放线菌A2菌株代谢产物的研究初报

从渤海海水中分离到一株编号为A2的放线菌,经初步鉴定为链霉菌(Streptomyces)。该菌株产生的代谢产物对许多重要农作物病害具有强烈的抑制作用。采用菌丝生长速率法测定其对小麦赤霉病菌、烟草赤星病菌、番茄灰霉病菌、马铃薯干腐病菌的菌丝生长影响,抑制率达到90%以上;孢子萌发法测定其对烟草赤星病菌、小麦赤霉病菌和马铃薯干腐病菌的孢子萌发的影响,抑制率都在90%以上。盆栽试验结果表明,发酵产物对小麦白粉病的保护和治疗作用分别为98.31%、96.56%。经pH纸色谱和捷克八溶剂系统纸层析实验,初步推定A2所产生的抗生素为碱性水溶性抗生素。

HRSV在人二倍体细胞上的生长动力学研究

目的研究人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)在人二倍体KMB17细胞上的增殖动力学,为病毒的体外细胞大量繁殖创造条件.方法将HRSVA2株接种到人二倍体KMB17细胞,采用微量细胞病变法在不同时间检测病毒的感染性滴度,绘制一步生长曲线;同时,以不同剂量的病毒感染复数(MO)I感染细胞,分析细胞开始出现病变及所有接种孔全部病变的时间,并检测收获物的感染性滴度,确定最佳MOI.结果HRSV在KMB17细胞上的感染增殖一步生长曲线分析提示,该病毒在培养到2～4d后开始病变,第5～10天呈对数增长,其增殖高峰为10～11d,10d后增殖趋于平缓;接种MOI越大,开始出现病变时间及完全病变的时间都越早.接种100、10及1个MOI时,接种后2～3d均出现病变,第6天时三组细胞病变率均为100%,感染性滴度为7.37～7.50lgCCID50/mL,三组之间无明显的差异;接种在0.1、0.01及0.001个MOI时,接种后第4天有30%的细胞出现病变,第8～9天时细胞病变率也均达到100%,感染性滴度在6.50～7.0lgCCID50/mL之间;当接种在0.0001个MOI以下时,接种后第5～6天才出现病变,至第14天时细胞仍未能完全产生病变,发生病变的细胞收获物其感染性滴度仅为6.00～6.12lgCCID50/mL.结论HRSVA2株病毒在KMB17细胞内能良好增殖,其增殖高峰为10～11d,收获物感染性滴度最高可达7.50lgCCID50/mL,接种最佳MOI约为0.1～1.0.

A2菌株发酵液中抑菌成分的分离及结构鉴定

[目的]采用分离手段鉴定A2菌株发酵液中抗菌成分。[方法]采用阳离子交换树脂、CM-Sephadex-C25凝胶层析、离子对液相色谱制备等分离手段对A2菌株发酵液进行分离,通过核磁、质谱对化合物进行结构表征。[结果]分离得到3个化合物(H2、H3、H4),采用抑制孢子萌发速率法和抑制菌丝生长法对3个化合物进行抑菌活性测定,实验结果表明3个化合物对真菌和细菌均有较好的抑制作用。[结论]通过核磁、质谱分析,参考相关文献,化合物H2、H4经结构鉴定分别为链丝菌素D和链丝菌素F。

人呼吸道合胞病毒A_2株在不同细胞中的培养及其影响因素

目的在不同细胞中培养人呼吸道合胞病毒(HRSV),并分析其影响因素,为病毒的大量增殖创造条件。方法将HRSVA2株分别接种至人二倍体KMB17细胞、Vero细胞、人喉癌Hep-2细胞及HeLa细胞进行培养,采用微量细胞病变法检测病毒的感染性滴度,并进行间接免疫荧光试验及合胞体观察。检测吸附时间、维持液pH值和培养温度对病毒增殖的影响。结果4种细胞中,Vero细胞对HRSV最敏感,病变早、病毒感染性滴度可达6.83lgCCID50/ml;KMB17细胞相对敏感性不高,但仍能良好增殖,病毒感染性滴度达6.13lgCCID50/ml;Hep-2细胞及HeLa细胞介于Vero细胞和KMB17细胞之间,病毒感染性滴度也达到6.83lgCCID50/ml。间接免疫荧光试验显示病毒在细胞浆内增殖。吸附时间对HRSV的增殖无明显影响;维持液的pH值对HRSV的增殖及病变特点均有一定的影响,在pH7.0～7.2时可快速引起细胞产生病变,并能达到最高感染性滴度;HRSV在37℃及32℃下培养均能良好地增殖。结论HRSVA2株在KMB17、Vero、Hep-2及HeLa细胞内均可增殖,但敏感性有一定差异,且对培养条件有一定的要求。