼠溃疡指数脱乙酰壳聚糖 组、 组和雷尼替丁组低于对照组 (P<0 .0 1) ,各实验组间差异无显著性 ;乙酸所致烧灼型胃溃疡和胃黏膜损伤型溃疡大鼠溃疡面积脱乙酰壳聚糖 组、 组和雷尼替丁组小于对照组 (P<0 .0 1) ,各实验组间差异无显著性。结论 :脱乙酰壳聚糖对束水应激型溃疡和乙酸烧伤型溃疡有抑制作用 ,对黏膜损伤型溃疡有修复作用。

三仁汤对脾胃湿热证、湿偏重证大鼠胃动素、胃泌素作用的实验研究

目的:观察三仁汤对脾胃湿热证、湿偏重证大鼠模型血液中胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)的调控作用。方法:将32只大鼠随机分为4组各8只。正常对照组:正常温、湿度下予以普通饲料喂养;湿热组:在湿热环境下予以肥甘饮食饲料喂养;湿偏重组:在湿热组饲养基础上灌服北京产二锅头;三仁汤组:在湿偏重组饲养基础上予以三仁汤。采用放免法测定各组大鼠血液中MTL、GAS的变化。结果:MTL、GAS湿热组、湿偏重组与正常对照组、三仁汤组比较,差异均有非常显著性意义(P<0.01);湿偏重组与湿热组比较,差异有非常显著性意义(P<0.01);三仁汤组与正常对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:三仁汤能对抗湿热证大鼠模型血浆胃动素的升高作用,亦具有调节湿热证大鼠模型血浆胃泌素低下的功能。